The agar Salmonella Shigella juga dikenal sebagai SS agar adalah selektif dan menengah diferensial moderat, terutama dirancang untuk isolasi bakteri enteropathogenic dari genera Salmonella dan Shigella, kedua sampel lingkungan seperti klinis.
Agar SS memiliki komposisi yang kompleks; Itu terdiri dari ekstrak daging, pepton, laktosa, garam empedu, natrium sitrat, natrium tiosulfat, besi sitrat, agar, merah netral, hijau cerah dan air suling. Karena selektivitasnya yang tinggi, sampel dengan flora campuran yang melimpah dapat disemai.
Agar SS dengan koloni Salmonella sp. Sumber: Manurx27, dari Wikimedia Commons
Di laboratorium mikrobiologi, media Salmonella-Shigella banyak digunakan untuk menyelidiki keberadaan Salmonella dan Shigella dalam sampel feses diare, air limbah, air minum dan makanan.
Kadang-kadang perlu untuk menggunakan kaldu pra-pengayaan (kaldu laktosa) dan kaldu pengayaan (kaldu selenite cystine) untuk memulihkan strain Salmonella.
Langkah-langkah ini diperlukan jika diduga ada Salmonella dalam jumlah yang sangat sedikit, atau jika strain tersebut dapat disalahgunakan oleh proses yang biasa terjadi pada produksi industri, terutama makanan olahan. Dianjurkan juga untuk memperkaya sampel tinja dari pasien yang telah diobati dengan antibiotik.
Selanjutnya, kaldu yang diperkaya dapat disemai pada agar Salmonella-Shigella dan media sejenis lainnya, seperti agar xylose, lysine deoxycholate (XLD) dan agar enteric Hektoen (HE).
Dasar
Setiap komponen media kultur Salmonella-Shigella memiliki fungsi tertentu, dan campuran secara keseluruhan memberikan sifat yang mencirikannya.
Kekuatan bergizi
Ekstrak daging dan pepton (dicerna dengan kasein dan jaringan hewan) menyediakan nutrisi yang dibutuhkan (nitrogen, karbon dan vitamin) untuk perkembangan mikroorganisme yang mampu mentolerir komponen lainnya.
Konsistensi
Agar-agar bertanggung jawab untuk memberikan konsistensi padat pada media.
Selektif
Media ini sangat selektif karena mengandung garam empedu, natrium sitrat, dan hijau cerah. Oleh karena itu, menghambat pertumbuhan semua bakteri Gram positif dan sebagian besar basil Gram negatif, termasuk beberapa coliform.
Sedangkan bakteri dari genus Salmonella dan beberapa strain Shigella memang mendukung senyawa tersebut.
Terutama, genus Salmonella sangat resisten terhadap garam empedu, sedemikian rupa sehingga mereka dapat hidup di kantong empedu dari beberapa pasien pembawa yang terus-menerus membuang bakteri di tinja mereka.
Diferensial
Laktosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi yang membantu membedakan strain laktosa yang difermentasi dari yang tidak difermentasi. Sifat ini dibuktikan dengan adanya indikator pH, yang dalam media ini berwarna merah fenol.
Strain fermentasi laktosa menghasilkan koloni merah, sedangkan strain non-fermentasi tidak berwarna. Karakteristik ini penting, karena Salmonella dan Shigella tidak memfermentasi laktosa.
Di sisi lain, media ini mengandung natrium tiosulfat sebagai sumber sulfida dan besi sitrat sebagai sumber zat besi. Kedua senyawa tersebut mampu membedakan bakteri yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida. Ini bereaksi untuk membentuk endapan sulfida besi hitam yang terlihat, tidak larut.
Sifat ini ditemukan pada beberapa galur dari genus Salmonella. Biasanya koloni mereka tidak berwarna datar dengan titik hitam di tengahnya. Sisa dari Salmonellas tidak menghasilkan H 2 S dan berkembang sebagai koloni berwarna.
Sebaliknya, koloni genus Shigella tidak berwarna datar tanpa menghitam.
Persiapan
Media ini sangat sederhana untuk disiapkan.
Timbang 63 g media komersial dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Panaskan larutan dan aduk. Campuran bisa mendidih hingga beberapa menit.
Media ini tidak boleh diautoklaf. Setelah larut disajikan langsung di piring steril tunggal atau ganda.
Saat mengeras, mereka disusun secara terbalik pada trombosit dan disimpan di lemari es (2-8 ° C) sampai digunakan.
Media setelah pembuatan harus tetap pada pH 7,2 ± 0,2 dan dengan warna oranye-merah.
Penting untuk membiarkan pelat memanas sebelum menyemai sampel. Sampel asli dapat disemai langsung, membuang bahan pada bagian agar-agar dan kemudian menggoresnya dari sana.
Jika menggunakan kaldu yang diperkaya, berikan sebagian dari kaldu selenite dan taburkan dengan spatula drigalski.
Inkubasi pada 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.
Perlu diingat bahwa jumlah gram yang akan ditimbang dan pH akhir media dapat bervariasi dari satu rumah komersial ke rumah lainnya. Basis tengah selalu membawa indikasi untuk persiapannya.
Menggunakan
Ini sering digunakan dalam analisis kultur tinja dan dalam studi mikrobiologi air limbah, air minum dan sampel makanan.
Sering dibuat piring ganda, di satu sisi agar Salmonella-Shigella ditempatkan dan di sisi agar XLD lainnya.
Batasan
-Beberapa strain Shigella tidak tumbuh di media ini. Oleh karena itu, tidak disarankan untuk isolasi primer dari genus ini.
-Tidak setiap koloni transparan dengan pusat hitam menunjukkan Salmonella; Uji biokimia harus dilakukan untuk membuat identifikasi yang benar, karena koloni beberapa strain Proteus tidak dapat dibedakan dengan Salmonella.
-Media yang mengalami dehidrasi harus menjaga eksposur ke lingkungan, karena sangat higroskopis. Oleh karena itu, harus disimpan di lingkungan yang kering dan tertutup dengan baik. Buka untuk waktu yang sangat singkat.
- Seiring waktu, garam empedu dalam media dapat mengendap, membentuk gambar yang mirip dengan alas di dalam agar, tetapi ini tidak mempengaruhi hasil.
-Beberapa strain Shigella dapat memfermentasi laktosa secara perlahan.
QA
Untuk membuktikan bahwa media bekerja dengan benar, disarankan untuk menanam strain kontrol yang diketahui atau bersertifikat dan mengamati apakah pertumbuhannya memenuhi karakteristik yang diharapkan.
Untuk ini, strain E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium atau Enterococcus faecalis dapat digunakan.
Hasil yang diharapkan adalah:
Enterobacter dan Klebsiella ------ koloni besar dan mukoid merah atau merah muda.
Shigella flexneri ---------- koloni datar transparan atau tidak berwarna.
Salmonella typhimurium ------ koloni tak berwarna dengan pusat hitam.
Enterococcus faecalis -------- penghambatan total.
Referensi
- Laboratorium Difco Francisco Soria Melguizo. Salmonella-Shigella agar. 2009. Tersedia di: f-soria.es
- Laboratorium BD. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Britannia. Agar Salmonella-Shigella. 2015. Tersedia di: britanialab.com
- Diagnostik Valtek. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar). 2010. Tersedia di: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.