The agar manitol garam atau garam manitol adalah selektif medium padat dan budaya diferensial. Itu dibuat oleh Chapman untuk isolasi kokus Gram-positif patogen, terutama Staphylococcus aureus.
Namun, juga berguna untuk mengisolasi Staphylococus epidermidis, yang kadang-kadang dapat muncul sebagai patogen oportunistik, dan Staphylococcus saprophyticus, patogen saluran kemih yang dikenali, di antara spesies lainnya.
A. Fiola dengan media agar-agar manitol asin yang telah disiapkan. B. Cawan agar manitol asin yang diunggulkan dengan strain bakteri manitol yang difermentasi dan non-fermentasi. Sumber: A dan B: Foto-foto yang diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.
Beberapa Enterococcus mampu tumbuh pada media ini, serta batang pembentuk spora Gram-positif tertentu.
Media ini sangat berguna dalam analisis sampel klinis, tetapi juga digunakan dalam studi mikrobiologi makanan dan dalam pengendalian kualitas produk industri, seperti kosmetik, obat-obatan, dan lain-lain.
Salty Mannitol Agar terdiri dari ekstrak dan pepton dari daging sapi, triptein, manitol, natrium klorida, fenol merah dan agar.
Dasar
Mannitol agar selektif berkat konsentrasi garam yang tinggi. Salinitas bertindak sebagai zat penghambat dan mencegah pertumbuhan bakteri Gram negatif.
Ini juga berbeda karena adanya manitol karbohidrat dan indikator pH merah fenol. Dari sini, bakteri yang mampu memfermentasi manitol menghasilkan asam, mengasamkan medium, mengubah koloni dan medium menjadi kuning.
Sebaliknya, koloni yang tidak memfermentasi manitol tumbuh di media mengambil nutrisi yang diberikan oleh ekstrak dan pepton dari daging dan triptein. Dari sana bakteri mengekstrak karbon, nitrogen, vitamin, dan mineral yang diperlukan untuk pertumbuhannya.
Koloni dalam hal ini bisa berwarna merah muda lemah atau kuat, dan medianya tetap berwarna sama atau berubah menjadi fuchsia.
Agar-agar adalah zat yang memberikan konsistensi pada medium.
Persiapan
Untuk membuat satu liter agar-agar manitol asin, 111 g media dehidrasi dari perusahaan komersial yang disukai ditimbang dan dilarutkan dalam 1000 ml air suling, menggunakan labu.
Panas diterapkan dengan sering mengaduk media untuk meningkatkan proses pelarutan. Rebus sebentar.
Labu ditempatkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.
Di akhir waktu, keluarkan vial dari autoclave, diamkan dan sajikan antara 15 hingga 20 ml di atas cawan petri yang steril saat suhu sekitar 50 hingga 55 ° C.
Itu dibiarkan memadat, memesan dengan cara terbalik di plaqueros dan disimpan di lemari es sampai digunakan. Sebelum menabur sampel, tunggu piring mencapai suhu kamar.
Pelat diunggulkan dengan menggores atau dengan penyemaian permukaan dengan spatula drigalski. PH akhir dari media yang disiapkan harus 7,4 ± 0,2
Warna media dehidrasi adalah krem muda dan warna media yang disiapkan adalah merah jingga.
Aplikasi
Karena selektivitasnya yang tinggi, media ini sangat ideal untuk menabur sampel dengan flora campuran di mana keberadaan Staphylococus aureus, sebagai patogen utama dari genus ini, dicari.
Dalam hal ini, salah satu kegunaannya yang paling sering adalah dalam analisis mikrobiologis eksudat faring dan sampel cairan hidung, terutama untuk mendeteksi pembawa S. aureus asimtomatik.
Beberapa negara telah menerapkan analisis ini sebagai persyaratan wajib bagi masyarakat yang ingin bekerja sebagai penjual makanan.
Pengendalian ini mencegah orang yang merupakan pembawa S. aureus dipekerjakan, sehingga terhindar dari keracunan makanan yang masif karena konsumsi makanan yang terkontaminasi dengan enterotoksin stafilokokus.
Itu juga dapat dimasukkan dalam pembenihan infeksi luka, kultur darah, CSF, lavage bronchoalveolar, antara lain.
Agar manitol asin berguna untuk mengisolasi kembali koloni dari kultur urin dari agar CLED atau agar darah yang Gramnya telah menunjukkan cocci Gram-positif dalam kelompok.
Ini juga berlaku dalam analisis mikrobiologi makanan, air minum, tanah, di antara aplikasi lainnya.
QA
Setelah sekumpulan piring dengan agar-agar manitol asin telah disiapkan, disarankan untuk melakukan kontrol kualitas. Strain kontrol disemai untuk menunjukkan apakah ada pertumbuhan atau tidak.
Strain Staphylococcus aureus yang diketahui dapat digunakan sebagai kontrol positif. Ini harus tumbuh dengan baik mengembangkan koloni kuning, dan medianya juga berubah warna yang sama.
Demikian juga, akan lebih mudah untuk memasukkan strain Staphylococcus epidermidis yang diketahui. Ini harus tumbuh dengan baik mengembangkan koloni merah muda, dan medium tetap warna yang sama atau gelap menjadi merah muda yang lebih kuat.
Sebagai kontrol negatif, digunakan strain yang tidak boleh tumbuh pada media ini. Misalnya, strain Escherichia coli atau Klebsiella pneumoniae yang diketahui dapat ditanam. Hasil yang diharapkan adalah penghambatan total, yaitu tidak ada pertumbuhan.
Selain itu, pelat yang tidak diinokulasi harus diinkubasi. Di dalamnya tidak boleh ada pertumbuhan atau perubahan warna.
Sebaiknya pelat tidak digunakan jika ada tanda-tanda kerusakan, seperti kontaminasi, dehidrasi, perubahan warna, dan lain-lain.
Pikiran terakhir
Saat menggunakan media agar manitol asin, ada beberapa aspek penting yang harus diperhatikan:
- Meningkatnya koloni kuning tidak berarti Staphylococcus aureus. Harus diingat bahwa beberapa strain Enterococcus mampu tumbuh dalam media ini dan memfermentasi manitol, serta batang Gram-positif pembentuk spora tertentu.
Oleh karena itu, penting untuk melakukan Gram pada koloni dan uji katalase.
-Di sisi lain, harus dipertimbangkan bahwa spesies Staphylococcus lain selain aureus juga mampu memfermentasi manitol. Oleh karena itu, penting untuk mensubkultur koloni menjadi kaldu nutrisi untuk diambil dari sana dan melakukan uji koagulase.
Di antara spesies Staphylococcus yang penting secara klinis bagi manusia yang memfermentasi manitol adalah: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, antara lain.
Orang lain dapat memberikan reaksi variabel, yaitu terkadang positif dan terkadang negatif. Beberapa diantaranya adalah S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, dan lain-lain.
-Tidak disarankan untuk mengambil koloni langsung dari agar manitol untuk melakukan uji koagulase, karena konsentrasi garam yang tinggi dalam media dapat mengganggu hasilnya.
-Akhirnya, dianjurkan untuk menginkubasi pelat yang diunggulkan dengan manitol asin hingga 48 jam, karena beberapa galur S. aureus dapat secara perlahan memfermentasi manitol, meskipun hal ini tidak terlalu sering.
Referensi
- Laboratorium Britannia. Agar manitol asin. 2015. Tersedia di: britanialab.com
- "Agar manitol asin". Wikipedia, ensiklopedia gratis. 31 Okt 2018, 19:08 UTC. 17 Jan 2019, 20:55, tersedia di: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
- Laboratorium BD. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Tersedia di: bd.com.