CLED AGAR: ALASAN, PENGGUNAAN, DAN PERSIAPAN - BIOLOGI - 2025

The agar CLED (Sistin-Lactose-elektrolit-Kekurangan) adalah diferensial media kultur padat, digunakan untuk diagnosis infeksi saluran kemih. Komposisi media kultur dirancang untuk pertumbuhan patogen kemih yang baik dan ideal untuk kuantifikasi unit pembentuk koloni (CFU).

Media kultur CLED tidak selektif, karena mikroorganisme Gram negatif dan Gram positif dapat tumbuh di dalamnya. Tetapi ini tidak menjadi masalah, karena kebanyakan ISK disebabkan oleh hanya satu jenis mikroorganisme.

CLED agar

Dalam kasus infeksi polimikroba, 2 atau 3 bakteri berbeda dapat diperoleh, tetapi sangat jarang dan sebagian besar sampel terkontaminasi.

Di antara bakteri Gram negatif yang dapat tumbuh di media ini adalah basil yang termasuk dalam famili Enterobacteriaceae dan basil enterik lainnya, uropatogen yang paling sering diisolasi dalam sampel urin adalah sebagai berikut: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, antara lain.

Demikian juga di antara bakteri Gram positif yang dapat tumbuh pada media ini adalah Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp bahkan khamir seperti kompleks Candida albicans dapat tumbuh.

Namun, karena komposisi kimiawi medium, hal ini tidak memungkinkan pertumbuhan beberapa patogen genitourinari yang menuntut, seperti Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, dan lainnya.

CLED Agar Rasional

Media kultur CLED memiliki ekstrak daging, hidrolisat pankreas dari kasein dan hidrolisat gelatin sebagai sumber energi. Mereka memberikan nutrisi untuk perkembangan bakteri yang tidak banyak menuntut.

Ini juga mengandung sistin, asam amino yang memungkinkan pertumbuhan coliform, dibedakan dengan ukurannya yang kecil.

Demikian juga, ia mengandung laktosa sebagai karbohidrat yang dapat difermentasi, karena alasan ini media ini berbeda; mampu membedakan bakteri fermentasi dari fermentasi non-laktosa.

Bakteri fermentasi menyebabkan pH media berubah karena produksi asam, koloni kuning berkembang, sedangkan bakteri non-fermentasi tidak menghasilkan perubahan dalam medium, oleh karena itu mereka mengambil warna agar asli, hijau.

Reaksi fermentasi terungkap berkat adanya indikator pH, yang dalam medium ini berwarna biru bromothymol.

Di sisi lain, konsentrasi elektrolit yang rendah dari medium menghambat pertumbuhan invasif khas dari genus Proteus, yang disebut efek swarming. Ini menghasilkan keuntungan dibandingkan media lain, karena memungkinkan penghitungan CFU, termasuk jika genus Proteus ada.

Namun, konsentrasi elektrolit yang rendah menghambat pertumbuhan beberapa spesies dari genus Shigella, hal ini merugikan dibandingkan dengan media lain.

Alasan untuk CLED agar (Bevis)

Ada varian atau modifikasi medium besutan Bevis ini, yang memasukkan acid fuchsin (indikator Andrade) ke dalam komposisi aslinya. Ini bekerja bersama dengan bromothymol blue untuk membedakan fermentasi dari bakteri non-fermentasi.

Perbedaan antara media konvensional dan media modifikasi terletak pada warna koloni. Dalam kasus bakteri pemfermentasi laktosa, koloni berubah menjadi oranye kemerahan dengan lingkaran merah muda atau merah, sedangkan yang non-fermentasi berwarna abu-abu kebiruan.

Aplikasi

CLED agar digunakan secara eksklusif untuk penyemaian sampel urin. Penggunaan media ini sangat sering di laboratorium Eropa, sedangkan di Amerika lebih jarang digunakan.

Pengumpulan sampel harus memenuhi parameter tertentu untuk mendapatkan hasil yang andal, termasuk:

• Tidak minum antibiotik sebelum pengambilan sampel.
• Sebaiknya ambil urin terlebih dahulu di pagi hari, karena lebih terkonsentrasi, bila tidak memungkinkan untuk mengambil sampel dengan metode invasif.
• Cuci alat kelamin dengan baik sebelum mengambil sampel.
• Buang aliran pertama buang air kecil lalu tempatkan wadahnya.
• Kumpulkan 25 sampai 30 ml urin dalam wadah steril yang diberi label dengan baik.
• Bawa segera ke laboratorium yang dikelilingi es.
• Ini harus diproses dalam waktu 2 jam setelah dikeluarkan atau didinginkan pada suhu 4 ° C selama maksimal 24 jam.

Pembibitan sampel urin

Sampel urin harus diencerkan 1:50.

Untuk pengenceran, tempatkan 0,5 ml urin pasien dan encerkan dengan 24,5 ml larutan fisiologis steril.

Ukur 0,1 ml urin yang diencerkan dan permukaan yang disebarkan dengan spatula drigalski pada media CLED. Ini adalah metode penyemaian terbaik untuk menghitung koloni. Untuk alasan ini digunakan dalam sampel urin, karena hasilnya harus dinyatakan dalam CFU / ml.

Untuk menghitung koloni yang diperoleh, lakukan sebagai berikut: hitung koloni di atas piring dan kalikan dengan 10 lalu 50. Hasilnya adalah jumlah CFU / ml urin.

Penafsiran

Hitungan di atas 100.000 CFU / ml -– Menunjukkan infeksi saluran kemih

Hitungan di bawah 1000 CFU / ml-– Tidak ada infeksi

Hitungan antara 1000-10.000 CFU / ml -– Diragukan, kemungkinan kontaminasi, pengambilan sampel ulang.

Indo

Koloni yang ditanam pada agar CLED harus memiliki Gram dan bergantung pada karakteristik morfotintorial mikroorganisme, dilakukan subkultur tertentu.

Misalnya, jika itu adalah basil Gram negatif, itu akan disemai pada agar MacConkey, di mana fermentasi atau tidak laktosa dikuatkan. Sebagai tambahan, nutrient agar dipasang untuk melakukan uji oksidase.

Jika Gram menunjukkan cocci Gram positif, Gram dapat disubkultur pada agar manitol asin dan agar nutrien. Yang terakhir, uji katalase dilakukan. Akhirnya, jika ragi diamati, itu akan disemai pada agar Sabouraud.

Banyak laboratorium menghindari penggunaan media CLED dan lebih suka menggunakan agar darah, MacConkey, dan agar nutrisi untuk menyemai sampel urin.

Persiapan

Dalam labu berisi satu liter air suling, larutkan 36,2 g bubuk agar CLED. Setelah 5 menit berdiri, panaskan agar-agar yang tersuspensi kembali, aduk terus hingga mendidih selama 1 menit.

Kemudian sterilkan pada 121 ° C selama 15 menit di dalam autoclave. Pada akhir waktu, itu dikeluarkan dari autoklaf dan dibiarkan mendingin hingga suhu 45 ° C. Selanjutnya disajikan 15-20 ml dalam setiap cawan petri steril.

Prosedur penyajian pelat harus dilakukan di dalam kap aliran laminar atau di depan pembakar Bunsen untuk menghindari kontaminasi.

Piring yang disajikan dibiarkan mengeras, disusun dalam rak terbalik dan disimpan di lemari es (2-8 ° C) sampai digunakan.

PH akhir dari media yang disiapkan harus 7,3 ± 0,2.

Referensi

1. Rekomendasi untuk diagnosis mikrobiologis infeksi saluran kemih. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Tersedia di: scielo.org.
2. Panchi J. Identifikasi agen mikroba penyebab infeksi saluran kemih pada pasien rawat inap yang menjalani kateterisasi kandung kemih. 2016. Pekerjaan sarjana untuk memenuhi syarat untuk gelar Sarjana di Laboratorium Klinik. Universitas Teknik Ambato. Ekuador.
3. Laboratorium Britannia. Media CLED. Tersedia di: britanialab.com.
4. Laboratorium Renylab. Instruksi penggunaan, CLED Agar. 2013 Tersedia di: es.renylab.ind.br.
5. Laboratorium Kebudayaan. Panduan Dasar Mikrobiologi. Tersedia di: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Pilihan agar CLED dalam rutin kultur urin. Evaluasi prospektif dan komparatif. Diagnosis Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinis praktis. University of Cadiz, edisi ke-2. Layanan Publikasi UCA.