EMPEDU ESCULIN AGAR: ALASAN, PERSIAPAN, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The empedu esculin agar adalah selektif dan media diferensial biakan padat. Ini digunakan sebagai tes diagnostik untuk mengetahui kemampuan mikroorganisme tertentu untuk tumbuh dalam media yang mengandung empedu dan juga untuk memecah esculin glukosida menjadi esculetin dan glukosa.

Uji diagnostik ini digunakan untuk membedakan spesies dari genus Streptococcus yang termasuk dalam kelompok D (empedu esculin positif), dari kelompok Streptococcus lain yang bereaksi negatif terhadap tes ini.

Cawan agar esculin empedu, diunggulkan dengan strain Enterococcus (uji positif). Sumber: Tidak ada penulis yang dapat dibaca mesin. Philippinjl diasumsikan (berdasarkan klaim hak cipta).

Perlu dicatat bahwa beberapa Streptococcus dari kelompok viridans dapat menghidrolisis esculin, tetapi tidak dapat tumbuh dengan adanya empedu pada konsentrasi 40%, oleh karena itu dalam media ini reaksi untuk kelompok ini negatif.

Di sisi lain, media esculin empedu juga berguna untuk diagnosis spesies Listeria monocytogenes atau Aerococcus sp, karena mikroorganisme tersebut adalah empedu esculin positif.

Esculin empedu agar terdiri dari pepton, ekstrak daging, empedu sapi, esculin, sitrat besi, agar, dan air suling. Beberapa rumah komersial memasukkan natrium azida dalam komposisi medianya.

Media dapat disiapkan di laboratorium jika Anda memiliki semua senyawa secara terpisah atau dapat dibuat dari media dehidrasi komersial.

Dasar

Medium esculin empedu mengandung pepton dan ekstrak daging, kedua senyawa tersebut memberikan nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisme.

Ini juga mengandung esculin; Senyawa ini adalah glikosida yang dibentuk oleh penyatuan monosakarida sederhana (glukosa) dengan senyawa yang disebut 6,7-dihydroxycoumarin atau esculetin (aglucone), dihubungkan oleh ikatan asetal atau glukosidik.

Tes ini didasarkan pada apakah bakteri mampu menghidrolisis esculin. Jika ini terjadi, esculin terurai menjadi esculetin dan glukosa. Esculetina bereaksi dengan besi yang ada di medium, membentuk senyawa coklat tua, hampir hitam.

Artinya, besi sitrat berperan sebagai pengembang reaksi. Karakteristik ini menjadikan Empedu Esculin Agar sebagai media diferensial.

Empedu merupakan penghambat yang mencegah pertumbuhan beberapa mikroorganisme, oleh karena itu bakteri sebelum membelah esculin harus dapat tumbuh dengan adanya empedu. Oleh karena itu, media ini dianggap selektif.

Bakteri yang dapat berkembang di lingkungan ini terutama yang hidup di lingkungan usus.

Dalam pengertian ini, beberapa perusahaan komersial menambahkan natrium azida ke media untuk lebih menghambat pertumbuhan basil gram negatif enterik, meningkatkan selektivitas media untuk pertumbuhan Streptococcus.

Akhirnya, agar-agar memberikan konsistensi padatan ke media dan air adalah pelarut senyawanya.

Persiapan

Persiapan sendiri agar esculin empedu

Menimbang:

5 g pepton

3 g ekstrak daging

40 g empedu sapi

1 g esculin

0,5 g besi sitrat

15 g agar

1000 ml air suling

Dalam kasus penambahan natrium azida, 0,25 g / liter ditimbang dan ditambahkan ke dalam campuran.

Larutkan komponen dalam liter air suling, panaskan hingga senyawa larut sempurna. Bagikan 5 ml ke dalam tabung reaksi tutup ulir berukuran 16 x 125 mm. Autoklaf pada 121 ° C, tekanan 15 pon selama 15 menit.

Keluarkan dari autoklaf dan miringkan tabung pada penyangga, sehingga agar-agar mengeras dalam paruh seruling lebar.

Simpan di lemari es sampai digunakan. Bawa ke suhu kamar sebelum disemai.

Piring empedu esculin agar juga bisa disiapkan; dalam hal ini, seluruh campuran diautoklaf dalam labu dan selanjutnya didistribusikan dalam cawan Petri steril. Biarkan mengeras dan simpan di lemari es.

PH media harus 6,6 ± 0,2.

Pembuatan agar esculin empedu dari media komersial

Timbang jumlah yang ditentukan oleh sisipan. Ini dapat bervariasi dari satu rumah bisnis ke rumah lainnya. Selanjutnya, lanjutkan seperti prosedur yang dijelaskan di atas.

PH media harus 6,6 ± 0,2. Warna media dehidrasi adalah krem ​​muda dan media yang disiapkan berwarna kuning tua.

Media esculin empedu komersial. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.

Aplikasi

Media esculin empedu digunakan terutama untuk membedakan Streptococcus Grup D (empedu esculin positif), dari kelompok Streptococcus lainnya (empedu esculin negatif).

Menggabungkan uji pertumbuhan kaldu hipersal dengan uji esculin empedu dapat mengidentifikasi kelompok khusus Streptococcus Grup D yang disebut Enterococcus.

Kelompok khusus Streptococcus ini termasuk dalam kelompok D dari genus yang disebutkan di atas dan mereka mampu menghidrolisis esculin di hadapan empedu seperti halnya anggota kelompok D lainnya, tetapi mereka juga mampu berkembang dalam media hipersal (BHI dengan klorida 6,5% natrium), sifat yang membuat perbedaan.

Oleh karena itu, Streptokokus yang menghidrolisis esculin empedu tetapi tidak tumbuh dalam kaldu hipersal disebut Streptokokus Grup D non-enterokokus.

Ditabur

Inokulasi media sebaiknya dari kaldu Todd-Hewitt 24 jam murni.

Tambahkan 2 tetes ke permukaan media dengan pipet Pasteur dan sebarkan di media dengan lingkaran platina.

Inkubasi pada suhu 35 ° C selama 48 jam, sedangkan waktu inkubasinya terpenuhi dapat dimonitor untuk melihat apakah terdapat reaksi positif. Jika pada akhir waktu reaksi tetap negatif, dapat diinkubasi hingga 72 jam.

Penafsiran

Reaksi positif : munculnya warna coklat tua, warna hampir hitam pada paruh seruling (untuk pengujian tabung) atau agar-agar di sekitar koloni menghitam (untuk pengujian pelat).

Reaksi negatif : media tidak menghitam atau hitam muncul dalam waktu kurang dari setengah tabung setelah 72 jam inkubasi. Di sisi lain, pertumbuhan bakteri dalam medium tanpa munculnya warna hitam harus dianggap sebagai uji negatif.

QA

Untuk menilai kualitas medium, strain Enterococcus faecalis ATCC 29212 harus tersedia sebagai kontrol positif dan strain Streptocococus yang tidak termasuk dalam grup D sebagai kontrol negatif.

Batasan

-Media yang tidak mengandung natrium azida memungkinkan tumbuhnya bakteri enterik Gram negatif. Beberapa di antaranya bisa menghitamkan bagian tengah.

- Beberapa rumah komersial menambahkan konsentrasi empedu yang rendah (10%) dan karena alasan ini beberapa Streptococcus yang tidak termasuk dalam grup D dapat berkembang dalam medium dan menghidrolisis esculin, yang dapat menghasilkan kesalahan interpretasi.

Referensi

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Lab. Britannia. Empedu esculin dengan agar azida. 2015. Tersedia di: britanialab.com
5. "Empedu Esculin Agar." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 22 Agustus 2017, 17:30 UTC. 22 Apr 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Empedu Esculin Agar Miring. 2015. Tersedia di: bd.com
7. Laboratorium Neogen. Agar esculin empedu. Tersedia di: foodsafety.neogen.com