MUNGKIN NODA GRÜNWALD-GIEMSA: ALASAN, TEKNIK, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The Mei Grünwald-Giemsa atau Pappenheim noda adalah pewarnaan teknik diferensial yang campuran Giemsa dan Mei Grünwald reagen. Ini digunakan untuk diferensiasi sel darah normal dan abnormal dalam darah tepi dan apusan sumsum tulang, serta untuk pewarnaan bagian histologis dan sampel sitologi.

Kedua reagen -Giemsa dan May Grünwald- berasal dari pewarnaan tipe Romanowsky, teknik yang didasarkan pada kombinasi pewarna asam dan basa.

Apusan yang menunjukkan neutrofil tersegmentasi dan milleosit pada kasus Leukemia Myeloid Kronis, diwarnai dengan pewarnaan May Grünwald Giemsa. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) melalui Wikipedia.org.

Giemsa memperbaiki teknik ini dengan menstabilkan campuran eosin, biru metilen dan turunannya, dengan gliserol. Sebaliknya, May Grünwald menggunakan eosin dan metilen biru, menggunakan metanol sebagai pelarutnya. Kombinasi strategis ini telah membuahkan hasil yang sangat baik.

Meskipun dalam hal pengamatan morfologi sel bekerja dengan cara yang mirip dengan pewarnaan Giemsa dan Wright, teknik ini memperbaiki teknik sebelumnya dengan menghaluskan pewarnaan parasit penyebab malaria, penyakit Chagas, leishmaniasis dan trikomoniasis.

Selain itu, ini telah terbukti menjadi teknik yang sangat berguna untuk studi sitologi cairan spermatika. Ini menonjol tidak hanya dengan menunjukkan karakteristik morfologi sperma, tetapi juga dengan memungkinkan diferensiasi leukosit, sel epitel dan sel spermatogenesis dengan efisiensi tinggi.

Dasar

Teknik ini mengikuti dasar pewarnaan Romanowsky, di mana pewarna asam memiliki afinitas selektif untuk komponen seluler dasar dan komponen asam menarik pewarna dasar.

Dijelaskan dengan cara lain, baik struktur sel maupun pewarna memiliki muatan listrik positif atau negatif; seperti muatan menolak dan muatan yang berbeda menarik.

Misalnya, pewarna dasar seperti biru metilen bermuatan positif dan tertarik ke struktur bermuatan negatif. Itulah sebabnya pewarna ini menodai inti yang kaya akan DNA dan RNA yang memiliki gugus fosfat bermuatan negatif.

Butiran basofil tersegmentasi dan sitoplasma sel darah putih mononuklear yang mengandung RNA juga diwarnai.

Demikian juga, pewarna asam membawa muatan negatif, sehingga mengikat struktur bermuatan positif seperti eritrosit dan butiran eosinofil tersegmentasi. Adapun butiran dari neutrofil tersegmentasi, keduanya mengikat kedua zat warna.

Ragam pewarna

Dalam teknik ini kombinasi reaksi hidup berdampingan antara pewarna ortokromatik dan metakromatik. Ortokromatik (eosin dan metilen biru) mengikat struktur sel yang terkait dan memberikan warna stabil yang tidak bervariasi.

Di sisi lain, metakromat (turunan dari metilen biru biru A dan biru langit B), memvariasikan warna aslinya begitu mereka melekat pada struktur tertentu, dan bahkan mungkin ada variasi corak.

Akhirnya, langkah yang diambil larutan May Grünwald membutuhkan adanya air, karena tanpa ini pewarna akan menembus struktur tetapi tidak akan melekat. Agar ini terjadi, pewarna harus menjadi polar atau terionisasi, dan dengan demikian dapat mengendapkan dan mengikat struktur terkait.

Teknik

bahan

- Slide slide.

- Jembatan pewarnaan.

- Solusi May-Grünwald.

- Noda Giemsa.

- Air sulingan.

Semoga larutan pekat pewarna Grünwald

0,25 g eosin-metilen biru (pewarnaan menurut May Grünwald) harus ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml metanol. Kemudian sediaan diaduk selama 1 jam dan dibiarkan istirahat selama 24 jam. Pada akhirnya, itu difilter.

Untuk menerapkan teknik ini, pewarna May Grünwald harus diencerkan sebagai berikut: untuk 200 ml pewarna encer, ukur 30 ml larutan pekat, tambahkan 20 ml larutan penyangga dan 150 ml air suling yang disesuaikan dengan pH7.2-7.3 . Kemudian dicampur dan disaring.

Konsentrat noda giemsa

0,5 g biru-eosin-metilen biru (pewarnaan menurut Giemsa) harus ditimbang, dilarutkan dalam 50 ml metanol dan 50 ml gliserin ditambahkan ke dalam campuran.

Untuk melakukan teknik ini, encerkan 1:10 dengan larutan buffer dan diamkan selama 10 menit. Itu dapat disaring jika perlu.

Pembuatan larutan buffer pada pH 7,2

Mereka harus ditimbang:

- 40 mg kalium di-hidrogen fosfat (KH2PO4).

- 151 mg di-natrium hidrogen fosfat 12-hidrat (Na2HPO4).

Kedua senyawa tersebut dilarutkan dalam 100 ml air.

Prosedur pewarnaan darah atau sumsum tulang

Ada dua mode: klasik dan cepat.

Mode klasik

1. Tutupi noda selama 2 sampai 3 menit dengan larutan May-Grünwald yang diencerkan.
2. Cuci dengan air suling buffer untuk menghilangkan larutan sebelumnya.
3. Tutup dengan larutan pencuci buffer yang sama dan biarkan selama 1 menit. Idenya adalah bahwa pewarna sebelumnya dipasang pada struktur dan, pada saat yang sama, sel-sel terhidrasi.
4. Tambahkan 12 tetes larutan Giemsa encer ke dalam buffer air dan tiup untuk mencampur dan menghomogenkan. Biarkan istirahat selama 15 hingga 20 menit.
5. Cuci noda dengan air suling buffer dan keringkan dengan udara.
6. Fokuskan dan lihat sel darah yang terkena noda di bawah mikroskop cahaya menggunakan objektif 40X. Jika perlu, 100X bisa digunakan.

Mode cepat

1. Tutupi noda dengan pewarna May Grünwald yang diencerkan selama 1 menit.
2. Cuci dengan air suling buffer.
3. Tutupi dengan air buffer dan diamkan selama 1 menit.
4. Tambahkan noda Giemsa yang telah diencerkan dan biarkan selama 5 menit.
5. Cuci dengan air suling buffer dan biarkan mengering.

Teknik yang dijelaskan di sini adalah pedoman, tetapi harus diperhatikan bahwa prosedur dan waktu pewarnaan bervariasi menurut perusahaan komersial yang mendistribusikan reagen. Dianjurkan untuk mengikuti langkah-langkah yang ditentukan secara ketat oleh setiap rumah komersial.

Teknik pewarnaan apusan cairan spermatika

1- Tutupi noda dengan lapisan tipis larutan May Grünwald selama 4 menit.

2- Hapus pewarna dan cuci dengan air suling.

3- Letakkan selapis Giemsa (1:10) yang telah diencerkan dalam air suling selama 15 menit.

4- Hapus pewarna dan cuci dengan air suling.

5- Biarkan mengering dan amati di bawah mikroskop.

Warna yang diharapkan dengan noda May Grünwald Giemsa

Spesifikasi Penting

Teknik ini mensyaratkan bahwa reagen dan larutan pencuci memiliki pH yang diatur ke 7,2 -7,3, sehingga afinitas pewarna untuk struktur seluler tidak terdistorsi dan warna akhir yang diharapkan tidak bervariasi.

Aplikasi

Teknik ini digunakan oleh laboratorium klinis untuk mengecat darah tepi dan apusan sumsum tulang, bagian jaringan, dan sitologi.

Di bidang hematologi, teknik ini sangat penting dalam mempelajari kelainan sel dalam hal bentuk, ukuran, dan jumlah. Ini adalah alat yang sangat berharga untuk mendiagnosis penyakit tertentu, seperti leukemia dan anemia.

Selain itu, ini sangat berguna saat mencari parasit di area hematologi (Plasmodium sp dan Trypanosoma cruzi) atau histologis (Leishmanias sp).

Sitologi vagina

Mengenai sitologi vagina, teknik ini sangat bermanfaat untuk pengamatan Trichomonas vaginalis. Ini adalah temuan penting, karena kehadirannya mensimulasikan gambar karsinoma in situ yang kemudian hilang ketika parasit dimusnahkan.

Sampel sperma

Ini telah menjadi alat yang ideal untuk mempelajari sampel sperma, karena memberikan informasi berharga tentang kualitas sperma.

Data yang ditawarkannya berkaitan terutama dengan jumlah dan morfologi, serta dengan sel-sel bersamaan yang mungkin ada dan yang sangat penting, seperti sel germinal, leukosit, dan sel epitel.

Dengan analisis ini dimungkinkan untuk menggambarkan kelainan yang diamati pada sperma di kepala, leher, bagian tengah dan bagian utama.

Selain itu, mereka juga dapat membantu menunjukkan kasus hemospermia (adanya sel darah merah dalam air mani) dan leukospermia atau piospermia (peningkatan jumlah leukosit dalam air mani).

Referensi

1. Costamagna S, Prado M. Validasi tes segar, pewarnaan Mei Grünwald-Giemsa dan Gram dan media kultur untuk diagnosis Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Tersedia dalam: scielo.
2. Laboratorium Merck KGaA. Semoga Grünwald eosin methylene blue untuk mikroskop.
3. "Pewarnaan May-Grünwald-Giemsa." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 15 Nov 2018, 14:37 UTC. 8 Jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Laboratorium Kaca Bahan Kimia Panreac. Reagen untuk teknik histologi, hematologi dan mikrobiologi. Tersedia di: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Rekomendasi untuk pewarnaan apusan darah untuk membaca hemogram. Laboratorium Biomedis Nasional dan Referensi. Institut Kesehatan Masyarakat Chili.
6. Sarabia L. Spermiogram menurut kriteria WHO. Program Anatomi dan Biologi Perkembangan. Sekolah Kedokteran. Universitas Chili. Tersedia di: pp.centramerica.com