PEWARNAAN KAPSUL: ALASAN DAN TEKNIK - BIOLOGI - 2025

The kapsul pewarnaan adalah teknik pewarnaan diferensial yang memiliki sifat struktur stres polisakarida sekitarnya bakteri tertentu dan ragi yang disebut kapsul. Ini digunakan di laboratorium klinis untuk membantu mendiagnosis patologi tertentu yang disebabkan oleh mikroorganisme berkapsul.

Ini juga digunakan di laboratorium pengajaran untuk menunjukkan struktur morfologi ini kepada mahasiswa karir ilmu kesehatan, seperti: kedokteran, bioanalisis, keperawatan, atau sitoteknologi, antara lain.

Apusan Klebsiella pneumoniae diwarnai dengan noda kapsul. Metode tinta India dengan safranin. Sumber: А.А.В

Ada beberapa teknik sederhana untuk menunjukkan keberadaan kapsul pada mikroorganisme yang memilikinya, yaitu: pewarnaan negatif, pewarnaan Anthony dan varian yang menggabungkan dua sebelumnya.

Pewarnaan negatif terutama digunakan dalam sampel cairan serebrospinal ketika dicurigai adanya jamur Cryptococcus neoformans. Jamur ini adalah penyebab umum meningitis.

Teknik ini menggunakan tinta nigrosin atau India dan didasarkan pada menciptakan kontras antara latar belakang sediaan dan kapsul mikroorganisme yang tidak dapat ditembus. Latar belakang menjadi gelap dan kapsul tidak berwarna. Dengan cara ini, struktur ini terungkap.

Mengenai teknik Anthony, dapat dikatakan bahwa teknik ini banyak digunakan di laboratorium pengajaran untuk mendemonstrasikan struktur polisakarida pada bakteri seperti Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae dan Neisseria meningitidis.

Penggunaan teknik ini untuk tujuan diagnostik sangat jarang, karena ada tes rutin lain yang memungkinkan identifikasi mikroorganisme ini.

Dasar

Kapsul adalah struktur kuat yang bersifat polisakarida. Ini melindungi mikroorganisme dari fagositosis, dan oleh karena itu merupakan struktur yang sulit untuk ditembus.

Itulah sebabnya noda kapsul didasarkan pada kontras. Pewarna menodai bagian bawah sediaan sementara kapsul tetap tidak berwarna.

Oleh karena itu, dengan teknik ini kapsul mudah dikenali. Jika mikroorganisme tidak memiliki kapsul, maka tidak dapat dibedakan dengan jenis pewarnaan ini, karena semuanya akan diwarnai dengan warna yang sama.

Semua teknik yang digunakan untuk mewarnai kapsul memiliki dasar pemikiran yang sama meskipun menggunakan pewarna dan prosedur yang berbeda.

Teknik par

Noda -Anthony

Pewarnaan Anthony menggunakan kristal violet sebagai pewarna. Ini akan menodai tubuh bakteri dan latar belakang ungu.

Di sisi lain, 20% tembaga sulfat digunakan. Ini berfungsi sebagai larutan pencuci, yaitu menghilangkan kristal violet berlebih dari sediaan, membuat kapsul bening tetapi tanpa tubuh bakteri atau latar belakang kehilangan warna.

bahan

- Susu warna-warni.

- Geser.

- 1% kristal violet.

- 20% tembaga sulfat.

- Mikroskop optik.

- Minyak perendaman.

Proses

Teknik ini terdiri dari:

1. Tumbuhkan mikroorganisme dalam susu warna-warni selama 36 jam.
2. Tempatkan setetes budaya di ujung slide dan di sebelahnya, taruh setetes kaca violet, campur dan sebarkan dengan ujung slide lainnya.
3. Keringkan udara dan jangan panaskan.
4. Cuci dengan larutan tembaga sulfat 20%, biarkan mengering.
5. Amati di bawah mikroskop dengan tujuan pencelupan. Cari di ujung penyebaran.

Penting untuk tidak menggunakan panas, baik untuk memperbaiki maupun mengeringkan, karena dapat merusak kapsul. Juga jangan dicuci dengan air.

Penafsiran

Susu warna-warni adalah media kultur yang sangat baik karena memberikan nutrisi yang diperlukan mikroorganisme untuk mengembangkan kapsul yang menonjol.

Di sisi lain, susu warna-warni akan membentuk dasar yang tebal dan padat yang akan diwarnai dengan warna ungu bersama tubuh bakteri, tetapi kapsul yang mengelilingi mikroorganisme akan tetap tidak berwarna. Oleh karena itu, lingkaran cahaya yang jelas diamati di sekitar tubuh bakteri.

Representasi grafis pada pengamatan mikroskopis dari apusan Klebsiella pneumoniae yang diwarnai dengan noda Anthony. Sumber: Dibuat oleh penulis MSc. Marielsa Gil.

Keuntungan

Ini adalah teknik sederhana untuk dilakukan. Tidak perlu diperbaiki.

Selain itu, perlu diperhatikan bahwa media kultur lain dapat digunakan, tetapi media susu lebih disukai karena memiliki keunggulan menyediakan kapsul yang lebih menonjol.

Kekurangan

Ini adalah teknik yang sedikit lebih padat karya daripada pewarnaan negatif, dan visualisasinya membutuhkan menunggu hingga sediaan benar-benar kering.

Pewarnaan negatif

bahan

- Slide slide.

- Media kultur dengan mikroorganisme.

- Tinta Cina atau nigrosine.

- Mikroskop optik.

- Larutan garam fisiologis.

Proses

Teteskan larutan garam fisiologis pada kaca penutup dan larutkan sebagian kecil kultur mikroba. Yang penting sediaan tidak terlalu kental. Kemudian taruh setetes tinta Cina atau nigrosine dan campur.

Lembar penutup kemudian ditempatkan di atas sediaan tanpa cairan meluap. Itu diamati di bawah mikroskop dengan pertama-tama berfokus pada tujuan 10X dan kemudian pindah ke 40X.

Teknik ini juga dapat digunakan pada sampel CSF secara langsung. Artinya, alih-alih menempatkan setetes kultur mikroba, setetes CSF ditempatkan.

Keuntungan

Ini adalah metode yang sederhana untuk dilakukan dan pada saat yang sama tidak mahal. Itu tidak membutuhkan fiksasi atau pengeringan sediaan.

Kekurangan

Kerugiannya adalah harus diamati di bawah mikroskop sebelum sediaan mengering, karena jika ini terjadi mikroorganisme akan berkontraksi, yang akan membuat visualisasi menjadi sulit.

Di sisi lain, positif palsu dapat terjadi jika analis tidak berpengalaman, karena leukosit sering disalahartikan sebagai ragi.

Pengamatan kapsul ragi dengan tinta Cina atau teknik nigrosin harus dianggap sebagai diagnosis dugaan Cryptococcus neoformans sampai ditunjukkan dengan kultur.

Ini karena ada jamur lain yang bisa menjadi penyebab meningitis dan bukan hanya Cryptococcus neoformans, seperti dari genus Candida dan Rhodotorula, serta spesies Cryptococcus lainnya.

Penafsiran

Jika ada mikroorganisme berkapsul, akan terlihat latar belakang gelap, dengan benda transparan yang mengapung di dalam cairan, menyoroti keberadaan kapsul.

Kapsul Cryptococcus neoformans diwarnai dengan tinta Cina. Sumber: Kredit Foto: Penyedia Konten: CDC / Dr. Leanor haley

Teknik tinta -Indian

Teknik ini juga bisa dilakukan dengan nigrosine. Ini adalah kombinasi dari teknik yang telah dijelaskan sebelumnya. Teknik ini menggunakan kristal violet dan tinta India atau nigrosine.

Tubuh bakteri berubah menjadi ungu dari kristal violet karena bermuatan negatif, sedangkan nigrosin mewarnai bagian bawah noda. Jika bakteri memiliki kapsul, ia akan tampak seperti lingkaran cahaya transparan di sekitar mikroorganisme.

Kristal violet dapat diganti dengan salah satu warna berikut: safranin, fuchsin dasar atau biru metilen.

bahan

- Kaca ungu.

- Nigrosine atau tinta India.

- Slide slide.

- Mikroskop.

Proses

- Menumbuhkan mikroorganisme dalam media kultur.

- Tempatkan setetes budaya di ujung slide dan di sebelahnya, taruh setetes tinta India atau kristal nigrosine, campur dan sebarkan dengan ujung slide lainnya.

- Angin-anginkan dan jangan menempel pada panas.

- Tutup dengan larutan kristal violet selama 1 menit, cuci dengan aquades tapi sangat lembut (soft jet), biarkan mengering di udara terbuka.

- Amati di bawah mikroskop dengan tujuan pencelupan. Cari di ujung penyebaran.

Penafsiran

Tubuh bakteri ungu dan latar belakang gelap akan terlihat. Kapsul, jika ada, akan tampak tidak berwarna di sekitar bakteri.

Referensi

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Teknik dasar Mikrobiologi. Pengamatan bakteri. Reduca (Biologi). Seri Mikrobiologi. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Pewarnaan dasar di laboratorium mikrobiologi. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Tersedia di: medigraphic.com
3. Gil M. Pewarnaan negatif: alasan, teknik, kelebihan dan kekurangan. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Capsule Stain: Prinsip, Prosedur dan Hasil. 2019. Panduan Mikrobiologi Medis. Tersedia di: microbeonline.com