TES VOGES-PROSKAUER: FONDASI, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

Uji Voges-Proskauer merupakan uji biokimia yang digunakan untuk membantu identifikasi bakteri yang termasuk dalam famili Enterobacteriaceae. Ini sangat berguna untuk membedakan antara lain strain Escherichia coli dari Klebsiella dan Enterobacter.

Pengujian dilakukan dalam media kultur cair yang disebut Methyl Red - Voges Proskauer atau lebih dikenal dengan singkatan RM / VP. Media ini terdiri dari polipepton buffer, glukosa, kalium fosfat, dan air suling.

Methyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) media komersial / VP masing-masing positif dan negatif. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, dari Wikimedia Commons

Media RM / VP saat ini merupakan modifikasi dari media Clark dan Lubs, yang awalnya mengandung pepton dan glukosa dengan konsentrasi yang lebih rendah. Jadi, lebih sedikit ion hidrogen, yang dibutuhkan untuk reaksi Voges-Proskauer positif, yang dihasilkan.

Tes ini didasarkan pada kemampuan mikroorganisme untuk menggunakan glukosa melalui rute butilen-glikol, dan membentuk produk akhir netral yang disebut asetoin, dengan adanya oksigen dan pH basa.

Pada media RM / VP, selain dapat mengungkap uji Voges-Proskauer, juga dapat diketahui uji metil merah.

Dasar

Dasar tes Voges-Proskauer

Pluripeptones yang ada di dalam media memberikan kebutuhan nutrisi penting untuk pertumbuhan bakteri. Untuk bagiannya, glukosa adalah senyawa utama. Banyak bakteri memiliki kemampuan untuk memetabolisme glukosa dan membentuk asam piruvat.

Asam piruvat merupakan titik tengah dalam metabolisme glukosa dan dari sana setiap mikroorganisme dapat mengambil jalur yang berbeda. Beberapa akan membentuk asam campuran, seperti asam laktat, asam asetat, asam format, dan asam suksinat, dan lainnya akan membentuk produk netral seperti 2,3-butanediol.

Tes Voges-Proskauer mengungkapkan kemampuan mikroorganisme untuk membentuk asetil metil karbinol (asetoin), produk antara 2,3-butanediol dalam kondisi aerobik.

Acetoin tereduksi dan membentuk 2,3-butanediol, tetapi reaksi ini reversibel, oleh karena itu jika 2,3-butanediol teroksidasi, maka akan terbentuk asetoin. Oleh karena itu, oksigen sangatlah penting.

Dipotassium fosfat adalah buffer yang menyangga campuran pada pH 6,9 ± 0,2.

Pengungkapan bukti dan dasar interpretasi

Untuk mendemonstrasikan reaksi tersebut, pengembangan harus dilakukan dengan menggunakan dua reagen (reagen Barrit), yang dikenal sebagai Voges A dan Voges B.

Voges A adalah larutan 5% dari α-naftol, dan Voges B adalah sediaan kalium hidroksida 40%. Jika kalium hidroksida tidak tersedia, dapat diganti dengan 40% natrium hidroksida.

Α-Naphthol adalah katalis yang akan meningkatkan intensitas warna reaksi, membuat pengujian lebih sensitif. Α-naftol harus selalu ditambahkan terlebih dahulu, mengguncang tabung sehingga media bersentuhan dengan oksigen. Dengan cara ini asetoin yang ada dioksidasi menjadi diasetil, dan 2,3-butanadiol dioksidasi menjadi asetoin, meneruskannya ke diasetil.

Ini adalah bagaimana α-naftol akan mengikat diasetil, yang pada gilirannya telah bergabung dengan inti guanidin yang ada dalam asam amino arginin, yang terakhir berasal dari pluripepton.

Kalium atau natrium hidroksida bertanggung jawab untuk menyerap CO ₂ dan bereaksi dengan pepton. Reaksi ini menyebabkan terbentuknya warna salmon-pink, terlihat jelas setelah tabung digoyangkan dengan baik.

Jumlah diasetil, pepton, dan α-naftol yang tepat harus dicampur agar warna muncul secara instan. Jika ini tidak terjadi, selang dibiarkan istirahat selama 15 menit sebelum menerjemahkan.

Tes ini biasanya positif setelah 2 sampai 5 menit, ketika warna merah jambu samar dapat terlihat. Jika dibiarkan selama 30 menit hingga 1 jam, intensitas warna akan maksimal (merah intens).

Tes negatif akan muncul saat kaldu menguning. Setelah 1 jam, jika hasil tes negatif, warna tembaga dapat terbentuk sebagai hasil reaksi kalium hidroksida pada α-naftol.

Persiapan

MR / VP sedang

Timbang 17 g media kultur dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Diamkan selama 5 menit. Panaskan hingga mendidih agar larut sepenuhnya. Sajikan 3 sampai 4 ml dalam tabung dan sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Media kultur dehidrasi berwarna krem ​​dan media yang disiapkan berwarna kuning muda.

PH akhir medium adalah 6,9 ± 0,2.

Voges A reagen

Timbang 5 g α-naftol dan larutkan dalam 50 ml etil alkohol (mutlak). Kemudian lanjutkan dengan menambahkan etil alkohol hingga mencapai 100 ml.

Reagen Voges B.

Timbang 40 g kalium hidroksida dan larutkan dalam 50 ml air suling dalam gelas kimia. Gelas harus ditempatkan di bak air dingin untuk mengontrol suhu, karena ketika sediaan dilarutkan, suhu meningkat tajam.

Setelah larutan dingin, larutan dipindahkan ke labu ukur dan dibuat hingga 100 mL dengan air suling.

Prosedur pengujian Voges-Proskauer

Untuk melakukan uji Voges-Proskauer, kaldu RM / VP diinokulasi dengan mikroorganisme yang diteliti, dari kultur murni selama 18 hingga 24 jam.

Inokulum sebaiknya tidak terlalu padat. Itu diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam, meskipun inkubasi selama beberapa hari terkadang diperlukan. Cowan dan Steel berpendapat bahwa 5 hari adalah waktu inkubasi minimum yang diperlukan untuk mendeteksi semua spesies Voges-Proskauer (VP) positif dari famili Enterobacteriaceae.

Pengembangan tes

Pisahkan 1 mL alikuot ke dalam tabung dan kembangkan sebagai berikut: Tempatkan 12 tetes (0,6 mL) reagen Voges A dan 4 tetes (0,2 mL) Voges B. Campur hingga aerasi dan biarkan mengendap selama 5 - 10 menit sebelum menerjemahkan. Namun, jika tesnya masih negatif, diamkan dan amati tabung setelah 30 menit hingga 1 jam.

Munculnya warna merah muda-merah menandakan bahwa reaksi Voges-Proskauer positif. Jika medium tetap kuning reaksinya negatif.

Menambahkan pengembang dalam urutan dan kuantitas yang ditunjukkan sangat penting untuk menghindari negatif palsu.

Menggunakan

Uji Voges-Proskauer berguna untuk membedakan antara strain E. coli yang VP negatif, dari genera Klebsiella, Enterobacter, Serratia, antara lain yang VP positif.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

Strain kontrol, termasuk Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium dan Enterobacter cloacae ATCC 13047, dapat digunakan untuk menguji kualitas media yang disiapkan.

Hasil yang diharapkan adalah reaksi Voges-Proskauer positif hanya untuk K. pneumoniae dan E. cloacae. Sisanya memberikan reaksi negatif.

Referensi

1. Laboratorium Britannia. MR-VP Medium. 2015. Tersedia di: www.britanialab.com
2. Laboratorium Microkit. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Tersedia: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.