MEDIO MIO: PONDASI, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The MIO media adalah tes biokimia digunakan untuk membantu dalam identifikasi spesies bakteri milik keluarga Enterobacteriaceae. Ini cukup bergizi dan terdiri dari glukosa, ekstrak ragi, pepton, triptein, L-ornithine hydrochloride, bromocresol purple, dan agar.

Arti dari akronimnya (MIO) menggambarkan setiap parameter yang dapat diamati pada media ini; motilitas, indol dan ornithine. Motilitas adalah kemampuan mikroorganisme untuk bergerak karena adanya flagela. Agar sifat ini diamati, konsistensi media harus setengah padat, sehingga sediaan mengandung lebih sedikit agar.

Garis besar interpretasi hasil dalam media MIO. Sumber: Disiapkan oleh penulis MSc. Marielsa gil

Produksi indol menunjukkan adanya enzim triptofanase yang bekerja pada asam amino triptofan, membutuhkan penggunaan reagen pengungkap untuk membuat produksi indol terlihat.

Akhirnya, ornithine menentukan apakah bakteri mampu mendekarboksilasi asam amino, yaitu jika memiliki enzim orinithine dekarboksilase.

Dasar

Pepton, ekstrak ragi dan triptein

Elemen-elemen ini berkontribusi pada kekuatan nutrisi media ini. Mereka berfungsi sebagai sumber nutrisi dan asam amino esensial untuk perkembangan bakteri.

Selain itu, triptein merupakan sumber triptofan untuk menunjukkan keberadaan enzim triptofanase, yang mendegradasi triptofan dengan cara deaminasi reduktif, melepaskan indol, asam piruvat, amonia dan energi.

Indole tidak berwarna, oleh karena itu keberadaannya diungkapkan dengan menambahkan lima tetes reagen Ehrlich atau Kovacs, keduanya dengan p-dimethylaminobenzaldehyde.

Gugus aldehida dari senyawa ini bereaksi dengan indol, menghasilkan produk merah fuchsia berbentuk cincin pada permukaan agar-agar.

Setiap jejak warna harus dianggap sebagai tes positif. Buktinya harus segera dibaca, karena seiring waktu warnanya menurun.

Selanjutnya, tes ini harus diungkapkan setelah hasil motilitas dan dekarboksilasi ornithine telah dicatat.

Penafsiran

Tes positif: pembentukan cincin merah fuchsia saat menambahkan tetes reagen Kovacs.

Tes negatif: tidak ada pembentukan cincin.

Motilitas

Kemampuan bakteri untuk bergerak akan terlihat jika media keruh diamati atau jika ada garis pertumbuhan tebal yang meluas di sekitar inokulasi awal.

Tes motilitas negatif akan dibuktikan dengan mengamati garis tipis pertumbuhan, dan segala sesuatu di sekitarnya akan tanpa pertumbuhan.

Penting agar motilitas dibaca sebelum indol terungkap, karena penambahan reagen menutupi seluruh medium.

Pada bakteri yang bergerak tetapi tumbuh lambat, sulit untuk menunjukkan motilitasnya dengan media ini. Dalam kasus ini, disarankan untuk menggunakan tes atau metode lain, seperti motilitas sedang atau metode drop-pending.

Glukosa

Glukosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi, selain memberikan energi, mengasamkan lingkungan, kondisi yang diperlukan untuk dekarboksilasi asam amino ornithine.

Fermentasi glukosa harus selalu terjadi, dimulai dari prinsip bahwa semua bakteri yang termasuk dalam famili glukosa fermentasi keluarga Enterobacteriaceae.

L-Ornithine

Jika bakteri menghasilkan enzim ornithine dekarboksilase, ini dapat bekerja setelah media diasamkan dengan fermentasi glukosa.

Enzim ornithine dekarboksilase bekerja pada gugus karboksil dari asam amino menghasilkan amina yang disebut putresin yang membuat medium kembali menjadi alkali.

Tes ini harus dibaca setelah 24 jam inkubasi, karena jika Anda mencoba membaca sebelumnya Anda dapat salah mengartikan tes dengan negatif palsu.

Perlu diingat bahwa reaksi pertama yang terjadi adalah fermentasi glukosa, sehingga medium berubah menjadi kuning pada fase awal (10 sampai 12 jam pertama). Jika kemudian terjadi dekarboksilasi ornithine, media akan berubah menjadi ungu.

Penting untuk menafsirkan uji dekarboksilasi ornithine sebelum mengungkapkan indol, karena penambahan reagen Kovacs mengubah warna medium.

Penafsiran

Tes negatif: media dengan warna kuning atau dengan latar belakang kuning.

Tes positif: sedang ungu seluruhnya.

Indikator PH

Dalam hal ini, ungu bromokresol digunakan; yang bertanggung jawab untuk mengungkap ketika ada perubahan pH dalam medium. Setelah pengasaman, indikator berubah menjadi kuning, dan setelah alkalisasi, berubah menjadi ungu.

Teknik pembibitan dan pengembangan

Untuk menabur medium MIO, loop atau jarum lurus digunakan dan dengan itu sebagian koloni yang akan dipelajari dikumpulkan.

Tusukan dalam dilakukan di tengah MIO dalam garis lurus. Tidak disarankan untuk melakukan tusukan ganda, karena dapat memberikan gambaran yang salah tentang motilitas jika tusukan tidak dilakukan di tempat yang sama.

Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis. Lihatlah hasil dalam urutan ini: motilitas, dekarboksilasi ornithine dan akhirnya mengungkapkan indol.

Dianjurkan untuk mengambil 2 ml media secara aseptik, memindahkannya ke tabung steril dan melakukan uji indol di sana, sehingga jika negatif, sisa tabung asli dapat diinkubasi selama 24 jam lagi, untuk mengungkap indol lagi.

Pengembangan indol dilakukan sebagai berikut: 3 sampai 5 tetes reagen Kovacs ditambahkan ke media MIO dan diaduk dengan kuat. Ini diamati apakah cincin merah-fuchsia muncul atau tidak.

Persiapan

Media MIO

Timbang 31 g media MIO dan larutkan dalam satu liter air suling.

Panaskan hingga campuran mendidih selama satu menit, kocok terus hingga agar-agar benar-benar larut. Bagikan 4 ml media ke dalam 13/100 tabung reaksi dengan tutup kapas.

Sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit. Keluarkan dari autoclave dan biarkan berdiri tegak di rak, sedemikian rupa sehingga terbentuk balok semi padat.

Simpan di lemari es 2-8 ° C. Biarkan hangat sebelum menabur strain bakteri.

Warna media dehidrasi adalah krem ​​dan warna media yang disiapkan agak ungu pucat.

PH akhir dari media yang disiapkan adalah 6,5 ± 0,2

Media berubah menjadi kuning pada pH asam dan ungu pada pH basa.

Reagen Kovacs (Pengembang Uji Indole)

Reagen ini disiapkan sebagai berikut:

150 ml amil, isoamyl atau butyl alcohol (salah satu dari ketiganya) diukur. Di dalamnya 10 g p-dimethylaminobenzaldehyde dilarutkan. Selanjutnya 50 ml asam klorida pekat ditambahkan perlahan.

Reagen yang disiapkan tidak berwarna atau kuning muda. Ini harus disimpan dalam botol amber dan disimpan di lemari es. Warna coklat tua menunjukkan kemundurannya.

Reagen Kovacs juga dapat diganti dengan reagen Ehrlich. Yang terakhir, karena lebih sensitif, lebih disukai untuk mengungkapkan indol dalam bakteri yang memproduksinya dalam jumlah yang sangat kecil, seperti pada beberapa batang Gram-negatif non-fermentasi dan anaerob tertentu.

Menggunakan

Media ini merupakan tes yang melengkapi baterai tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang termasuk dalam famili Enterobacteriaceae.

Data dekarboksilasi ornithine berfungsi untuk membedakan Shigella sonnei, yang dites positif, dari Shigella boydii, Shigella flexneri, dan S. dysenterieae, yang hasil tesnya negatif.

Ia juga membedakan genus Klebsiella, yang dites negatif, dari genus Enterobacter, di mana sebagian besar spesiesnya dites positif.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

Setiap kali kumpulan media MIO disiapkan, uji kontrol dapat dilakukan. Untuk ini, strain yang diketahui atau bersertifikat digunakan untuk mengamati perilaku medium.

Strain yang dapat digunakan adalah Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes dan Proteus mirabilis.

Hasil yang diharapkan adalah E. coli dan M. morganii. Dan M: +, I: + dan O: +.

Klebsiella pneumoniae semuanya negatif (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis dan Enterobacter aerogenes menghasilkan M: + I: - dan O: +.

Referensi

1. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Laboratorium Britannia. MIO Medio 2015. Tersedia di: britanialab.com
5. Laboratorium BD. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Tersedia di: bd.com
6. Laboratorium Valtek. Motilitas MIO Sedang, Indole, Ornithine. 2010. Tersedia di: andinamedica.com