MEDIO: ALASAN, PERSIAPAN, PENGGUNAAN, DAN BATASAN - BIOLOGI - 2025

The OF atau glukosa fermentasi media adalah agar semi-padat yang dirancang khusus untuk studi tentang oksidatif dan metabolisme fermentasi karbohidrat dalam kelompok penting dari mikroorganisme selain Enterobacteriaceae, yang disebut non-enterik Gram negatif basil.

Itu dibuat oleh Hugh dan Leifson; para peneliti ini menyadari bahwa cara konvensional untuk mempelajari produksi asam dari karbohidrat tidak sesuai untuk kelompok bakteri tertentu.

A. basal komersial media. B. Tabung dengan OF berbiji sedang. Sumber: A dan B Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.

Ini karena batang Gram negatif non-enterik umumnya menghasilkan asam dalam jumlah rendah, tidak seperti Enterobacteriaceae.

Dalam pengertian ini, medium OF memiliki karakteristik khusus yang dapat mendeteksi sejumlah kecil asam yang terbentuk, baik melalui jalur oksidatif maupun fermentatif. Perbedaan tersebut berkaitan dengan jumlah pepton, karbohidrat dan agar.

Media ini mengandung lebih sedikit pepton dan konsentrasi karbohidrat yang lebih tinggi, sehingga mengurangi produk yang membuat medium menjadi basa akibat metabolisme protein dan meningkatkan produksi asam karena penggunaan karbohidrat.

Di sisi lain, penurunan jumlah agar membantu penyebaran asam yang dihasilkan ke seluruh media, selain memungkinkan kita untuk mengamati motilitas.

Media OF terdiri dari pepton, natrium klorida, bromotimol biru, kalium fosfat, agar, dan karbohidrat. Karbohidrat yang paling umum adalah glukosa tetapi yang lain dapat digunakan sesuai dengan yang ingin dipelajari, seperti laktosa, maltosa, xilosa, dan lain-lain.

Dasar

Seperti media kultur lainnya, media OF harus mengandung zat bergizi yang menjamin pertumbuhan bakteri; zat-zat ini adalah pepton.

Pada bagiannya, karbohidrat memberikan energi dan sekaligus berfungsi untuk mempelajari perilaku mikroorganisme terhadapnya, yaitu memungkinkan bakteri diklasifikasikan sebagai organisme oksidatif, fermentatif atau non-sakarolitik.

Media OF mengandung rasio pepton / karbohidrat 1: 5 dibandingkan dengan media konvensional 2: 1. Ini memastikan bahwa jumlah amina alkali yang terbentuk dari degradasi pepton tidak menetralkan pembentukan asam lemah.

Di sisi lain, medianya mengandung natrium klorida dan kalium fosfat. Senyawa ini secara osmotik menstabilkan medium dan mengatur pH masing-masing. Biru bromotimol adalah indikator pH, yang mengubah warna media dari hijau menjadi kuning seiring dengan pembentukan asam.

Beberapa mikroorganisme dapat menggunakan karbohidrat melalui jalur oksidatif atau fermentasi, sementara yang lain tidak menggunakan kedua jalur tersebut.

Ini tergantung pada karakteristik masing-masing mikroorganisme. Misalnya, beberapa mikroorganisme aerobik yang ketat dapat mengoksidasi karbohidrat tertentu, dan anaerob fakultatif dapat mengoksidasi dan memfermentasi tergantung pada lingkungan di sekitarnya, sementara yang lain tidak mengoksidasi atau memfermentasi karbohidrat (asacarolytic).

Terakhir, ada modifikasi media OF yang direkomendasikan oleh CDC yang mengandung basa khusus OF dengan indikator fenol merah.

Proses oksidasi

Proses oksidasi glukosa tidak memerlukan fosforilasi glukosa, seperti halnya proses fermentasi. Dalam hal ini gugus aldehida dioksidasi menjadi gugus karboksil, menghasilkan asam glukonat. Ini pada gilirannya dioksidasi menjadi 2-ketogluconic.

Yang terakhir terakumulasi atau terurai menjadi dua molekul asam piruvat. Sistem ini membutuhkan adanya oksigen atau senyawa anorganik sebagai akseptor elektron terakhir.

Produksi asam melalui jalur ini lebih lemah daripada yang diperoleh melalui jalur fermentasi.

Proses fermentasi

Agar fermentasi glukosa terjadi melalui salah satu rute yang tersedia, pertama-tama harus difosforilasi, menjadi glukosa-6-fosfat.

Fermentasi glukosa dapat mengambil beberapa rute, yang utama adalah rute Embden-Meyerhof-Parnas, tetapi mereka juga dapat mengambil rute Entner-Doudoroff, atau rute monofosfat heksosa Warburg-Dickens, juga dikenal sebagai rute dari degradasi pentosis.

Rute yang dipilih akan bergantung pada sistem enzimatik yang dimiliki mikroorganisme.

Melalui Embden-Meyerhof- Parnas

Pada fermentasi glukosa melalui jalur Embden-Meyerhof-Parnas dipecah menjadi dua molekul triosa, untuk kemudian didegradasi menjadi berbagai senyawa karbon, hingga terbentuknya gliseraldehida-3-fosfat. Dari sanalah zat perantara berasal, yaitu asam piruvat.

Dari situ akan terbentuk berbagai jenis asam campuran yang dapat bervariasi dari satu spesies ke spesies lainnya.

Sistem ini terjadi tanpa adanya oksigen dan membutuhkan senyawa organik sebagai akseptor elektron terakhir.

Jalur Entner-Doudoroff

Dalam fermentasi glukosa melalui jalur Entner-Doudoroff, glukosa 6-fosfat menjadi glukono-ᵼ-lakton-6-fosfat dan dari sana dioksidasi menjadi 6-fosfoglukonat dan 2-keto-3-deoksi-6- fosfoglukonat, akhirnya membentuk asam piruvat. Jalur ini membutuhkan oksigen agar glikolisis terjadi.

Jalur degradasi Pentoses atau jalur Warburg-Dickens Hexoxa monophosphate

Rute ini adalah gabungan dari 2 di atas. Ini dimulai mirip dengan jalur Entner-Doudoroff, tetapi kemudian gliseraldehida-3-fosfat dibentuk sebagai prekursor untuk asam piruvat, seperti yang terjadi pada jalur Embden-Meyerhof-Parnas.

Persiapan

Menimbang:

2 g pepton

5 g natrium klorida

10 g D-glukosa (atau karbohidrat yang akan disiapkan)

0,03 g bromotimol biru

3 gr agar

0,30 g kalium fosfat

1 liter air suling

Campur semua senyawa kecuali karbohidrat dan larutkan dalam 1 liter air suling. Panaskan dan kocok hingga benar-benar larut.

Pada pendinginan hingga 50 ° C, 100 ml glukosa 10% (disaring) ditambahkan.

Distribusikan secara aseptik 5 ml media OF ke dalam tabung reaksi yang tertutup kapas dan autoklaf pada 121 ° C, tekanan 15 pon selama 15 menit.

Biarkan mengeras dalam posisi vertikal.

PH medium harus 7.1 Warna dari media yang disiapkan adalah hijau.

Simpan di lemari es.

Aplikasi

Media OF merupakan media khusus untuk menentukan perilaku metabolisme mikroorganisme terhadap karbohidrat. Terutama bagi yang membentuk sedikit asam, lemah atau tanpa asam.

Ditabur

Untuk setiap mikroorganisme diperlukan 2 tabung OF, keduanya harus diinokulasi dengan mikroorganisme yang akan dipelajari. Koloni diambil dengan gagang lurus dan dilakukan tusukan di tengah tabung tanpa mencapai dasar; Beberapa tusukan dapat dilakukan, selama tidak ada minat untuk mengamati motilitas.

Lapisan petrolatum cair steril atau parafin cair steril (kira-kira 1 sampai 2 ml) ditambahkan ke salah satu tabung dan diberi label huruf "F". Tabung lainnya dibiarkan asli dan diberi label "O". Kedua tabung diinkubasi pada suhu 35 ° C dan diamati setiap hari hingga 3 sampai 4 hari.

Penafsiran

Metabolisme dan produksi gas

Tabel: Klasifikasi mikroorganisme menurut perilakunya dalam tabung terbuka (oksidatif) dan tertutup (fermentatif)

Sumber: Dibuat oleh penulis MSc. Marielsa gil

Gas diamati dengan pembentukan gelembung atau perpindahan agar-agar.

Perlu dicatat bahwa organisme yang hanya mengoksidasi glukosa tetapi tidak memfermentasi glukosa, tidak akan dapat memfermentasi karbohidrat lain, bagaimanapun juga ia hanya akan mengoksidasi. Oleh karena itu, dalam situasi ini, tabung tertutup untuk mempelajari karbohidrat lain akan dihilangkan.

Motilitas

Selain itu, motilitas dapat dilihat pada medium OF.

Motilitas positif : pertumbuhan yang tidak terbatas pada area inokulasi. Ada pertumbuhan di sisi tabung.

Motilitas negatif : pertumbuhan hanya pada inokulum awal.

QA

Strain berikut dapat digunakan sebagai kontrol kualitas: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa dan Moraxella sp. Hasil yang diharapkan adalah:

1. coli: Fermentor glukosa (tabung kuning dan berkilau).
2. aeruginosa: Pengoksidasi glukosa (tabung kuning terbuka dan segel hijau atau biru).
3. Moraxella sp: Tidak sakarolitik (tabung terbuka hijau atau biru, tabung tertutup hijau).

Batasan

-Beberapa mikroorganisme tidak dapat tumbuh dalam medium OF. Dalam kasus ini, tes diulangi tetapi serum 2% atau ekstrak ragi 0,1% ditambahkan ke media.

Reaksi -Oksidasi sering hanya diamati di dekat permukaan dan sisa medium bisa tetap hijau, dengan cara yang sama dianggap positif.

Referensi

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratorium Francisco Soria Melguizo. 2009. DARI Media Glukosa. Tersedia di: http://f-soria.es
5. Laboratorium Conda Pronadisa. DARI medium glukosa. Tersedia di: condalab.com
6. Laboratorium BD. 2007. DARI Basal Medium. Tersedia di: bd.com