APUSAN DARAH: CIRI, JENIS, TEKNIK DAN HISTOLOGI - BIOLOGI - 2024

The hapusan darah adalah apusan darah tepi yang digunakan untuk menganalisis komponen hadir dalam sirkulasi darah. Pengamatan apus darah memberikan data hematologi yang sangat berguna untuk diagnosis dan tindak lanjut dari banyak patologi.

Apusan darah memungkinkan untuk mengukur jumlah berbagai jenis sel darah putih (rumus leukosit), serta memungkinkan analisis morfologi dan bentuk eritrosit, leukosit dan trombosit.

Persiapan apusan darah. Sumber: Darah di gelas laboratorium. Public DomainPictures.net

Di dalamnya dapat dideteksi kelainan jumlah sel, seperti: leukositosis atau leukopenia, limfositosis atau limfopenia, neutrofilia atau neutropenia, trombositosis atau trombositopenia dan eosinofilia. Ukuran sel dan kelainan bentuk juga dapat dilihat.

Selain itu, dimungkinkan untuk mendeteksi berbagai jenis anemia, leukemia, dan infeksi bakteri atau parasit darah.

Untuk ini, ada berbagai jenis smear yang dilakukan tergantung dari tujuan penelitian. Ada noda tipis dan noda tebal. Corengan ini berbeda dalam teknik pelaksanaan dan tujuan penelitian.

Mereka dengan tetes halus digunakan sebagai tambahan untuk hematologi lengkap. Ini memberikan data tentang rumus leukosit, selain analisis bentuk dan morfologi dari tiga seri sel yang membentuk darah: seri merah, seri putih dan trombosit. Meskipun mereka juga berfungsi sebagai pelengkap studi film darah tebal.

Lapisan tebal digunakan untuk diagnosis penyakit yang disebabkan oleh hemoparasit, seperti malaria atau malaria, toksoplasmosis, leishmaniasis, penyakit Chagas, babesiosis dan mikrofilariasis.

Karakteristik apusan darah

Apusan darah yang baik harus memenuhi karakteristik tertentu. Diantaranya kami dapat menyebutkan:

-Sampel harus memenuhi persyaratan kualitas minimum agar dapat mewakili.

-Pengambilan sampel harus dilakukan dengan baik.

-Pelaksanaan smear tepat waktu.

-Jika dilakukan dengan darah vena, gunakan antikoagulan yang tidak merusak sel dan mencampur tabung sebelum membuat apusan.

-Jika sudah dilakukan dengan darah kapiler, buang tetes pertama.

-Penyebaran harus homogen. Hal ini memastikan bahwa sel-sel tersebut terdistribusi secara merata dan sel darah dapat dianalisis dengan baik untuk bentuk dan jumlahnya.

- Sisi noda harus halus dari awal sampai akhir.

-Noda noda harus mengikuti margin 1 hingga 2 mm ke sisi slide.

-Lapisan noda akan berkurang ketebalannya secara bertahap dari awal sampai akhir (noda dengan sedikit tetes dengan metode slide).

-Itu harus diberi label dengan benar untuk menghindari kebingungan sampel.

-Perbaiki dan warnai dengan benar untuk pengamatan yang jelas dari elemen darah.

-Biarkan apusan mengering dengan baik sebelum memasang preparat di bawah mikroskop. Menempatkan minyak imersi pada noda basah akan menyebabkan terbentuknya misel yang menghalangi sel terlihat.

Jenis hapusan darah

Apusan darah tepi dapat diklasifikasikan menjadi apusan tipis dan apusan tebal. Mereka dengan lapisan tipis digunakan untuk mempelajari rumus leukosit dan pengamatan morfologi sel darah. Bakteri ekstraseluler seperti borrelia dan hemoparasit intraseluler, seperti plasmodium, juga dapat dilihat.

Dalam blob halus, spesies parasit dapat diidentifikasi, oleh karena itu, ini merupakan teknik yang lebih spesifik daripada blob tebal, tetapi blob tebal lebih sensitif, karena ini adalah teknik konsentrasi yang digunakan untuk pencarian hemoparasit ekstraseluler secara menyeluruh.

Ada dua jenis noda halus: yang dilakukan pada slide dan yang dilakukan pada penutup bibir. Corengan tebal dilakukan pada slide.

Teknik pengambilan sampel darah

Apusan darah dapat dibuat dari tusukan kapiler atau sampel vena yang diambil dengan antikoagulan. Jika dilakukan dari darah dengan antikoagulan, apusan dapat dibuat hingga 2 jam setelah pengambilan sampel.

Perhatian harus diberikan untuk penggunaan antikoagulan yang tidak merusak sel darah. Opsi terbaik adalah EDTA. Sebaliknya, penggunaan antikoagulan seperti trisodium sitrat harus dihindari.

Jika sampel diambil dengan tusukan kapiler, apusan harus segera diperpanjang, sebelum darah menggumpal.

Tetesan pertama harus dibuang, membiarkan tetesan berikutnya keluar secara spontan untuk menghindari pengenceran sampel dengan cairan jaringan. Ini adalah teknik yang paling direkomendasikan untuk pengamatan morfologi sel, karena darah tidak memiliki zat aditif.

Untuk observasi hemoparasit, Solari dkk menyimpulkan dalam penelitian mereka bahwa kedua teknik (venipungsi dan kapiler) sama-sama efisien.

Jenis pengambilan sampel darah: A. Tusukan kapiler. B. Tusukan vena. Sumber: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Teknik menyiapkan apusan darah

Pemeriksaan darah dapat dilakukan secara manual pada kaca objek mikroskop atau pada kaca penutup atau kaca objek. Ini juga dimungkinkan melalui peralatan otomatis.

-Slides smear

Ini adalah teknik yang disukai oleh kebanyakan laboratorium karena penanganannya yang mudah.

Dengan menggunakan pipet Pasteur, tempatkan setetes darah yang tidak terlalu kental atau sangat halus di tengah salah satu ujung kaca pembesar yang bersih.

Smear dibuat dengan bantuan slide lain dengan ujung tanah. Slide kaca tanah ditempatkan tegak lurus dengan ujung berlawanan dari tempat tetesan berada.

Ini miring ke sudut antara 30-45 ° dan meluncur ke arah drop; Ketika disentuh, itu mengembang secara linier di atas tepi slide tanah dan dengan gerakan yang konstan dan pasti, lembaran itu kembali; sebelum mencapai ujung, slide diangkat.

Dengan cara ini, lapisan homogen tersebar di permukaan slide penerima.

Noda dibiarkan mengering. Kemudian diperbaiki dan diwarnai dengan noda yang disukai. Biarkan mengering dengan baik sebelum dilihat di bawah mikroskop. Setetes minyak ditempatkan di wajah yang menunjukkan noda dan diamati di bawah mikroskop cahaya.

Noda darah pada slide. Gambar atas: noda tanpa noda. Gambar bawah: noda noda. Sumber: Coinmac

Bagian dari noda dibuat pada slide

Pada jenis noda ini, tiga area yang ditentukan dapat dibedakan: kepala, badan dan ekor. Kepala berhubungan dengan area di mana noda mulai, itu adalah area yang paling tebal dan tidak baik untuk diamati.

Tubuh adalah bagian tengah atau tengah dari smear, itu adalah area terbaik untuk diamati di bawah mikroskop, karena di sana sel-selnya terdistribusi secara seragam dan morfologinya dipertahankan.

Ekornya sesuai dengan bagian akhir dari noda; disini distribusinya tidak lagi seragam dan morfologi eritrosit cenderung hilang.

Kontrol kualitas dalam teknik slide

Dalam teknik ini, ini memainkan peran mendasar:

-Pembersihan dan degreasing slide: ini menjamin geser sampel yang baik.

-Ukuran tetesan: dengan tetesan yang sangat besar akan diperoleh noda yang lebih tebal dan lebih panjang, dengan tetesan yang sangat kecil penyebarannya akan lebih pendek dan sangat halus.

-Kecepatan yang diterapkan pada ekstensi: semakin rendah kecepatan noda akan semakin tipis, semakin tinggi kecepatan noda akan semakin tebal.

-Sudut eksekusi: semakin kecil sudutnya semakin halus noda, semakin besar sudutnya semakin tebal.

-Langkah di coverlip

Ini tidak banyak digunakan karena penanganan penutup penutup yang rapuh tidak praktis, namun menawarkan keuntungan besar, karena distribusi sel yang lebih baik diperoleh di seluruh noda.

Tetesan yang tidak terlalu tebal dan tidak terlalu halus ditempatkan di tengah kaca penutup. Segera penutup penutup lain ditempatkan di atasnya sedemikian rupa sehingga ujung kedua penutup mata menonjol, membentuk bintang.

Tetesan air akan secara spontan menyebar ke permukaan kedua kaca penutup. Di akhir perpanjangan, setiap slide digeser ke sisi yang berlawanan satu sama lain (satu ke kanan dan yang lainnya ke kiri) dengan cepat.

Teknik ini memberikan dua noda, bukan satu.

Mereka ditempatkan untuk dikeringkan dengan sisi yang menyebar menghadap ke atas. Setelah kering, diperbaiki dan diwarnai dengan teknik pilihan. Biarkan mengering. Setetes minyak imersi ditempatkan pada kaca objek, noda ditempatkan dengan sisi noda menghadap ke bawah, dan dilihat di bawah mikroskop.

Pengendalian kualitas dalam teknik penutup penutup

Untuk mendapatkan smear yang baik untuk teknik ini, penting untuk:

-Membersihkan kaca penutup (membantu sampel meluncur dengan lancar).

-Ukuran tetesan (mempengaruhi ketebalan noda).

-Kecepatan pemisahan penutup penutup (mempengaruhi homogenitas penyebaran).

-Dengan peralatan otomatis

Mereka dapat dilakukan melalui salah satu tim berikut: Spinner dan Autoslide.

Spinner terdiri dari menempatkan slide dengan setetes darah di atas pelat sentrifus khusus. Sampel disentrifugasi dengan kecepatan tinggi; dengan cara ini smear sampel yang homogen dan halus terbentuk. Ini memiliki kelemahan dari kemungkinan hemolisis sampel.

Autoslide adalah instrumen yang secara mekanis melakukan gerakan untuk mengeksekusi noda pada slide. Anda juga bisa memperbaiki dan menodai noda. Itu bahkan dapat disesuaikan dengan beberapa penghitung hematologi otomatis.

Teknik smear tebal

Untuk mencari hemoparasit, disarankan dua smear: satu dengan tetesan halus dan satu dengan tetesan tebal.

Lakukan tusukan kapiler, bersihkan tetes pertama. Tempatkan setetes halus pada slide dan olesi seperti yang dijelaskan sebelumnya. Untuk manik tebal, letakkan manik besar di slide lain dan sebarkan menjadi persegi 1,55 mm. Biarkan kedua noda mengering.

Pewarnaan noda

Pewarnaan Giemsa atau Wright, antara lain, dapat digunakan untuk obat tetes halus. Pewarnaan Giemsa atau May-Grunwald Giemsa direkomendasikan untuk noda yang tebal.

Noda Giemsa

Apusan difiksasi selama 3 menit dengan metanol, dikeringkan dan dibiarkan mengering kembali. Apusan tersebut kemudian ditutup dengan pewarnaan Giemsa selama 10-15 menit. Itu dicuci dengan air suling dan dibiarkan kering. Untuk mengamati di bawah mikroskop setetes minyak imersi ditempatkan.

Noda Wright

Noda tersebut ditutup dengan noda Wright selama 5 menit. Buang dan tempatkan larutan buffer pada pH 6,8 selama 6 menit. Tiup persiapan untuk menghomogenkan. Cuci dengan air suling dan biarkan mengering. Amati di bawah mikroskop.

Jenis noda yang rusak

Itu terjadi pada peserta pelatihan dalam teknik penurunan halus dengan perosotan.

Smear dengan area dengan ketebalan berbeda (tipis dan tebal diselingi)

Itu karena pergerakan yang dijalankan tidak konstan selama penyebaran, membuat berhenti dan memulai kembali.

Smear smear sangat pendek

Mereka memiliki 2 penyebab: satu karena fakta bahwa slide tanah telah diangkat sebelum mencapai ujung slide yang lain. Dalam hal ini sangat tebal dan pendek.

Sebaliknya jika apusannya pendek tapi tipis, hal itu karena ukuran tetesannya sangat kecil.

Lumuri dengan area yang digaruk menjelang akhir noda

Ini memiliki beberapa penyebab: satu adalah tepi tanah rusak, bahwa tekanan yang diberikan pada slide penerima meningkat pada saat penyebaran atau bahwa tepi tanah dari slide sudah aus.

Lumuri dengan formasi vakuola atau area bulat atau elips yang jelas

Hal ini disebabkan oleh penggunaan noda berminyak (dicuci dan diencerkan dengan buruk).

Noda yang sangat kental atau sangat tipis

Tetesan yang terlalu besar akan menghasilkan noda yang sangat tebal dari awal sampai akhir dan tetesan yang sangat kecil akan menghasilkan noda yang sangat halus.

Histologi

Sel darah dapat dilihat pada apusan darah. Diantaranya adalah:

-Erythrocytes atau sel darah merah

Darah manusia, eritrosit atau sel darah merah dan dua sel darah putih. Diambil dan diedit dari: Viascos. Pengamatan Anda adalah yang paling penting. Pada level ini, anemia, talasemia, penyakit sumsum tulang, dll dapat dideteksi.

Jumlah eritrosit atau sel darah merah adalah sekitar 5 x 10 ⁶ mm3 pada pria dan 4,5 x 10 ⁶ pada wanita. Sel darah merah berbentuk seperti cakram ganda, dengan pucat fisiologis sentral. Mereka dapat dilihat secara terpisah (normal) atau membentuk tumpukan rouleaux (abnormal).

Smear juga menunjukkan poikilositosis (sel darah merah berbagai bentuk), anisositosis (sel darah merah dengan berbagai ukuran), anisopoikilositosis (berbagai bentuk dan ukuran), anisokromia (warna berbeda), eritroblas (sel darah merah yang belum matang), mikrositosis (sel darah merah yang lebih kecil) ) dan makrosit (eritrosit yang lebih besar).

Ketika mereka menunjukkan kekurangan dalam jumlah hemoglobin dan pucat sentral meningkat, dikatakan ada hipokromia. Ketika rangkaian merah normal diamati, itu akan dilaporkan sebagai normositik dan normokromik.

Sel darah putih atau leukosit

sel darah putih

Jumlah normalnya berkisar antara 5.000 hingga 10.000 mm ³ . Mereka berubah dalam proses infeksi, alergi dan leukemia. Beberapa jenis dapat dibedakan dalam hapusan darah, yang dijelaskan di bawah ini.

Neutrofil tersegmentasi

Mereka mewakili 55-65% dari total leukosit. Mereka mengukur antara 10-15 μm. Mereka memiliki inti tersegmentasi atau berlobus yang mengadopsi morfologi berbeda, oleh karena itu disebut polimorfonuklear.

Mereka memiliki butiran neutrofil yang melimpah di sitoplasma dan beberapa azurofil. Mereka meningkatkan infeksi bakteri (neutrofilia), penurunan infeksi virus (neutropenia).

Abnormalitas morfologi seperti pleokariositosis (nuklei tersegmentasi hiper), lengkungan (sel imatur) atau kebijakan makro (berbentuk oval dan besar) dapat diamati.

Perubahan lainnya:

Granulasi -Toxic

Neutrofil -Pseudo Pelger (nukleus tidak menunjukkan lobulasi atau mereka berlobang dua).

Tubuh -Döhle: inklusi sitoplasma biru tua.

- Peningkatan basofilia sitoplasma.

Vakuola intrasitoplasma.

-Piknosis sel (hilangnya jembatan internuklir).

Eosinofil tersegmentasi

Mereka mewakili 1-3% dari total sel darah putih. Mereka mengukur 9-10 μm. Mereka dicirikan oleh adanya butiran sitoplasma asidofilik yang melimpah dan sedikit azurofil. Intinya memiliki dua lobulasi. Jumlah mereka meningkat pada alergi dan penyakit yang berasal dari parasit.

Basofil tersegmentasi

Mereka sangat jarang, mewakili 0-1% leukosit. Mereka mengukur 10-12μm. Nukleus biasanya tidak beraturan dalam batas-batasnya dan dapat menjadi bilobed, tetapi tidak terlihat karena banyaknya granulasi basofilik kasar di dalam sitoplasma. Sangat jarang, basofilia bisa terlihat.

Limfosit

Mereka adalah sel-sel kecil dengan sitoplasma basofilik, dengan inti, berbatas tegas, bulat, dengan kromatin terkondensasi. Inti mencakup hampir seluruh sel. Mereka mewakili 26-40% leukosit darah. Mereka meningkatkan infeksi virus (limfositosis). Limfosit reaktif dapat dilihat.

Monosit

Sel lebih besar dari limfosit, dengan sitoplasma lebih besar dan lebih longgar, inti kromatin oval. Mereka mengukur 9-12μm. Sitoplasma berlimpah dan biasanya tampak biru pucat keabu-abuan dengan teknik pewarnaan standar. Monosit vakuolasi dan monositosis dapat diamati di antara perubahannya.

-Trombosit

Mereka mengukur antara 1,5-3 μm. Bentuknya bulat atau lonjong. Nilai normalnya berkisar antara 150.000 sampai 350.000 trombosit / mm3. Mereka dapat menurun pada beberapa infeksi virus. Mereka tidak memiliki inti dan berwarna ungu. Kelainan dapat dilihat pada seri ini, seperti trombosit makro atau mikro, trombositosis atau trombositopenia, dan fragmen trombosit.

Elemen patologis

Parasit darah

Hemoparasit, seperti agen penyebab malaria atau malaria (parasit dari genus Plasmodium), dapat terlihat pada apusan darah. Untuk alasan ini, noda tersebut harus dianalisis secara manual, karena peralatan otomatis melewatkan temuan ini.

Bakteri

Dalam patologi seperti demam kambuh atau penyakit Lyme, agen penyebabnya dapat diamati. Dalam hal ini, sesuai dengan Borrelia recurrenti spirochetes dan Borrelia burgdorferi dalam apusan darah.

Sel yang belum matang

Kasus yang parah diamati pada leukemia, reaksi leukemoid, dan reaksi leukoeritroblastik, antara lain. Pada infeksi bakteri mungkin ada sedikit penyimpangan ke kiri (adanya penjahat). Eritroblas juga dapat terlihat pada beberapa anemia.

Referensi

1. Darah dan jaringan hematopoietik. Tersedia di: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Interpretasi laboratorium klinis. Edisi ke-8. Editorial Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Accounts A.Perbandingan kepadatan parasit pada tetesan darah vena kental versus akupresur dalam diagnosis Malaria vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Tersedia di: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Pentingnya studi apusan darah tepi pada orang tua. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Tersedia di: scielo.sld
5. Grinspan S. Studi tentang apus darah tepi. Melanjutkan pendidikan kedokteran. Tersedia di: bvs.hn/RMH