Rose Bengal adalah tes laboratorium berdasarkan reaksi antigen-antibodi untuk diagnosis brucellosis. Teknik ini memungkinkan deteksi antibodi spesifik terhadap bakteri Brucella abortus dalam sampel serum manusia. Hasilnya dapat dilaporkan secara kualitatif atau semi-kuantitatif.
Bentuk kualitatif mengungkapkan apakah pasien positif atau negatif untuk tes, ada antibodi atau tidak. Sementara itu, laporan semi-kuantitatif dilaporkan dalam IU / ml dan menunjukkan perkiraan jumlah antibodi yang ada. Perlu diperhatikan bahwa antibodi hanya akan diproduksi jika pasien telah mengalami kontak dengan mikroorganisme.
Reaksi Rose Bengal di piring aglutinasi. Sumber: diambil dari video https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
Karena kesederhanaannya yang luar biasa, kepekaan dan spesifisitasnya yang tinggi, ini adalah salah satu teknik seroaglutinasi yang paling banyak digunakan dalam pengobatan sebagai tes awal untuk diagnosis penyakit ini.
Beberapa peneliti telah membandingkan kemanjuran uji Rose Bengal dengan teknik lain, seperti seroaglutinasi (antigen demam) dan telah mengamati bahwa meskipun terdapat korelasi yang baik, mereka melihat kasus-kasus terisolasi di mana uji antigen demam negatif dan Rose de Flare positif.
Perbedaan yang diperoleh karena pasien tersebut memiliki subkelas antibodi IgG terhadap Brucella abortus dengan kapasitas pengikatan yang lebih baik pada pH asam, oleh karena itu mereka dapat bereaksi dengan pereaksi Rose Bengal tetapi tidak dengan antigen demam.
Dalam pengertian ini, mereka menyarankan agar reagen teknik antigen demam dimodifikasi menjadi pH asam sehingga mereka dapat mendeteksi jenis kasus ini.
Dasar
Reagen Rose Bengal terdiri dari suspensi antigenik. Ini terdiri dari strain S99 dari Brucella abortus, diencerkan dalam buffer laktat asam (pH 3,6), ditambah fenol dan pewarna Rose Bengal.
Oleh karena itu, dalam sampel yang dicari adalah antibodi anti-Brucella, jika ada, mereka akan bereaksi dengan antigen reagen dan reaksi aglutinasi yang terlihat secara makroskopis akan diamati. Tes mendeteksi antibodi IgM atau antibodi IgG.
Ini berarti bahwa ia dapat mendeteksi penyakit baik pada stadium akut dimana antibodi IgM berlaku atau pada stadium kronis dimana antibodi IgG mendominasi.
Ini merupakan keuntungan karena meningkatkan sensitivitas tes, tetapi pada saat yang sama merugikan karena tidak membedakan antara satu tahap dan tahap lainnya, karena reaksi dengan antibodi IgM dan IgG adalah identik.
Pengujian harus selalu dilakukan bersama dengan kontrol negatif dan kontrol positif. Kontrol negatif berisi serum hewan tanpa antibodi dan kontrol positif berisi serum hewan dengan 50 IU / ml antibodi anti-Brucella.
Menggunakan
Brucellosis merupakan penyakit serius yang cenderung kronis dan berbahaya, sehingga sangat penting untuk didiagnosis sejak dini. Ini adalah zoonosis dan manusia dapat terinfeksi melalui kontak langsung dengan bahan yang terkontaminasi, orang yang paling rentan adalah dokter hewan dan perawat hewan.
Infeksi juga dapat terjadi dengan memakan daging mentah yang terinfeksi, di antara bentuk-bentuk infeksi lainnya.
Penyakit ini menyerang secara lokal atau sistemik. Bentuk sistemik adalah yang paling serius, karena berbagai organ dapat terpengaruh, termasuk sistem endotel retikulum (hati, limpa, sumsum tulang), kulit (selulitis dan limfadenopati), sistem pernapasan (pneumonia), sistem muskuloskeletal (artritis, sakroiliitis dan spondilitis), antara lain.
Tes Rose Bengal adalah teknik yang sangat berguna untuk melakukan pemeriksaan awal, karena sangat murah, mudah digunakan, dan memiliki spesifisitas serta sensitivitas yang tinggi.
Kasus negatif palsu dan positif palsu sangat jarang terjadi, dan dapat terjadi pada orang dengan titer antibodi yang sangat rendah (<25 IU / ml) atau sangat tinggi (> 1000 IU / ml).
Proses
bahan
-Rose Bengal Kit
-Aglutination plate latar belakang putih
-50 µl pipet
-Rotator (opsional)
-Pusaran
Teknik (metode kualitatif)
Kit Rose Bengal komersial dilengkapi dengan reagen siap pakai.
-Temperasikan reagen sebelum mulai bekerja.
-Pelat aglutinasi memiliki gambar lingkaran, masing-masing untuk sampel yang berbeda. Gunakan 3 lingkaran, yang pertama untuk kontrol negatif, yang kedua untuk sampel, dan yang ketiga untuk kontrol positif.
-Tempatkan setetes atau 50 µl dari kontrol dan sampel dalam lingkaran yang sesuai.
-Campur reagen Rose Bengal menggunakan pusaran. Tempatkan setetes di sebelah yang ditempatkan sebelumnya.
-Campur dengan tusuk gigi kayu (gunakan satu untuk setiap spesimen atau kontrol). Lakukan gerakan melingkar dan sebarkan sehingga Anda menutupi seluruh lingkaran.
Sumber: gambar diambil dari Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Tata letak gambar diedit.
-Tempatkan pelat pada rotator otomatis pada 80 hingga 100 RPM atau putar secara manual selama 4 menit. Bacalah buktinya di akhir kali ini.
-Verifikasi bahwa kontrol diberikan seperti yang diharapkan. Bandingkan reaksi sampel uji dengan kontrol. Laporkan sebagai positif jika aglutinasi diamati dan sebagai negatif jika tidak ada aglutinasi.
Tes positif menunjukkan bahwa pasien memiliki jumlah yang sama dengan atau lebih besar dari 25 IU / ml antibodi anti-Brucella.
Interpretasi dari reaksi positif (dengan aglutinasi) dan negatif (tanpa aglutinasi). Sumber: Citrulline. Gambar diedit.
Teknik (semi-kuantitatif)
Jika dalam reaksi kualitatif sampel sangat positif, maka dapat dibuat semi-kuantitatif. Untuk ini, pengenceran ganda serial sampel dibuat dengan larutan garam fisiologis. Prosedur yang dijelaskan sebelumnya dilakukan dengan setiap pengenceran.
Hal tersebut juga diinterpretasikan dengan mengamati aglutinasi secara makroskopis. Hasilnya adalah titer pengenceran tertinggi di mana hasil positif diamati.
Untuk menghitung nilai perkiraan antibodi anti-Brucella digunakan rumus sebagai berikut:
25 IU / ml x titer reaksi = IU / ml
Contoh, jika seorang pasien dalam tes semi-kuantitatif tes positif pada pengenceran ½, ¼ dan 1/8 dan mulai negatif dari pengenceran 1/16 dan seterusnya, ini berarti pasien memiliki titer 8 .
Menerapkan rumus:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
-Kit memiliki tanggal kedaluwarsa dan harus dipatuhi. Sebaiknya tidak digunakan jika reagen sudah kedaluwarsa.
-Selama penggunaan, pastikan reagen tidak mengandung partikel padat, karena ini merupakan tanda kerusakan.
-Jaga jarak antara 2 dan 8 ° C.
-Jangan membekukan, tindakan ini merusak reagen secara permanen.
-Selalu lakukan tes bersama dengan kontrol negatif dan positif.
-Teknik ini mentolerir sampel serum dengan kadar lipemia dan hemolisis tertentu, namun tidak disarankan untuk menggunakan serum lipemik dan hemolisis secara berlebihan, kedua kondisi tersebut mengubah hasil tes.
-Selalu bawa reagen ke suhu kamar sebelum memulai analisis.
-Jangan menafsirkan reaksi yang memakan waktu lebih lama dari waktu yang disarankan, karena ini menghasilkan laporan positif palsu, karena setelah waktu tertentu reagen mengendap, mensimulasikan reaksi positif.
-Teknik ini sensitif 100% dan memiliki spesifisitas 98%.
-Setelah semi-kuantifikasi 1000 IU / ml ada kemungkinan mengamati efek prozon (negatif palsu karena kelebihan antibodi dibandingkan dengan jumlah antigen).
Referensi
- Rubio M, Barrio B dan Díaz R. Nilai tes Rosa de Bengala, Coombs dan kontra-immunoelectrophoresis untuk mendiagnosis kasus brucellosis manusia di mana aglutinasi serum negatif. Jurusan Mikrobiologi. Layanan Mikrobiologi Klinik. Klinik Universitas. Universitas Navarra. 406-407. Tersedia di: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Brucellosis." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 6 Des 2019, 14:37 UTC. 18 Des 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- Laboratorium Monlab. Monlab Bengal Rose - uji. 2016. Tersedia di: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Rev. Peru. Exp. Kesehatan Masyarakat 1997; 14 (1): 63-66. Tersedia di: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Tindak lanjut reaksi berantai klinis, serologis dan polimerase dari sebuah keluarga dengan brucellosis. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Tersedia di: scielo.conicyt.