SIM SEDANG: PONDASI, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The media SIM adalah agar semipadat dan diferensial, yang dirancang khusus untuk membantu mengidentifikasi beberapa bakteri, terutama Enterobacteriaceae. Ini terdiri dari triptein, pepton, besi sulfat, amonium sulfat, natrium tiosulfat, dan agar.

Media ini memungkinkan pelaksanaan tiga tes penting: produksi hidrogen sulfida (H ₂ S), pembentukan indol dan motilitas, karenanya SIM singkatan. Karena kegunaannya yang besar, ia tidak dapat absen di laboratorium bakteriologi.

A. Media SIM Komersial B. Uji SIM H2S (-), Indole (-) dan Motilitas (+) serta Uji SIM H2S (+), Indole (-), Motility (+). Sumber: A. Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Tidak seperti media lain, media harus semi padat agar kapasitas pergerakan beberapa bakteri dapat dideteksi. Dalam hal ini, tes ini bekerja sangat baik untuk Enterobacteriaceae, tetapi tidak pada batang Gram-negatif non-fermentasi, di mana metode lain lebih disukai, seperti tetesan gantung.

Media SIM memungkinkan untuk membedakan sifat spesifik tertentu yang menjadi ciri beberapa bakteri dalam hubungannya dengan yang lain. Misalnya Escherichia coli dibedakan menjadi H ₂ S (-), Indole (+) dan motilitas (+), sedangkan Proteus mirabilis adalah H ₂ S (+), indole (-), motility (+).

Dasar

Ini adalah media kultur yang dianggap berbeda, karena penggunaannya membedakan antara mikroorganisme yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida dari yang tidak; ini juga menyoroti bakteri yang membentuk indol dari triptofan dari yang tidak, dan akhirnya membedakan bakteri motil dari yang tidak bergerak.

Sumber daya

Seperti media kultur lainnya, ia memiliki elemen yang memberikan nutrisi yang diperlukan sehingga mikroorganisme yang tidak menuntut dapat berkembang. Elemen-elemen ini diwakili oleh pepton dan triptein.

Perkembangan mikroorganisme dalam medium sangat penting untuk dapat mengamati ada tidaknya karakteristik yang dinilai oleh medium tersebut.

Produksi hidrogen sulfida

Huruf S dari akronim SIM mengacu pada produksi hidrogen sulfida (H ₂ S). Bakteri yang mampu membentuk hidrogen sulfida akan mengambil sulfur dari natrium tiosulfat.

Setelah H ₂ S - gas tak berwarna - terbentuk, ia bereaksi dengan garam besi yang ada dalam medium, membentuk sulfida besi, terlihat jelas (endapan hitam). Bakteri yang tidak membentuk H ₂ S, biarkan medium berwarna asli (beige).

Adanya endapan hitam dapat menghambat interpretasi motilitas. Namun, sebagian besar Enterobacteriaceae penghasil H ₂ S diketahui motil secara positif, seperti Salmonella, Proteus, dan Citrobacter. Selain itu, endapan hitam yang menutupi hampir seluruh medium menunjukkan motilitas positif.

Pembentukan Indole

Huruf kedua dari akronim SIM adalah "I" yang melambangkan bentukan indol.

Dalam pengertian ini, triptein, selain sebagai sumber nutrisi, memenuhi fungsi fundamental lainnya. Pepton ini kaya akan asam amino yang disebut triptofan, oleh karena itu dapat menunjukkan bakteri yang menghasilkan triptofanase.

Enzim ini bertanggung jawab untuk membelah asam amino triptofan, dengan akibat pembentukan indol (zat tidak berwarna), asam piruvat dan amonium.

Oleh karena itu, untuk menunjukkan reaksi ini, perlu ditambahkan zat pengungkap (reagen Ehrlich atau reagen Kovac). Keduanya bereaksi dengan indol, membentuk zat berbentuk cincin fuchsia merah pada permukaan agar. Jika cincin fuchsia muncul, tes indole diartikan sebagai positif.

Bakteri yang tidak memiliki enzim ini tidak akan membentuk cincin dan diartikan sebagai uji indol negatif.

Penting untuk dicatat bahwa uji indol harus menjadi yang terakhir untuk diinterpretasikan, karena setelah reagen ditambahkan, medianya menjadi keruh, sehingga sulit untuk memvisualisasikan motilitas.

Motilitas

Akhirnya huruf "M" dari kata SIM berarti motilitas. Untuk mengevaluasi motilitas, media ini secara strategis bersifat semi padat, karena karakteristik ini penting untuk dapat mengamati ada atau tidaknya pergerakan bakteri. Bakteri yang memiliki flagela adalah yang memberikan hasil tes positif.

Tes positif akan terbukti ketika kekeruhan diamati, baik di inokulum awal, dan sekitarnya. Sedangkan bakteri nonmotile hanya berkembang di jalur inokulum awal.

Persiapan

SIM sedang

Timbang 30 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Campuran didiamkan selama 5 menit dan kemudian dipanaskan sampai mendidih sambil diaduk sampai benar-benar larut.

Distribusikan campuran dalam tabung reaksi dengan tutup kapas dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Lepaskan rak tabung dari autoclave dan biarkan mengeras dalam posisi vertikal, sehingga medianya berbentuk balok.

Untuk pelestariannya disimpan di lemari es sampai digunakan. Media yang disiapkan harus memiliki pH akhir 7,3 ± 0,2.

Pada saat inokulasi media harus pada suhu kamar. Warna tengahnya krem.

Reagen Kovac

Takar 150 ml amil atau isoamyl atau butyl alkohol. (Gunakan salah satu dari tiga yang disebutkan).

Larutkan 10 g p-dimethylaminobenzaldehyde. Kemudian secara perlahan tambahkan 50 ml asam klorida pekat.

Reagen yang siap pakai tidak berwarna atau kuning muda. Ini harus disimpan dalam botol amber dan disimpan di lemari es. Jangan gunakan jika berubah menjadi coklat tua; yang menandakan bahwa itu rusak. Reagen ini lebih disukai untuk Enterobacteriaceae.

Reagen Erlich

Timbang 2 g p-dimethylaminobenzaldehyde dan larutkan dalam 190 ml etil alkohol absolut dan campur perlahan dengan 40 ml asam klorida pekat. Simpan dengan cara yang sama dengan reagen Kovac. Reagen Ehrlich paling banyak digunakan untuk bakteri non-fermentasi dan anaerobik.

Aplikasi

Media SIM banyak digunakan di laboratorium bakteriologi. Keunggulannya adalah tiga karakteristik esensial dapat diamati dalam tabung yang sama dalam identifikasi Enterobacteriaceae.

Ditabur

Cara yang benar untuk menabur media ini adalah dengan menggunakan jarum suntik, yang akan diambil sebagian dari koloni murni yang akan dipelajari dan dimasukkan secara vertikal ke tengah media. Sebuah lunge harus dilakukan. Tusukan tidak boleh mencapai bagian bawah tabung, hal yang benar adalah menutupi hanya dua pertiga kedalamannya.

Pengulangan inokulum tidak dianjurkan, karena dapat menyebabkan interpretasi yang salah tentang motilitas positif. Media yang diinokulasi diinkubasi secara aerob pada suhu 37 ° C selama 24 jam.

Setelah waktu selesai, diamati ada tidaknya produksi H ₂ S dan motilitasnya terbaca. Akhirnya indol terungkap, tambahkan 3 hingga 4 tetes reagen Ehrlich atau Kovac, campur perlahan dan tafsirkan.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

Sebagai kontrol sterilitas, satu atau dua tabung diinkubasi tanpa inokulasi dalam oven bersuhu 37 ° C selama 24 jam. Diharapkan setelah waktu ini tidak ada pertumbuhan atau perubahan warna.

Sebagai kontrol kualitas, strain bersertifikat yang dikenal dapat digunakan, seperti: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Hasil yang diharapkan adalah: Escherichia coli H ₂ S negatif, indol dan motilitas positif, Enterobacter aerogenes hanya motilitas positif, Salmonella typhimurium H ₂ S dan motilitas positif, dengan indol negatif. Proteus vulgaris semuanya positif, sedangkan Klebsiella pneumoniae dan Shigella semuanya negatif.

Batasan

-Beberapa strain Morganella morganii, di antara strain lain, dapat menghasilkan pigmen kecoklatan pada media ini karena produksi melanin, hal ini tidak boleh disamakan dengan endapan ferrous sulfide. Pada profesional yang tidak berpengalaman, situasi ini dapat menghasilkan positif palsu dalam interpretasi uji H ₂ S.

-Bakteri aerob yang ketat hanya akan tumbuh di permukaan tabung, sehingga sulit untuk menginterpretasikan motilitasnya.

Referensi

1. Laboratorium BD. BBL SIM Sedang. 2008. Tersedia di: bd.com
2. Laboratorium Neogen. Media SIM. Tersedia di: foodafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Media SIM. 2009. Tersedia di: http://f-soria.es
4. Laboratorium Brizuela-Lab. SIM sedang. Tersedia di: .brizuela-lab.com
5. Laboratorium Britannia. SIM sedang. 2015. Tersedia di: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.