KALDU THIOGLYCOLLATE: ALASAN, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The kaldu thioglycollate adalah media diperkaya konsistensi cairan. Ia dikenal dengan singkatan FTM karena akronimnya dalam Bahasa Inggris Fluid Thioglycollate Medium. Itu dibuat oleh Brewer dan dimodifikasi pada tahun 1944 oleh Vera, yang menambahkan pepton kasein ke dalamnya.

Media ini memiliki potensi oksidasi-reduksi yang rendah, oleh karena itu tidak disarankan untuk pengembangan bakteri aerobik ketat, tetapi sangat ideal untuk memulihkan bakteri aerobik fakultatif, anaerobik ketat, dan mikroaerofilik ringan.

Kaldu tioglikolat tanpa indikator. Menunjukkan keputihan. Sumber: Bobjgalindo

Kinerja tinggi yang diamati dengan media ini dalam isolasi dan pemulihan berbagai macam mikroorganisme, telah membuatnya diterima oleh United States Pharmacopeia (USP), oleh Official Association of Agricultural Chemists (AOAC) dan oleh European Pharmacopoeia ( EP).

Organisasi-organisasi ini merekomendasikannya untuk pengujian kontrol sterilitas produk farmasi dan untuk pengayaan berbagai jenis sampel.

Tioglikolat kado terdiri dari ekstrak ragi, pencernaan kasein pankreas, dekstrosa anhidrat, L-sistin, natrium klorida, natrium tioglikolat, resazurin dan agar dalam jumlah kecil.

Ada beberapa versi dari media ini, di antaranya: kaldu thioglycollate dengan indikator, kaldu thioglycollate tanpa indikator, kaldu thioglycollate dengan indikator yang diperkaya dengan hemin dan vitamin K _1, dan kaldu thioglycollate dengan kalsium karbonat.

Khususnya, varian kaldu tioglikolat yang diperkaya dengan hemin dan vitamin K berfungsi untuk meningkatkan pertumbuhan anaerob yang rewel, dan varian kaldu tioglikolat yang mengandung kalsium karbonat berguna untuk melawan asam yang dihasilkan selama pertumbuhan mikroba.

Dasar

Kaldu tioglikolat dianggap sebagai media pengayaan non-selektif karena memungkinkan pertumbuhan sebagian besar bakteri non-rewel. Kebutuhan nutrisi disediakan oleh ekstrak ragi, pencernaan pankreas dan glukosa.

Sebaliknya, media ini, meskipun merupakan kaldu, mengandung sedikit agar; Ini berarti bahwa ia memiliki potensi oksidasi-reduksi yang rendah, karena ia memperlambat masuknya oksigen, sedemikian rupa sehingga oksigen berkurang saat ia masuk lebih dalam ke dalam tabung.

Itulah sebabnya media ini ideal untuk pengembangan bakteri aerobik fakultatif, mikroaerofilik, dan anaerobik ketat, 2 bakteri terakhir tanpa perlu diinkubasi dalam kondisi ini. Media yang sama mengatur jumlah oksigen di dalam medium, tidak ada di dasar tabung dan dalam jumlah yang cukup di permukaan.

Demikian juga, tioglikolat dan L-sistin bertindak sebagai agen pereduksi, berkontribusi pada pencegahan akumulasi zat yang berbahaya bagi perkembangan bakteri, seperti peroksida. Selain itu, senyawa ini mengandung gugus sulfhidril (-SH-), menetralkan efek penghambatan turunan merkuri, arsenik, di antara logam berat lainnya.

Resazurin merupakan indikator reduksi oksida. Zat ini tidak berwarna saat tereduksi dan berwarna merah muda saat teroksidasi. Ada varian kaldu thioglycollate indikator dan non-indikator. Penggunaannya akan tergantung pada jenis sampel dan preferensi laboratorium.

Sementara itu, natrium klorida menjaga keseimbangan osmotik kaldu tioglikolat dan penggunaan glukosa dalam bentuk anhidrat mencegah kelembapan berlebih dalam media dehidrasi.

Persiapan

Kaldu Thioglycollate dengan Indikator

Timbang 29,75 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran didiamkan selama kurang lebih 5 menit. Bawa ke sumber panas dan aduk terus sampai larut sepenuhnya.

Tuang media ke dalam tabung reaksi dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Biarkan dingin sebelum digunakan. Periksa sisipan rumah komersial untuk pelestariannya. Beberapa merekomendasikan penyimpanan pada suhu kamar di tempat gelap, dan lainnya di lemari es terlindung dari cahaya.

PH media yang disiapkan adalah 7,1 ± 0,2.

Warna media dehidrasi adalah krem ​​muda dan media yang disiapkan berwarna kuning muda dengan sedikit opalescence.

Kaldu thioglycollate dengan indikator diperkaya dengan hemin dan vitamin K.

Terdapat media komersial yang sudah mengandung hemin dan vitamin K ₁ , khususnya untuk budidaya anaerob.

Jika Anda tidak memiliki media yang diperkaya untuk anaerob, Anda dapat menyiapkan kaldu dasar thioglycollate. Untuk ini, 10 mg hemin hidroklorida dan 1 mg vitamin K _{1 ditambahkan} untuk setiap liter media. Namun, jika darah atau serum ditambahkan ke dalam kaldu tioglikolat, penambahan hemin atau vitamin K tidak diperlukan.

Kaldu tioglikolat dengan kalsium karbonat

Itu datang secara komersial dan disiapkan dengan mengikuti instruksi pada sisipan.

Kaldu tioglikolat tanpa indikator

Ini memiliki komposisi dasar tioglikolat yang sama, tetapi tidak mengandung resazurin.

Timbang 30 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Sisa sediaannya sama seperti yang dijelaskan dalam kaldu tioglikolat dengan indikator.

Menggunakan

Kaldu tioglikolat berguna untuk memperkaya sampel klinis, terutama yang berasal dari tempat yang steril. Ini juga berguna untuk sampel non-klinis, seperti kosmetik, obat-obatan, dll.

Untuk inokulasi sampel cairan (seperti cairan serebrospinal, cairan sinovial, dan lain-lain), sampel disentrifugasi terlebih dahulu lalu diambil 2 tetes sedimen dan dimasukkan ke dalam kaldu tioglikolat. Inkubasi pada suhu 35 ° C selama 24 jam. Jika tidak ada pertumbuhan (kekeruhan) selama ini, maka diinkubasi hingga 7 hari.

Jika sampel diambil dengan swab, media kultur diinokulasi terlebih dahulu di piring dan terakhir swab dimasukkan ke dalam kaldu, bagian yang menonjol dibelah dan tabung ditutup, meninggalkan swab di dalamnya. Inkubasi pada suhu 35 ° C selama 24 jam, maksimum 7 hari.

Untuk sampel padat, homogenkan dalam larutan garam fisiologis (SSF) dan kemudian inokulasi kaldu tioglikolat dengan 2 tetes suspensi.

Kadang-kadang dapat digunakan sebagai media transportasi untuk sampel di mana diduga anaerob ketat atau sebagai kaldu pengayaan cadangan.

Varian kaldu thioglycollate dengan kalsium karbonat digunakan untuk pemeliharaan strain kontrol lebih lama, karena memiliki kemampuan menetralkan asam yang dihasilkan oleh penggunaan glukosa; Asam ini beracun bagi bakteri tertentu.

Pertumbuhan kaldu tioglikolat akan diamati dari kekeruhan medianya. Dianjurkan untuk melakukan pewarnaan Gram dan selanjutnya dilakukan subkultur pada media non-selektif dan selektif, tergantung pada jenis sampel dan mikroorganisme yang dicurigai.

QA

Untuk kontrol sterilitas, dianjurkan untuk menetaskan satu atau dua kaldu tanpa inokulasi. Hasil yang diharapkan adalah kuah yang bening, tidak ada perubahan warna, meskipun wajar jika terlihat sedikit warna merah jambu di permukaan tabung.

Untuk kontrol kualitas, antara 10 - 100 CFU strain kontrol bersertifikat harus diinokulasi, seperti Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporogenes Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubasi pada suhu 30-35 ° C secara aerobiosis selama 24 jam hingga maksimal 3 hari, karena mikroorganisme ini berkembang pesat.

Perkembangan yang baik diharapkan dalam semua kasus, kecuali untuk Micrococcus luteus dan Bacillus subtilis, di mana mungkin ada perkembangan moderat.

Untuk pengendalian kualitas kaldu thioglycollate yang diperkaya hemin dan vitamin K ₁ dapat digunakan strain kontrol Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 dan Bacteroides fragilis ATCC 25285. Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan.

rekomendasi

- Kadang-kadang dapat diamati bahwa permukaan kaldu thioglycollate dengan indikator berubah menjadi merah muda; Ini karena oksidasi medium. Jika warna merah muda menutupi 30% atau lebih dari total kaldu, dapat dipanaskan dalam penangas air selama 5 menit, didinginkan kembali dan digunakan.

Ini akan menghilangkan oksigen yang terserap, mengembalikan medium ke warna aslinya. Prosedur ini hanya bisa dilakukan satu kali.

-Untuk meningkatkan pertumbuhan bakteri aerob, inkubasi dengan tutup yang agak longgar. Namun, lebih disukai untuk menggunakan kaldu infus jantung otak atau kaldu kedelai trypticase untuk tujuan ini untuk pengembangan aerob ketat yang tepat.

-Media atau terlalu panas harus dihindari, karena kedua kondisi merusak media.

-Cahaya langsung merusak media kultur, itu harus disimpan terlindung dari cahaya.

Referensi

1. Laboratorium Britannia. USP tioglikolat dengan indikator. 2015. Tersedia di: labBritania.com.
2. Laboratorium Chios Sas. 2019. Kaldu tioglikolat. Tersedia di: quios.com.co
3. Laboratorium BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Tersedia di: bd.com/Europe
4. Media BBL disiapkan dalam tabung untuk budidaya mikroorganisme anaerobik. Media tioglikolat. 2013. Tersedia di: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.