KALDU TETRATHIONATE: ALASAN, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The Tetrathionate kaldu atau kaldu TT merupakan media kultur cair selektif untuk pengayaan dan pemulihan dari strain genus Salmonella. Itu dibuat oleh Müeller dan kemudian dimodifikasi oleh Kauffmann, itulah sebabnya ada yang menyebutnya kaldu Müeller-Kauffmann.

Media aslinya mengandung pepton proteosa, kalsium karbonat, dan natrium tiosulfat. Kauffmann menambahkan garam empedu ke dalamnya dan menciptakan modalitas lain dengan warna hijau cerah. Zat tersebut menghambat pertumbuhan koliform, meninggalkan medium bebas untuk perkembangan bakteri patogen, dalam hal ini Salmonella.

Menambahkan larutan yodium yodium ke kaldu tetrationat. Sumber: Manuel Almagro Rivas

Modifikasi tersebut sangat berhasil karena meningkatkan sensitivitas media secara signifikan. Untuk alasan ini, saat ini berguna untuk pencarian Salmonellas dalam semua jenis sampel, tetapi terutama untuk kotoran dan makanan padat atau cair.

Persiapannya terdiri dari dua tahap; Media komersial adalah basa untuk membuat kaldu tetrationat, dan selanjutnya, agar tetrationat dapat terbentuk, larutan iodinasi iodinasi ditambahkan untuk melengkapi media.

American Public Health Association (APHA) merekomendasikan penggunaan Tetrathionate Broth yang dilengkapi dengan warna hijau cerah untuk pengayaan sampel Salmonella, karena lebih selektif daripada Tetrathionate Broth dan Selenite Broth.

Secara umum, kaldu tetrationat sangat ideal ketika keberadaan bakteri dari genus Salmonella dicurigai dalam jumlah kecil atau ketika disalahgunakan oleh paparan zat penghambat atau proses industri yang meminimalkan kelangsungan hidupnya.

Dasar

Pepton hadir sesuai dengan pencernaan kasein pankreas dan pencernaan peptik jaringan hewan. Ini menyediakan sumber karbon, nitrogen, dan nutrisi umum untuk pertumbuhan bakteri.

Untuk bagiannya, natrium tiosulfat bereaksi dengan larutan iodinasi membentuk tetrationat. Ini menghambat pertumbuhan coliform dan mendukung perkembangan bakteri yang mengandung enzim tetrathionate reductase, di antaranya adalah genus Salmonella, tetapi juga Proteus.

Garam empedu juga bertindak sebagai zat penghambat sebagian besar bakteri Gram positif dan beberapa bakteri Gram negatif (coliform).

Kalsium karbonat menyerap zat beracun yang dihasilkan oleh dekomposisi tetrationat, yang membentuk asam sulfat. Dalam pengertian ini, kalsium karbonat menetralkan keasaman, menjaga pH medium tetap stabil.

Dalam kasus modalitas hijau terang, zat ini meningkatkan daya selektif kaldu tetrationat dengan menghambat mikroorganisme selain genus Salmonella.

Persiapan

Kaldu -Tetrathionate

Larutan yodium yodium

Menimbang:

• 6 gram yodium.
• 5 g kalium iodida.

Kalium iodida dilarutkan dalam kurang lebih 5 ml air suling steril, kemudian ditambahkan iodium sedikit demi sedikit sambil memanaskan campuran. Setelah benar-benar larut, perbaiki dengan air suling steril hingga mencapai volume akhir 20 ml.

Media dasar untuk kaldu tetrationat

Timbang 46 gram media dehidrasi dan masukkan ke dalam 1 liter air suling steril. Campur dan panaskan sampai benar-benar larut, hanya bisa mendidih selama beberapa menit. Jangan autoclave. Basa media dibiarkan dingin sampai kira-kira 45 ° C dan pada saat itu ditambahkan 20 ml larutan beryodium.

Setelah menambahkan larutan beryodium ke media itu harus segera digunakan. Jika Anda tidak ingin menggunakan seluruh campuran, lakukan sebagai berikut:

10 ml media dasar didistribusikan ke dalam tabung, dan hanya yang akan diinokulasi dengan sampel ditambahkan 0,2 ml larutan iodinasi.

Yang tidak akan digunakan masih bisa disimpan di lemari es, namun karena medianya belum disterilkan, idealnya menyiapkan jumlah yang dibutuhkan.

Warna media sebelum ditambahkan larutan iodinasi iodium berwarna putih susu dengan endapan putih dan setelah ditambahkan berwarna coklat dengan endapan padat. Endapan yang diamati adalah normal dan sesuai dengan kalsium karbonat yang tidak larut. PH akhir media adalah 8,4 ± 0,2.

Varian kaldu -Tetrathionate dengan hijau cerah

Untuk menyiapkan kaldu tetrationat hijau cerah, semua langkah yang dijelaskan di atas dilakukan, tetapi sebagai tambahan, 10 ml larutan hijau terang yang dibuat pada 0,1% akan ditambahkan ke dalam campuran.

Hijau bersinar

Solusi ini disiapkan sebagai berikut:

Timbang 0,1 g hijau cerah dan masukkan ke dalam 100 ml air suling. Panaskan hingga mendidih untuk mencapai pelarutan total. Simpan dalam botol amber.

Menggunakan

Untuk sampel tinja (kultur tinja) protokolnya adalah sebagai berikut:

Masukkan 1 g feses padat atau 1 ml feses cair ke dalam tabung dengan 10 ml kaldu tetrationat siap pakai. Kocok kuat-kuat dan inkubasi secara aerob pada suhu 43 ° C selama 6-24 jam.

Selanjutnya, ambil 10 sampai 20 µl alikuot kaldu dan subkultur dalam media selektif untuk Salmonella, seperti agar SS, agar XLD, agar hijau cerah, agar enterik Hektoen, dan lain-lain.

Secara paralel, media selektif untuk Salmonella harus diinokulasi dengan sampel langsung (feses) tanpa pengayaan. Untuk spesimen usap rektal, buang bahan yang terkumpul ke dalam tabung dan lanjutkan seperti dijelaskan di atas.

Untuk sampel makanan, timbang 10 g makanan padat atau 10 ml makanan cair dan inokulasi satu botol dengan 100 ml kaldu tetrathionat siap pakai. Lanjutkan dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan di atas tetapi diinkubasi pada suhu 37 ° C.

Seperti yang bisa dilihat, hubungan antara sampel dan kaldu akan selalu 1:10.

QA

Strain kontrol yang diketahui dapat digunakan untuk menguji media kultur. Yang paling banyak digunakan adalah strain bersertifikat ATCC.

Strain yang akan digunakan adalah Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Pertumbuhan yang sangat baik diharapkan untuk strain Salmonella, sedangkan Escherichia coli mungkin memiliki pertumbuhan yang lemah atau teratur, dan strain Gram positif (Enterococcus dan Staphylococcus) dihambat sebagian atau seluruhnya.

rekomendasi

-Karena media ini tidak menghambat pertumbuhan Proteus, beberapa laboratorium menggunakan 40 mg / L novobiocin untuk mencegah perkembangan strain mikroba ini. Antibiotik harus ditambahkan sebelum larutan yodium.

-Setelah menyiapkan media termasuk larutan iodium yodium, tidak boleh lebih dari 2 jam untuk diinokulasi.

-Ketika mendistribusikan media dalam tabung, campuran harus terus dihomogenisasi untuk menahan endapan yang terbentuk.

-Dalam sampel yang kurang terkontaminasi, kaldu tetrationat diinkubasi pada suhu 35-37 ° C, dan pada sampel yang sangat terkontaminasi, inkubasi pada suhu 43 ° C direkomendasikan.

Referensi

1. Laboratorium Conda Pronadisa. 2010. Basis kaldu tetrathionate menurut Müeller-Kauffmann. Tersedia di:
2. Laboratorium BD. 2003. Basis Kaldu Tetrathionate. Tersedia di:
3. Laboratorium Britannia. 2015. Kaldu dasar tetranate. Tersedia di:
4. BBL Media. 2005. Disiapkan dalam tabung untuk kultur spesies Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J.Perbandingan antara media kultur natrium selenit dan natrium tetrathionat, keduanya diinkubasi pada suhu 37 ° C dan 42 ° C untuk isolasi Salmonella spp dari feses pembawa. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220