KALDU KEDELAI TRIPTIKASEIN: ALAS BEDAK, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The kaldu kedelai tryptone merupakan media kultur cair, bergizi, nonselektif. Karena keserbagunaannya yang tinggi, ini adalah salah satu media kultur cair yang paling banyak digunakan di laboratorium mikrobiologi.

Ia juga dikenal dengan nama kaldu kedelai tryptic atau kasein-kedelai yang dicerna, yang singkatannya adalah TSB untuk akronimnya dalam Bahasa Inggris Tryptic Soy Broth atau CST untuk akronimnya dalam bahasa Spanyol. Penggunaannya sangat bervariasi karena komposisinya. Ini terdiri dari triptein, pepton kedelai, natrium klorida, kalium fosfat, dan glukosa.

Kaldu kedelai triptikasein diunggulkan dengan strain Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 di mana produksi pigmen diamati. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.

Ia mampu mereproduksi bakteri patogen yang penting secara klinis, termasuk bakteri yang membutuhkan nutrisi dan bakteri anaerob. Beberapa jamur oportunistik dan pencemar juga dapat berkembang di lingkungan ini.

Karena daya nutrisinya yang tinggi, ia memiliki kepekaan yang tinggi untuk mendeteksi kontaminasi mikroba, oleh karena itu ia dipilih oleh Layanan Inspeksi Kesehatan Hewan dan Tanaman USDA untuk analisis mikrobiologi vaksin.

Demikian juga, kaldu kedelai trypticasein memenuhi persyaratan farmakope yang berbeda (EP Eropa, JP Jepang dan USP Amerika Utara) untuk studi mikrobiologi produk di tingkat industri, seperti kosmetik dan makanan.

Di sisi lain, perlu disebutkan bahwa meskipun kegunaannya bagus, media ini relatif murah, sehingga terjangkau untuk sebagian besar laboratorium mikrobiologi. Ini juga sangat mudah disiapkan.

Dasar

Triptein, pepton, dan glukosa memberikan nutrisi penting untuk menjadikannya media yang ideal untuk pertumbuhan mikroba yang cepat.

Dalam waktu kurang lebih 6 hingga 8 jam inkubasi, pertumbuhan sudah dapat dilihat di sebagian besar mikroorganisme. Namun, ada galur yang tumbuh lambat yang membutuhkan waktu berhari-hari untuk tumbuh.

Natrium klorida dan kalium fosfat masing-masing bertindak sebagai keseimbangan osmotik dan pengatur pH. Adanya pertumbuhan dibuktikan dengan munculnya kekeruhan dalam medium; jika tidak ada pertumbuhan, medium tetap tembus cahaya.

Karena warnanya yang terang, dimungkinkan untuk mengamati produksi pigmen, seperti yang ditunjukkan pada gambar di awal artikel, yang sesuai dengan pigmen yang diproduksi oleh Pseudomonas aeruginosa.

Persiapan

-Kuah kedelai triptysein

Untuk menyiapkan kaldu kedelai tryptic, 30 g media komersial dehidrasi harus ditimbang dalam skala digital. Kemudian dilarutkan dalam satu liter air suling yang terdapat dalam termos.

Campuran didiamkan selama 5 menit dan kemudian dibawa ke sumber panas untuk membantu melarutkan medium. Ini harus sering diaduk sambil mendidih selama 1 menit.

Setelah dilarutkan, itu didistribusikan ke dalam tabung dengan ukuran yang sesuai sesuai kebutuhan. Tabung dengan sumbat kapas atau dengan tutup Bakelite dapat digunakan. Selanjutnya, tabung disterilkan dengan medium di dalam autoclave dengan suhu 121 ° C selama 15 menit.

PH media harus tetap pada 7,3 ± 0,2

Perlu dicatat bahwa warna media kultur dehidrasi adalah krem ​​muda dan harus disimpan antara 10 hingga 35 ° C, di tempat yang kering. Sedangkan kaldu yang disiapkan berwarna kuning muda dan harus disimpan di lemari es (2 hingga 8 ° C).

-Varian dari kaldu kedelai trypticasein

Kaldu kedelai trypticasein yang dimodifikasi dapat dibuat dengan menambahkan garam empedu dan novobiocin untuk membuatnya selektif untuk isolasi E. coli. Pilihan lain untuk tujuan yang sama adalah menyiapkan kaldu kedelai trypticase yang dilengkapi dengan vankomisin, sefiksim dan telurit (2,5 µg / ml).

Di sisi lain, lebih banyak glukosa (0,25%) dapat ditambahkan ke kaldu kedelai tryptic jika tujuannya adalah untuk merangsang pembentukan biofilm.

Menggunakan

Ini cukup bergizi untuk memungkinkan pertumbuhan bakteri rewel atau rewel seperti Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp dan Brucella sp, tanpa perlu ditambah dengan darah atau serum.

Selain itu, beberapa jamur dapat berkembang dalam kaldu ini, seperti Candida albicans Complex, Aspergillus sp, dan Histoplasma capsulatum.

Selain itu, media dalam kondisi anaerobik ini ideal untuk memulihkan bakteri yang termasuk dalam genus Clostridium, serta bakteri anaerob non-sporulasi yang penting secara klinis.

Jika 6,5% natrium klorida ditambahkan, dapat digunakan untuk pertumbuhan Enterococcus dan Streptococcus Grup D lainnya.

Di tingkat penelitian sudah sangat bermanfaat dalam berbagai protokol, terutama dalam studi biofilm atau bakteri pembentuk biofilm. Ini juga digunakan untuk menyiapkan suspensi bakteri Mac Farland 0,5% yang diperlukan untuk melakukan antibiotikogram dengan metode Kirby dan Bauer.

Dalam kasus ini, 3 sampai 5 koloni dengan penampilan serupa diambil dan diemulsi dalam 4-5 ml kaldu kedelai triptikasein. Kemudian diinkubasi selama 2 sampai 6 jam pada suhu 35-37 ° C dan selanjutnya disesuaikan dengan konsentrasi yang diinginkan menggunakan larutan garam steril. Kaldu kedelai triptikasein tidak boleh digunakan selama 18 hingga 24 jam inkubasi.

Ditabur

Sampel dapat disemai secara langsung atau koloni murni yang diambil dari media selektif dapat disubkultur. Inokulum harus kecil agar tidak mengaburkan media sebelum diinkubasi.

Biasanya diinkubasi pada 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam, tetapi kondisi ini dapat bervariasi tergantung pada mikroorganisme yang dicari. Itu juga dapat diinkubasi dalam kondisi anaerobik pada 37 ° C selama beberapa hari jika perlu. Misalnya, mikroorganisme yang tumbuh cepat atau rewel dapat diinkubasi hingga 7 hari.

Dalam analisis mikrobiologi bahan farmasi - seperti vaksin - protokolnya lebih ketat. Dalam kasus ini, kaldu tanpa pertumbuhan tidak dibuang sampai mencapai 14 hari inkubasi berkelanjutan.

QA

Dari setiap batch yang disiapkan, 1 atau 2 tabung yang tidak diinokulasi harus diinkubasi untuk menunjukkan sterilitasnya. Itu harus tetap tidak berubah.

Strain yang diketahui juga dapat ditanam untuk menilai perilakunya. Di antara strain yang dapat digunakan adalah:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 atau 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, Pneumoniae ATCC28CC305.

Dalam semua kasus, pertumbuhan harus memuaskan di bawah atmosfer dan kondisi suhu yang sesuai untuk setiap mikroorganisme.

Batasan

- Fermentasi glukosa menyebabkan penurunan pH media karena produksi asam. Hal ini dapat merugikan kelangsungan hidup beberapa mikroorganisme yang sensitif terhadap keasaman.

-Tidak disarankan untuk pemeliharaan strain, karena selain keasaman, bakteri akan menghabiskan nutrisi setelah beberapa hari dengan akibat akumulasi zat beracun yang membuat lingkungan tidak ramah.

-Anda harus bekerja menjaga semua protokol kemandulan, karena kaldu mudah terkontaminasi.

-Setelah menyiapkan kaldu kedelai trypticasein, sebaiknya jangan mencoba memindahkan kaldu ke tabung steril lain, karena jenis manuver ini sangat rentan terhadap kontaminasi.

Referensi

1. Cona E. Kondisi untuk studi kerentanan yang baik dengan uji difusi agar. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Tersedia di: scielo.org
2. Laboratorium Britannia. Kaldu kedelai triptein. 2015. Tersedia di: britanialab.com
3. Laboratorium MCD. Kaldu Kedelai Trypticasein. Tersedia di: electronic-systems.com
4. Laboratorium Neogen. Kaldu Kedelai Triptych. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L.Evaluasi teknik pemisahan imun magnetik untuk pemulihan Escherichia coli O157: H7 dalam krim susu. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Tersedia di: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M.Biofilm formasi pada isolat Staphylococcus aureus sesuai dengan kerentanan antimikroba dan asal klinis. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Tersedia di: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolasi Escherichia coli O157: H7 dalam Sampel Kotoran Sapi Tujuan Ganda dari Kota Miranda, Negara Bagian Zulia, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Tersedia di: scielo.org