The kaldu malonat adalah medium cairan biakan yang digunakan untuk tes diagnostik (malonat), digunakan untuk membedakan beberapa genera dari keluarga Enterobacteriaceae. Itu dibuat oleh Leifson pada tahun 1933 dan kemudian dimodifikasi oleh Ewing, yang menambahkan sedikit dekstrosa dan ekstrak ragi ke formula aslinya.
Media saat ini terdiri dari ekstrak ragi, amonium sulfat, kalium fosfat, monopotasium fosfat, natrium klorida, natrium malonat, dekstrosa, dan bromotimol biru. Tes ini umumnya termasuk dalam baterai identifikasi biokimia untuk Enterobacteriaceae, membantu membedakan genera dan spesies tertentu.
Representasi grafis dari tes malonate. A. Uji Negatif, B. (Pengasaman) Uji Negatif, C. (Alkalisasi Sedang) Uji Positif. Sumber: Tabung warna publicdomainpictures.net
Uji malonat terutama didasarkan pada kemampuan beberapa mikroorganisme untuk menggunakan natrium malonat sebagai satu-satunya sumber karbon dan amonium sulfat sebagai sumber nitrogennya.
Uji malonat biasanya positif pada beberapa spesies dari genera Enterobacter, Klebsiella, dan Citrobacter. Sedangkan sebagian besar spesies dari marga Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus dan Providencia, memberikan reaksi negatif.
Dasar
Tes malonat terdiri dari menunjukkan bakteri yang mampu menggunakan natrium malonat sebagai sumber karbon tunggal dan amonium sulfat sebagai sumber nitrogen.
Sebagian besar Enterobacteriaceae yang tidak menggunakan malonat dapat tumbuh di media ini dengan mengambil dekstrosa dan ekstrak ragi sebagai nutrisi.
Dalam hal ini, setiap upaya untuk menjadi basa dengan menggunakan pepton akan ditangkal oleh produksi asam yang dihasilkan oleh fermentasi dekstrosa. Demikian juga, kalium dan monopotasium fosfat bertindak sebagai penyangga, menjaga pH pada 6,7.
Itu sebabnya, saat tes negatif, warna kaldu tetap sama aslinya (hijau). Kadang-kadang medium bisa menjadi asam karena fermentasi dekstrosa; tanpa menggunakan pepton dan indikator pH, warna media akan berubah menjadi kuning. Agar hal ini terjadi, pH harus turun menjadi 6.
Akan tetapi, ketika tes ini positif, dikatakan bahwa mikroorganisme tersebut masing-masing menggunakan malonat dan amonium sulfat sebagai sumber karbon dan nitrogen, tanpa menggunakan komponen lainnya.
Dalam hal ini, medium menjadi basa karena pelepasan natrium dan akibatnya pembentukan NaOH. Dalam pengertian ini, indikator pH (bromothymol blue) mengubah warna media dari hijau menjadi biru ketika pH sama dengan atau lebih besar dari 7,6. Biru bisa menjadi terang atau intens (biru Prusia).
Akhirnya, natrium klorida mempertahankan osmolaritas media dan air adalah pengencer semua komponen.
Penafsiran
Kaldu Warna Sama (Hijau) - Tes Negatif
Kaldu kuning: tes negatif
Kaldu biru muda atau biru tua: hasil tes positif
Ada varian yang disebut kaldu fenilalanin malonat, juga disebut medium Shaw dan Clarke. Dalam hal ini, dua tes dapat dianalisis, penggunaan malonat sebagai sumber karbon dan produksi asam piruvat dari fenilalanin.
Persiapan
Kaldu malonate
Jumlah gram yang ditentukan oleh sisipan perusahaan komersial yang dipilih ditimbang (dapat bervariasi satu sama lain). Gram yang ditimbang tersuspensi dalam satu liter air suling. Panaskan sedikit sampai larut seluruhnya. Bagikan 3 ml media ke dalam 13/100 tabung reaksi dengan tutup kapas.
Sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 hingga 20 menit.
Dinginkan sebelum digunakan. Jika tidak akan segera digunakan, simpan di lemari es sampai digunakan. Bawa kaldu ke suhu kamar sebelum diinokulasi.
PH media harus 6,7 ± 0,2. Warna media yang disiapkan adalah hijau botol.
Kaldu Fenilalanin Malonat
Timbang 11 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Sisa persiapannya sama seperti yang dijelaskan sebelumnya.
Dapat juga dibuat dengan menambahkan 2 g / L fenilalanin ke dalam media kaldu malonat sebelum disterilkan.
Menggunakan
Ini digunakan sebagai bagian dari baterai tes biokimia yang dikumpulkan untuk identifikasi bakteri dari keluarga Enterobacteriaceae.
Membantu membedakan antara:
-Genus Klebsiella dan Enterobacter (+) dari genus Escherichia dan Serratia (-).
-Spesies Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame dan Salmonella enterica ssp diarizonae (+), dari spesies Salmonella enterica ssp enterica (-).
-Dari genus Klebsiella umumnya (+) dari genus Actinobacillus (-).
-Kadang-kadang dapat membantu diferensiasi marga dan spesies bakteri yang tidak termasuk famili Enterobacteriaceae, seperti antara bakteri Gram negatif non-fermentasi Alcaligenes faecalis (+) dan Acinetobacter sp (-).
Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
Proses
Di bawah korek api, sebagian dari cologne murni diambil, menggunakan pegangan platina yang disterilkan dan didinginkan dengan benar. Sampel yang diambil (inokulum ringan) dilarutkan dalam kaldu malonat. Inkubasi dengan penutup lepas dalam aerobiosis pada suhu 35 ° C ± 0,2 selama 24 sampai 48 jam.
Kaldu malonat juga dapat diinokulasi dari kultur 18-24 jam dalam kaldu kedelai trypticase. Dalam hal ini, 0,01 ml diambil dengan pipet steril dan kaldu malonat diinokulasi. Inkubasi dengan penutup lepas dalam aerobiosis pada suhu 35 ° C ± 0,2 selama 24 sampai 48 jam.
Pada akhirnya, hasilnya diinterpretasikan. Setiap jejak warna biru setelah 48 jam inkubasi harus dianggap positif. Tes tidak boleh diartikan sebagai negatif sampai waktu inkubasi 48 jam telah berlalu.
Dalam kasus penggunaan varian kaldu fenilalanin malonat, malonat pertama-tama diinterpretasikan dan kemudian ditambahkan 5 tetes 1N HCl dan 3-5 tetes 8% besi klorida. Warna hijau tua diartikan sebagai tes positif untuk fenilalanin. Sebaliknya, jika medium berubah menjadi biru pucat, tes negatif untuk fenilalanin.
QA
Untuk melakukan kontrol sterilitas media, satu atau dua kaldu harus diinkubasi pada suhu 35 ° C ± 0,2 selama 24 jam inkubasi. Setelah waktu ini seharusnya tidak ada kekeruhan atau perubahan warna.
Untuk kontrol kualitas, strain yang dikenal atau bersertifikat dapat digunakan, seperti: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 dan Escherichia coli ATCC 25922.
Hasil yang diharapkan adalah:
- Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae dan Salmonella enterica ssp arizonae memberikan reaksi positif (warna biru sedang).
- Untuk Escherichia coli hasilnya harus negatif yaitu tidak terjadi perubahan warna (hijau) atau menguning akibat fermentasi glukosa.
Batasan
Jangan gunakan kaldu yang menunjukkan kekeruhan, endapan, perubahan warna atau tanda kerusakan apa pun.
Referensi
- Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, isolasi mikrobiologi Camacho J. Salmonella spp. dan alat molekuler untuk mendeteksinya. Kesehatan Uninorte. Barranquilla (Kol.) 2014; 30 (1): 73-94. Tersedia di: scielo.org.co
- BBL. Malonate Broth, Ewing dimodifikasi. 2007. Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Senna. Kaldu Malonato. Tersedia di: cientificasenna.com
- RenyLab. Kaldu Malonato. 2013. Tersedia di: es.renylab.ind.br
- Diagnostik Mbiolog. Kaldu Malonato. Tersedia di: mbiolog.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Laboratorium Conda Pronadisa. Kaldu fenilalanin malonat. Tersedia di: condalab.com