RUANG NEUBAUER: SEJARAH, KARAKTERISTIK, PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The Neubauer ruang , hematometer atau hemositometer, adalah instrumen laboratorium yang terdiri dari piring kaca tebal khusus. Kamera ini digunakan untuk menghitung beberapa jenis sel seperti sel darah merah, sel darah putih dan trombosit, meskipun dapat digunakan untuk menghitung spora, sperma, parasit, dll.

Ini menyajikan beberapa karakteristik yang sangat aneh, karena terdiri dari 3 zona, satu pusat untuk menghitung dan dua zona pendukung. Setiap ruang memiliki dua zona penghitungan atau garis bidik, satu di atas dan satu lagi di bawah.

Ruang Neubauer. Sumber: SantiBadia. Gambar diedit.

Ini memiliki beberapa divisi dalam bentuk kisi. Area penghitungan adalah kotak sedang yang terdapat di 4 sudut kedua graticule, ditambah kotak tengah.

Perakitan kamera harus dilakukan dengan sangat hati-hati, karena detail apa pun memengaruhi jumlah sel. Ada banyak kesalahan yang bisa dilakukan, tetapi jika salah satu terjadi, kamera harus dibongkar, dibersihkan, dan dipasang kembali. Kesalahan utama meliputi yang berikut:

Melimpahi ruang atau kurang mengisi, membiarkan ruang mengering, mencoba menghilangkan kelebihan cairan dengan kain kasa, membalik ruang saat mengangkutnya, mengisi ruang kotor atau basah, tidak mencampur pengenceran atau sampel dengan baik, antara lain. Semua kesalahan ini akan menghasilkan nilai yang tidak nyata.

Sejarah

Ruang Neubauer adalah instrumen presisi, dan proses pembuatannya menjalani kontrol kualitas yang ketat. Itu dibuat untuk penghitungan partikel yang tepat atau elemen yang terbentuk per mm ³ , seperti sel dalam berbagai cairan. Grafiknya yang halus diukir dengan pensil berlian.

Karakteristik ruang neubauer

Seluruh ruang seukuran slide normal sehingga dapat ditempatkan pada panggung mikroskop.

Ruang terdiri dari tiga permukaan persegi panjang pusat (a, b, c). Pada zona “b” terletak zona R atau zona hitung yang disebut juga retikulum. Satu di setiap sisi kamera, dipisahkan oleh zona "d".

Diagram grafis dari Kamar Neubauer. Sumber: Panduan Praktis Hematologi. Sekolah Bioanalisis dari Universitas Carabobo, Venezuela.

Setiap graticule adalah area yang dipoles yang berisi area penghitungan yang diukir. Ini terdiri dari bujur sangkar dengan luas permukaan 9 mm ² dan secara internal dibagi menjadi 9 bujur sangkar dengan luas permukaan masing-masing 1 mm ² . Empat kotak sudut dibagi menjadi 16 kotak yang lebih kecil ( luasnya 0,0625 mm ² ).

Kisi-kisi ini dibentuk oleh serangkaian garis milimeter yang saling berpotongan, membentuk kisi-kisi dengan grafik sempurna yang dibatasi untuk pengukuran yang telah ditentukan. Garis-garis ini diukir dengan ujung berlian.

Retikulum Neubauer yang ditingkatkan. Sumber: Panduan Praktis Hematologi School of Bioanalysis, University of Carabobo, Venezuela.

Keempat sisi sesuai dengan area penghitungan. Di sisi atau sudut inilah sebagian besar sel (sel darah merah dan leukosit) dihitung, sedangkan trombosit dihitung di area tengah.

Zona tengah memiliki lebih banyak divisi, terdiri dari bujur sangkar berukuran 1 mm ^{2 yang} dibagi menjadi 25 bujur sangkar yang masing-masing memiliki luas permukaan 0,04 mm ² . Ini pada gilirannya dibagi menjadi 16 grid dengan luas 0,0025 mm ² .

Deskripsi retikulum Neubauer yang ditingkatkan. a) Kuadrat sudut, b) kuadrat tengah, c) kuadrat median dari alun-alun. Sumber: Panduan Praktis Hematologi School of Bioanalysis, University of Carabobo, Venezuela.

Zona “a” dan “c” berfungsi sebagai penyangga untuk menempatkan benda penutup khusus yang disebut dengan slide hematometri atau penutup hematimeter.

Ketinggian antara foil dan permukaan hitung adalah 0,1 mm. Pengukuran luas permukaan kotak penghitungan, serta tinggi ruangan dan pengenceran sampel, adalah data yang diperlukan untuk membuat perhitungan akhir.

Aplikasi

Ini digunakan untuk menghitung sel. Ini sangat membantu di area hematologi, karena memungkinkan penghitungan 3 seri sel darah; yaitu sel darah merah, sel darah putih, dan trombosit.

Namun, ini dapat digunakan di area lain, misalnya untuk menghitung sperma, spora, bakteri, atau item penting lainnya tergantung pada jenis sampel.

Cara Penggunaan?

Persiapan sampel

Untuk melakukan penghitungan sel biasanya dimulai dari pengenceran sebelumnya. Contoh: untuk menghitung sel darah putih, siapkan pengenceran 1:20 dengan cairan Turk. Pengenceran dicampur dengan baik sebelum memasukkan pipet dan memasang ruang Neubauer.

Ada kalanya pengenceran 1:20 tidak cukup untuk dihitung. Misalnya pada pasien yang menderita leukemia kronis jenis tertentu. Dalam kasus ini, pengenceran yang lebih tinggi seperti 1: 100 harus dilakukan.

Sebaliknya, jika jumlahnya sangat rendah, seperti pada leukopenia berat, pengenceran yang lebih kecil dapat dilakukan untuk memekatkan sampel. Contoh: Anda bisa membuat pengenceran 1:10.

Perubahan yang dilakukan mempengaruhi perhitungan.

Pemasangan ruang neubauer

Ruang Neubauer dipasang dengan menempatkan slide hematometrik di area tengah. Keduanya harus sangat bersih dan kering. Untuk menempatkan lamella, itu diambil di tepinya dan dengan lembut dijatuhkan ke kamera.

Ini diisi dengan menempatkan ujung pipet atau pipet otomatis Thoma pada sudut 35 ° di tepi zona pemuatan. Cairan dibuang dengan lancar dan area pemuatan diisi oleh kapilaritas. Ini dilakukan dari kedua sisi untuk memuat dua garis bidik.

Retikel tidak boleh kelebihan beban dan juga tidak boleh ditolak cairannya. Bebannya harus tepat. Penting agar pengisian dilakukan secara homogen, yaitu tidak boleh ada gelembung.

Setelah bilik dipasang, dibiarkan diam selama 2 menit agar sel mengendap ke bawah dan visualisasi serta penghitungannya lebih mudah.

Setelah waktu istirahat dipasang di panggung mikroskop cahaya untuk pengamatan. Pertama itu difokuskan dengan tujuan 10X dan jika perlu maka itu menuju ke 40X.

Untuk meningkatkan visualisasinya, jalannya cahaya dari mikroskop dikurangi. Untuk melakukan ini, kondensor diturunkan dan diafragma sedikit tertutup.

Perhitungan

Untuk penghitungan sel darah putih atau leukosit, seluruh permukaan empat kotak sudut median dan kotak tengah dari setiap retikulum harus dihitung.

Penghitungan dimulai di kotak di sudut kiri atas. Anda mulai dari kuadrat pertama pada baris pertama, yaitu dari kiri ke kanan hingga Anda mencapai ujung yang berlawanan.

Di sana Anda turun dan melihat ke belakang dari kanan ke kiri sampai Anda mencapai ujung yang lain, dan seterusnya, sel-sel di dalam setiap kisi dihitung dengan cara zig-zag. 16 grid dari setiap kuadrat median dihitung.

Untuk menghindari penghitungan sel dua kali, ada aturan tentang sel yang terletak di garis batas setiap kisi. Sel di baris kiri dan atas dihitung dan sel di baris kanan dan bawah diabaikan.

Penghitung sel manual harus tersedia sehingga operator menekan tombol perangkat sebanyak sel yang diamati. Dengan penggunaan counter, operator dapat menghitung tanpa harus melihat ke atas dari bidang mikroskopis. Di akhir penghitungan, Anda akan melihat jumlah sel yang dihitung.

Perhitungan

Untuk penghitungan, Anda dapat melanjutkan dengan beberapa cara. Sebuah graticule tunggal dapat dihitung atau keduanya dapat dihitung dan keduanya dirata-ratakan. Dalam dua situasi ini, sel yang dihitung harus dikalikan dengan faktor, yang dalam hal ini akan menjadi 40. Dan dengan demikian diperoleh jumlah total per mm ³ .

Tetapi jika kedua grid tersebut dihitung dan tidak diambil rata-ratanya, maka harus dikalikan dengan faktor yang berbeda, dalam hal ini dengan 20.

Faktor -Multiplikasi

Inilah cara menghitung faktor perkalian.

Berbagai data dipertimbangkan untuk penghitungan, termasuk titer pengenceran, ketinggian ruang dan luas yang dihitung.

Pengenceran

Pengenceran standar yang digunakan adalah 1:20 untuk jumlah leukosit.

Ketinggian ruang

Ketinggian antara bilik dan lembaran sel darah adalah 0,1 mm.

Area yang dihitung

Jika 5 kotak dari luas 1mm ² dihitung , itu berarti total luas penghitungan adalah 5mm ² . Data ini harus dikalikan dengan ketinggian ruangan untuk mendapatkan total volume yang dihitung. Artinya, 5mm ² x 0.1mm = 0.5mm ³ .

Rumus dan perhitungan

Dengan data yang kami miliki dikatakan:

Jika dalam 0,5 mm ³ - ada --- jumlah sel yang dihitung

Dalam 1 mm ³ --- akan ada - X n ° sel

X nomor sel = (jumlah sel dihitung x 1) / 0,5 mm ³

Tetapi pengenceran juga harus diperhitungkan. Oleh karena itu, rumusnya adalah sebagai berikut:

(jumlah sel dihitung x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Akhirnya, untuk meringkas, jumlah sel yang dihitung bisa dikalikan 40. Dengan demikian, diperoleh nilai leukosit per mm ³ .

Jika kedua retikel dihitung, data untuk area yang dihitung berubah, yang dalam hal ini akan menjadi 10 kotak, yaitu 10 mm ² . Dan total volume terhitung 1 mm3. Rumusnya adalah:

(jumlah sel dihitung x 1) x 20/1 mm ³

Oleh karena itu, dalam hal ini faktor perkaliannya adalah 20.

Kesalahan

-Jika saat memuat kamera terlampaui atau terlampaui dengan cairan, ketinggian kamera akan bervariasi. Ini menghasilkan hitungan yang lebih tinggi dari yang sebenarnya. Jika Anda mencoba menghilangkan kelebihannya dengan kain kasa atau kapas, ini adalah kesalahan besar. Tindakan ini akan menyebabkan sel berkonsentrasi, meningkatkan jumlah.

-Jika dimuat dengan buruk, hitungannya akan lebih rendah dari yang asli.

-Jika kamera dipasang dan dibiarkan mengering, tidak mungkin lagi menghitung karena akan memberikan hasil yang salah.

-Jika pengenceran sampel tidak tercampur dengan baik sebelum mengisi ruang, ada risiko kesalahan dalam pembacaan, karena sel tidak akan terdistribusi secara homogen. Oleh karena itu, akan ada konsentrasi sel yang lebih rendah atau lebih tinggi, tergantung pada apakah sampel diambil dari permukaan cairan atau dari dasar tabung.

-Adanya gelembung mengurangi jumlah cairan yang harus masuk ke retikulum, mengganggu visualisasi dan distribusi sel yang benar. Semua ini sangat mempengaruhi hasil.

-Selama menghitung, jangan mendongak dari mikroskop sampai setiap kotak besar selesai untuk menghindari tersesat.

-Salah satu alasan terjadinya kesalahan adalah memiringkan kamera setelah pemasangan. Untuk alasan ini, panggung mikroskop harus dinaikkan dengan hati-hati.

Rekomendasi

Jika karena alasan apa pun Anda mendeteksi kelainan pada pengisian bilik, disarankan agar Anda membongkar sediaan itu, membersihkan bilik dan memasang kembali dari awal.

Berhati-hatilah saat membersihkan kamera agar tidak menggores rambut silang. Di sisi lain, ketahuilah bahwa slide hematometrik bersifat sensitif dan rapuh. Penanganan yang tidak tepat dapat merusaknya.

Sebelum Anda mulai menghitung, pastikan sel terdistribusi dengan baik. Distribusi sel yang tidak merata terjadi karena pencampuran atau pengenceran sampel yang buruk. Jika ini terjadi, perakitan harus diulang.

Salah satu cara untuk mengetahui apakah sel terdistribusi dengan baik adalah dengan membandingkan jumlah setiap kotak besar, jumlah sel yang dihitung untuk setiap kotak tidak boleh terlalu berbeda satu sama lain.

-Jika jumlah sel darah putih di atas 50.000 mm ^3, disarankan untuk mengulang penghitungan, membuat pengenceran lebih besar.

-Jika Anda mengubah pengenceran, Anda harus menghitung ulang faktor perkalian, karena hal ini mempengaruhi rumus.

Referensi

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A.Perbandingan konsentrasi sperma menggunakan ruang Makler dan ruang Neubauer. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Tersedia dalam: scielo.
2. Ruang Neubauer. (2018, 27 Maret). Wikipedia, ensiklopedia gratis. Tanggal konsultasi: 04:10, 23 Juni 2019 dari es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Penerapan metode penghitungan alternatif di Neubauer Chamber untuk menentukan konsentrasi Trichomonas vaginalis. Pdt. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Tersedia di: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Analisis Spermogram. Pdt. Venez. Endokrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Tersedia di: ve.scielo
5. Panduan praktis hematologi dari School of Bioanalysis, University of Carabobo. Venezuela.1998