BIURET: ALASAN, REAGEN, PROSEDUR, PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The biuret adalah reagen yang digunakan untuk penentuan protein rantai panjang dan rantai pendek. Ini terutama digunakan di bidang kimia analitik dan urinalisis untuk menyelidiki konsentrasi protein total dalam serum, plasma dan urin.

Nilai protein dapat ditingkatkan atau diturunkan pada patologi tertentu. Gejala hipoproteinemia biasanya timbul pada penderita penyakit ginjal, pada penderita kurang gizi, dan pada penderita infeksi kronis.

Struktur kimia dari kompleks reaksi Biuret terbentuk dalam uji Biuret Positif. Sumber: Yikrazuul / flickr

Sedangkan hiperproteinemia diamati pada patologi seperti multiple myeloma, lupus eritematosus sistemik, endokarditis bakterial, meningitis bakterial, makroglobulinemia Waldenstrom, antara lain.

Di sisi lain, adanya protein dalam urin disebabkan oleh filtrasi albumin oleh ginjal. Ini adalah perilaku patologis yang harus dipelajari.

Dalam pengertian ini, Biuret sangat berguna, karena memungkinkan mengukur keberadaan protein dalam serum, plasma, urin, di antara banyak sampel lainnya.

Bahkan Biuret dapat digunakan untuk menyelidiki keberadaan dan konsentrasi protein dalam sampel yang dieksplorasi dengan buruk atau sampel dengan komposisi yang tidak diketahui. Oleh karena itu, banyak digunakan di daerah penelitian.

Tes Biuret didasarkan pada pendeteksian ikatan peptida. Pengujian dilakukan dalam media alkali. Sampel harus mengandung setidaknya dua ikatan peptida agar kompleks ungu-ungu terbentuk. Kompleks dibentuk oleh penyatuan ikatan dan ion tembaga.

Dasar

Reagen Biuret terdiri dari kalium hidroksida, kupri sulfat, dan natrium dan kalium tartrat. Natrium hidroksida digunakan untuk membuat media menjadi basa, karena kondisi ini penting untuk terjadinya reaksi.

Zat yang bereaksi dengan protein adalah cupric sulfate, sedangkan sodium tartrate berfungsi tidak memungkinkan terbentuknya tembaga hidroksida yang cenderung mengendap dan mengganggu reaksi.

Jika zat dengan ikatan peptida (polipeptida atau protein) ditemukan dalam sampel, tesnya akan positif.

Reaksi ditafsirkan sebagai positif ketika larutan berubah menjadi ungu. Warna dihasilkan oleh pembentukan kompleks antara setidaknya dua ikatan peptida yang memiliki gugus CO-NH dan kation cupric.

Kompleks violet dapat dibentuk dengan dua cara: satu dengan hilangnya proton dari gugus amida yang mengikat logam (depronotasi), dan yang lainnya dengan penyatuan elektron oksigen dan nitrogen yang bebas dan terikat. dengan tembaga.

Reaksi ini dapat bervariasi dalam intensitas dan warna tergantung pada jenis proteinnya.

Tes dapat dilakukan secara kualitatif atau kuantitatif. Dalam bentuk kualitatif dilaporkan sebagai positif atau negatif. Sedangkan dalam bentuk kuantitatif konsentrasi dapat diukur dengan metode spektrofotometri.

Reaksi terbaca antara 540-560 nm. Intensitas warna berbanding lurus dengan konsentrasi ikatan peptida dalam sampel.

Reagen

-20% natrium hidroksida (NaOH)

-Cupric sulfate pentahydrate 1% (CuSO _4. 5H ₂ O)

-Mixed sodium dan potassium tartrate tetrahydrate (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Stabilitas reagen biuret

-Itu harus disimpan dalam lemari es.

Proses

Teknik

-Tempatkan 100 µl sampel atau standar untuk dianalisis dalam tabung reaksi.

-Tambahkan 2 ml natrium hidroksida.

-Campur dengan baik.

-Tambahkan 5 ml reagen Biuret.

-Campur dan biarkan istirahat selama 25 menit pada suhu kamar, tutup dan lindungi dari cahaya.

-Mengamati terbentuk tidaknya warna dan ukur secara spektrofotometri.

Kurva kalibrasi

Albumin serum sapi dapat digunakan sebagai standar untuk melakukan kurva kalibrasi. Berbagai konsentrasi disiapkan darinya. Misalnya 25, 50, 75, 100, 125 dan 150%.

Reaksi diatur dengan semua konsentrasi yang diketahui ini dan absorbansi dibaca pada panjang gelombang 540 nm. Dengan data konsentrasi yang diketahui dan pembacaan absorbansi, kurva kalibrasi dibuat.

Dalam setiap penentuan atau batch sampel yang diproses, direkomendasikan untuk memasang standar. Albumin serum sapi 0,1-2 mg / ml dapat digunakan sebagai standar kalibrasi.

Pengukuran dilakukan pada spektrofotometer pada 540 nm.

Linearitas terpenuhi hingga konsentrasi 12 g / dl.

Gangguan

Zat yang mengganggu uji Biuret

Meskipun tidak terlalu sering, perlu diperhatikan bahwa beberapa zat dapat mengganggu selama pelaksanaan tes ini. Misalnya, keberadaan amonia dapat menghambat pembentukan warna.

Demikian pula, zat lain dapat menyerap pada panjang gelombang yang sama, seperti pigmen tertentu.

Di sisi lain, interferensi dapat ditimbulkan bila zat selain ikatan peptida membentuk kompleks dengan garam cupric. Contoh: beberapa karbohidrat dan lipid tertentu.

Jika sampel yang akan dianalisis menunjukkan beberapa jenis endapan, maka sampel harus disaring atau disentrifugasi sebelum memasang pengujian.

Zat yang tidak mengganggu uji Biuret

Tes tidak dipengaruhi oleh adanya:

-Bilirubin hingga konsentrasi 20 mg / dl.

-Hemoglobin sampai konsentrasi 750 mg / dl.

-Dekstran hingga konsentrasi 30 g / L.

-Trigliserida sampai konsentrasi 4000 mg / dl.

Keuntungan

-Ini adalah metode sederhana untuk dieksekusi.

-Ini adalah ujian ekonomi.

-Itu memiliki spesifisitas tinggi untuk protein.

Gangguan kecil.

Kekurangan

Ini memiliki kepekaan yang buruk untuk mendeteksi jumlah protein yang rendah. Pekerjaan yang dilakukan oleh Fuentes dkk. Menegaskan bahwa metode uji Biuret memiliki batas deteksi 1 mg / ml protein dan batas kuantifikasi 3 mg / ml.

Namun, penelitian lain yang dilakukan di Universitas Amazonia melaporkan nilai yang jauh lebih rendah. Batas deteksi yang dilaporkan oleh penelitian ini adalah 0,020 mg / ml dan batas kuantifikasi adalah 1,33 mg / ml.

Aplikasi

Reagen atau uji Biuret digunakan untuk penentuan protein dalam sampel klinis dan non-klinis di laboratorium rutin dan penelitian.

Patologi yang terjadi dengan peningkatan atau penurunan

Dalam banyak patologi, penting untuk menentukan konsentrasi protein total dalam sampel klinis, yang mungkin meningkat atau menurun.

Mereka ditinggikan di:

-Mieloma multipel,

-Lupus eritematosus sistemik,

Endokarditis bakteri,

-Bakteri meningitis,

Makroglobulinemia Waldenstrom, antara lain.

Itu berkurang di:

-Insufisiensi ginjal,

-Orang dengan tingkat malnutrisi parah,

-Pasien dengan infeksi kronis, antara lain.

Sampel klinis

Sampel klinis yang paling umum adalah serum, plasma, dan urin. Nilai normal protein dalam serum atau plasma adalah 6,0-8,8 gr / dl.

Konsentrasi protein dalam urin pada orang dewasa tidak melebihi angka 150 mg / 24 jam.

Rasio protein urin / kreatinin urin nilai normal

Bayi: <0,50 mg

Anak-anak 2 tahun ke atas: indeks: 0,20 mg

Dewasa: <0,2 mg

Sampel nonklinis

Reaksi Biuret dapat digunakan untuk berbagai jenis sampel non-klinis, seperti produk susu, antivenom, atau zat yang tidak diketahui yang ingin Anda selidiki keberadaan proteinnya.

Referensi

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Karakterisasi fisika-kimiawi dan kandungan protein ekstrak cairan tiram mangrove (Crassostrearizophorae). Jurnal Kimia Kuba, 26 (1), 66-74. Diperoleh pada 26 Juni 2019, dari http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Karakterisasi fungsional dari almond biji mangga (Mangifera indica L.) Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 19 Jun 2019, 16:37 UTC. 26 Jun 2019, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. Standardisasi metode Biuret untuk mengukur protein total dalam serum antibotropik polivalen yang diproduksi di Pusat Nasional Produk Biologi INS. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Tersedia di: repositorio.ins.gob.pe
5. Laboratorium Pemenang. Total protein. Metode kolorimetri untuk penentuan protein total dalam serum dan plasma. Tersedia di: wiener-lab.com.ar