PEWARNAAN HEMATOXYLIN-EOSIN: KARAKTERISTIK, KEGUNAAN, TEKNIK - KIMIA - 2024

The hematoxylin - eosin adalah teknik pewarnaan dengan menggunakan kombinasi dari hematoxylin pewarna dan eosin. Sepasang pewarna ini menjadi duo yang sempurna, karena hematoxylin bertindak sebagai pewarna dasar dan eosin adalah pewarna asam.

Penunjukan pewarna basa atau asam tidak mengacu pada pH yang mereka peroleh dalam larutan, melainkan berbicara tentang proporsi yang berlaku dalam hal muatan anionik atau kationik yang dimilikinya atau dengan lokasi gugus kromofor.

Hematoxylin - eosin (HE) diwarnai epitel kolumnar bersilia Sumber: Todd Straus dan Vladimir Osipov

Dalam pengertian ini, hematoksilin dianggap sebagai pewarna basa (kationik) dan oleh karena itu memiliki afinitas untuk struktur asam, seperti inti sel. Sedangkan eosin, sebagai pewarna asam (anionik), memiliki afinitas terhadap basa atau struktur basa, seperti sitoplasma sel.

Untuk alasan ini, kombinasi pewarna ini banyak digunakan untuk pewarnaan jaringan, karena memungkinkan nuklei dan sitoplasma dibedakan dengan jelas. Inti berwarna biru tua atau ungu dan sitoplasma berwarna merah muda.

Pewarnaan hematoksilin-eosin merupakan salah satu teknik pewarnaan yang paling banyak digunakan di bidang histologi dan sitologi, karena penanganannya yang mudah dan biaya yang murah. Ini digunakan untuk memvisualisasikan sel, serat saraf yang tebal dan keberadaan mikroorganisme tertentu di jaringan, seperti: parasit, jamur dan bakteri, antara lain.

karakteristik

Hematoxylin

Hematoxylin adalah pewarna netral. Namun, komponen yang memberikan warna (kromofor) terletak di pusat kationik atau dasar molekul. Oleh karena itu afinitasnya untuk struktur asam. Rumus kimianya adalah C ₁₆ H ₁₄ O ₆ dan nama ilmiahnya adalah 7,11b-dihydroindeno chromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Ini terutama menodai inti sel, karena mereka sangat kaya akan asam nukleat. Itu juga dapat menodai inklusi sitoplasma yang berasal dari virus.

Agar hematoxylin dapat ternoda, ia harus dalam keadaan teroksidasi dan terikat pada logam. Yang terakhir akan berfungsi untuk menempel pada jaringan, yaitu akan bertindak sebagai mordan.

Ketika hematoxylin dioksidasi disebut hematein. Oksidasi dicapai dengan paparan oksigen (penuaan) reagen atau oleh zat yang membantu oksidasi (oksidasi kimiawi).

Eosin

Eosin adalah pewarna yang bernoda merah atau merah muda. Ini tidak larut dalam air meskipun ada versi yang larut dalam air. Umumnya, eosin dibuat dengan melarutkan alkohol (etanol 95 °).

Ini menodai sitoplasma, serat otot, organel sitoplasma, dan kolagen, tetapi tidak menodai inti sel. Ini karena bermuatan negatif, oleh karena itu, ia memiliki afinitas untuk struktur bermuatan positif.

Ada dua jenis eosin "Y" dan "B". Eosin "Y" dikenal sebagai eosin kuning. Nama ilmiahnya adalah tetrabromo fl uorescein dan rumus kimianya adalah C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

Di sisi lain, eosin "B" kadang disebut eritrosin B. Nama ilmiahnya dibromodynitrofluorescein dan rumusnya adalah C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Keduanya sangat mirip dan perbedaan antara menggunakan satu atau lainnya tidak terlalu terlihat. Namun yang paling populer adalah eosin "Y".

Eosin memiliki khasiat untuk membedakan antara sel hidup dan sel mati, karena hanya mampu melintasi membran untuk menodai sitoplasma ketika sel mati, meninggalkan sitoplasma sel tidak berwarna jika tetap hidup.

Aplikasi

Pewarnaan serat saraf

Serabut saraf tebal dapat diwarnai dan diidentifikasi dengan hematoksilin-eosin. Namun, ini tidak berguna untuk pewarnaan serabut saraf tipis, karena pewarnaan perak diperlukan untuk memvisualisasikan yang terakhir.

Noda bagian kulit histologis

Dalam pewarnaan lapisan tanduk kulit, pewarna yang bertindak adalah eosin, karena pada tingkat ini sel tidak memiliki inti.

Pada lapisan granular kulit, hematoxylin sangat menodai butiran keratohyalin di dalam sel granul. Sebaliknya, lapisan spinous kulit diwarnai dengan hematoxylin, sedangkan lapisan basal atau germinal cukup diwarnai.

Eosin menodai sitoplasma semua sel dan intensitas warnanya dapat bervariasi dari lapisan ke lapisan.

Pewarnaan hematoxylin-eosin pada sampel tinja

Gómez et al., Pada tahun 2005 menunjukkan bahwa pewarnaan hematoksilin-eosin lebih efektif dalam mengidentifikasi kasus amoebiasis akibat perbedaan Entamoeba histolytica dan Entamoeba daripada metode visualisasi segar (saline dan lugol) pada pasien dengan penyakit diare akut.

Ini juga telah terbukti sangat sensitif dalam mendeteksi eritrofagositosis (amuba yang telah menelan eritrosit).

Pewarnaan bagian histologis untuk diagnosis infeksi

Walwyn et al., Pada tahun 2004 mengusulkan penggunaan pewarnaan histologis untuk mendeteksi mikroorganisme penyebab infeksi.

Dengan menggunakan pewarnaan hematoksilin-eosin, mereka dapat memvisualisasikan infeksi yang disebabkan oleh Clostridium, Actinomyces, spirillae atau Candida. Mereka juga dapat mengamati keberadaan parasit Sarcoptes escabiei di bagian kulit dan inklusi virus oleh cytomegalovirus dan herpes di berbagai bagian jaringan.

Teknik

Untuk sampel histologis

Pewarnaan bagian histologis melalui serangkaian langkah. Hal pertama adalah mendapatkan bagian histologis. Ini harus di-wax untuk kemudian mendapatkan potongan (sangat halus) dengan mikrotom. Tekniknya terdiri dari langkah-langkah berikut:

1-Eliminasi parafin berlebih : untuk ini Anda dapat menggunakan xylol atau Heme-D, rendam selama 3-5 menit.

2-Rehidrasi sampel: ini dilakukan dengan merendam sampel dalam konsentrasi alkohol berbeda (etanol) dalam urutan menurun (100 °, 90 °, 70 °). Dalam semua kasus selama 7 menit.

3-Penghapusan alkohol berlebih: untuk ini direndam dalam air selama 7 menit.

4-Pewarnaan dengan hematoxylin: sampel direndam selama 6-10 menit dalam nampan yang berisi hematoxylin. Waktu pemaparan tergantung pada ukuran dan ketebalan sampel.

5-Penghapusan kelebihan hematoksilin: dicuci dengan air selama 5 menit dan kemudian bagian cepat (10-20 detik) dilakukan melalui alkohol asam. Nanti dicuci dengan air lagi selama 5 menit. Kemudian direndam dalam etanol pada suhu 96 ° selama 1 menit.

6-Pewarnaan dengan eosin: untuk ini, sampel direndam selama 5 menit di baki eosin.

7-Dehidrasi sampel : untuk melakukan ini, ia melewati baki alkohol (etanol), tetapi kali ini dalam urutan naik. (70 °, 90 °, 100 °). (Selama 5 detik, 5 detik, 1 menit masing-masing).

8-Klarifikasi sampel : untuk ini, sampel dipaparkan pada xylol selama 5-10 menit dan dikeringkan untuk ditutup secara permanen dengan balsam Kanada atau bahan serupa lainnya.

Untuk mencari sampel tinja

Apusan dibuat pada slide dengan feses pasien dan difiksasi dengan alkohol 80% selama 5 menit. Lembaran tersebut direndam dalam hematoxylin selama 5 menit dan segera dicuci dengan air.

Selanjutnya, dengan cepat direndam dalam alkohol asam dan kemudian dalam air amonia. Itu dicuci dengan air. Diwarnai selama 5 menit dalam eosin. Sampel didehidrasi seperti yang dijelaskan pada penemuan sebelumnya dan akhirnya dibilas dengan xylene.

Persiapan reagen

- Hematoxylin

Dalam satu liter air suling, larutkan 50 gram kalium atau amonium aluminium sulfat. Setelah benar-benar larut, tambahkan 1 gram hematoksilin yang mengkristal. Ketika benar-benar larut, 1 g asam sitrat ditambahkan bersama dengan 50 g kloral hidrat dan 0,2 g natrium iodat.

Campuran direbus selama 5 menit, kemudian dibiarkan dingin dan disaring untuk menghilangkan partikel padat yang tersisa. Reagen yang disiapkan dapat segera digunakan.

- Eosin

Ini dapat dibuat dengan basis alkohol atau dengan basis air.

Eosin beralkohol

Dalam 100 ml etanol pada suhu 95 °, larutkan 0,5 gram eosin "Y". Kemudian tambahkan beberapa tetes asam asetat glasial.

2% eosin encer

Dalam 1250 ml air suling, larutkan 25 gram eosin "Y" yang larut dalam air. Kemudian tambahkan beberapa tetes asam asetat glasial.

Alkohol asam

Takar 0,5 ml asam klorida pekat dan buat hingga 100 ml dengan alkohol absolut.

Air amonia

Takar 0,5 mL amonia pekat dan buat hingga 100 mL dengan air suling.

Referensi

1. Navarrete, G. Histologi kulit. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Tersedia di: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Identifikasi Entamoeba histolytica / E. Berbeda dengan teknik amuba segar vs pewarnaannya dengan hematoksilin-eosin pada diare akut. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Tersedia di: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Kegunaan teknik histologis untuk diagnosis infeksi pada spesimen anatomi. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Tersedia di: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW Reagen. Pewarnaan hematoxylin-eosin. 2017, Spanyol. Tersedia di: itwreagents.com
6. Eosin. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 7 Nov 2018, 08:18 UTC. 4 Agustus 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. "Hematoxylin." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 3 Mei 2019, 11:23 UTC. 4 Agustus 2019, 22:48 wikipedia.org