UJI OKSIDASE: ALASAN, PROSEDUR, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

Uji oksidase merupakan metode diagnostik yang menunjukkan adanya kompleks enzim yang disebut sitokrom oksidase c. Sistem ini menginduksi transformasi sitokrom yang direduksi menjadi teroksidasi, karena sitokrom menangkap oksigen dan pada gilirannya bertindak sebagai akseptor elektron terakhir (H ⁺ ) dalam rantai pernapasan.

Istilah oksidase adalah singkatan dari enzim sitokrom oksidase, juga dikenal sebagai indofenol oksidase. Pada zaman kuno diyakini bahwa enzim sitokrom oksidase dan indofenol oksidase adalah dua enzim yang berbeda, tetapi saat ini keduanya dikenal sama.

Uji oksidase positif dan negatif. Sumber: Tidak ada penulis yang dapat dibaca mesin. Alpha.prim ~ commonswiki diasumsikan (berdasarkan klaim hak cipta).

Untuk bagiannya, sitokrom adalah hemoprotein yang mengandung zat besi dan melengkapi sistem sitokrom oksidase. Sitokrom dapat bervariasi dari spesies ke spesies.

Ada berbagai jenis sitokrom (sitokrom a1, a2, a3 dan 0). Beberapa bakteri hanya dapat menghasilkan satu, tetapi yang lain hingga dua atau tiga sekaligus. Dalam pengertian ini, keberadaan sitokrom a dan a3 dikenal sebagai sitokrom oksidase c. Ini adalah jenis sitokrom yang dideteksi oleh uji oksidase.

Genera Neisseria dan Pseudomonas mengandung sitokrom oksidase c. Genera ini memberikan uji oksidase positif, membantu membedakannya dari genera Acinetobacter dan Stenotrophomonas.

Ada juga genera lain yang oksidase positif.

Dasar

Karakteristik sistem sitokrom oksidase c

Sistem sitokrom oksidase c bekerja dengan cara berikut: mikroorganisme oksidase-positif menggunakan oksigen untuk menghasilkan energi melalui respirasi aerobik. Sistem ini bekerja berkat pengangkutan elektron dari zat donor seperti NADH ⁺ ke zat reseptor, dalam hal ini oksigen.

Ini menghasilkan produksi energi (ATP) dan air atau hidrogen peroksida, tergantung pada sistem oksidase sitokrom yang dimiliki mikroorganisme.

Itulah sebabnya sebagian besar bakteri oksidase positif juga merupakan katalase positif, suatu kondisi yang diperlukan untuk menghilangkan hidrogen peroksida yang dihasilkan, karena zat ini beracun bagi bakteri.

Sistem sitokrom oksidase c terdapat pada beberapa bakteri aerob, beberapa anaerob fakultatif, sedikit mikroaerofilik, dan tidak ada bakteri anaerob ketat. Yang terakhir ini dapat dimengerti, karena anaerob yang ketat tidak dapat hidup dengan adanya oksigen, oleh karena itu mereka tidak memiliki sistem oksidase sitokrom.

Prinsip uji

Dalam tes ini menggunakan zat yang bertindak sebagai akseptor elektron buatan, menggantikan yang alami di dalam rantai transpor elektron.

Terutama, pewarna seperti paraphenylenediamine dan indophenol digunakan, yang bertindak sebagai substrat reseptor dan donor elektron buatan.

Paraphenylenediamine dioksidasi oleh sistem sitokrom oksidase c. Pewarna dalam bentuk tereduksi tidak berwarna, tetapi dalam bentuk teroksidasi berwarna.

Ini adalah bagaimana keberadaan sistem sitokrom oksidase c dibuktikan; karena reaksi positif akan menghasilkan warna lavender atau biru-ungu tergantung pada reagen yang digunakan.

Sebaliknya, jika zat penerima elektron terakhir dalam rantai pernafasan berbeda dengan oksigen, uji oksidase akan negatif (tidak ada produksi warna); ini adalah kasus dengan mikroorganisme anaerobik.

Begitu pula jika sitokrom yang digunakan oleh mikroorganisme berbeda dengan sitokrom oksidase c, maka akan memberikan uji negatif.

Proses

Ada berbagai reagen dan protokol untuk uji oksidase, semuanya untuk tujuan yang sama.

Reagen

Reagen Kovacs, pereaksi Gordon dan McLeod, pereaksi Nadi, pereaksi Carpenter, pereaksi Suhrland dan Morrison, dan penggunaan cakram oksidase.

Reagen oksidase -Kovacs

Itu terdiri dari 1% tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride.

Reagen Kovacs dibuat dengan melarutkan 1 g bahan yang disebutkan di atas dalam 50 ml air suling. Itu dipanaskan dengan lembut sampai larut sepenuhnya. Pindahkan ke botol amber dengan kapasitas yang cukup dan ubah volumenya menjadi 100 ml dengan air suling. Tunggu setidaknya 15 menit sebelum menggunakan. Simpan di lemari es terlindung dari cahaya.

Ini diberi label reagen oksidase Kovacs, untuk membedakannya dari reagen Kovacs yang digunakan untuk mengungkap uji indol. Reagen ini adalah yang paling sensitif, tidak terlalu beracun, tetapi lebih mahal daripada reagen lainnya.

Reaksi positif akan dibuktikan dengan reagen ini dengan perubahan warna koloni menjadi lavender, yang dengan cepat berubah menjadi ungu hampir hitam. Reaksi negatif terbukti karena tidak ada perubahan warna di koloni atau warnanya agak merah muda. Mediumnya juga bisa menjadi gelap, tapi itu tidak berarti reaksi positif.

Dengan reagen ini, waktu reaksi menjadi sangat penting, perubahan warna yang terjadi antara 5 hingga 15 detik dianggap sebagai reaksi positif.

Reagen -Gordon dan McLeod

Itu terdiri dari dimetil-p-fenilenadiamin dihidroklorida, juga dikenal sebagai N-dimetil-p-fenilenadiamin atau p-aminodimetilanilina monohidroklorida. Ini disiapkan seperti yang dijelaskan untuk pereaksi oksidase Kovacs, menggantikan zat yang terlibat.

Reagen ini sedikit lebih stabil daripada reagen oksidase Kovacs, meskipun semua reagen yang mengandung p-fenilenediamin tidak stabil.

Reaksi ini kemudian diartikan sebagai positif dengan munculnya warna biru-ungu dalam waktu 10 sampai 30 menit.

-Nadi reagen

Ini terdiri dari 1% α-naftol dalam etil alkohol (95% etanol) dan 1% aminodimethylaniline. Campuran dibuat dalam bagian yang sama dan menggunakan etil alkohol absolut sebagai pengencer, sampai membuat jumlah yang cukup untuk 100 ml.

-Carpenter, Suhrland dan Morrison reagen

Ini terdiri dari 1% p-aminodimethylalanine oxalate. Persiapkan dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan untuk pereaksi oksidase Kovacs, ganti bahan yang sesuai.

Setelah larutan siap, strip uji disiapkan sebagai berikut: Strip kertas saring Whatman No. 1 6-8 cm diresapi dengan reagen dimetil-p-fenilenadiamin oksalat 1%.

Mereka dibiarkan mengering tanpa kontak dengan logam, disimpan dalam stoples bertutup ulir dengan pengering dan simpan di lemari es. Strip ini stabil hingga 6 bulan.

Ini adalah reagen paling stabil dari semua yang disebutkan, dan dapat bertahan hingga 6 bulan dalam larutan. Nilai tambah lainnya adalah tidak mewarnai media di sekitar koloni, jika digunakan langsung di atas piring.

Munculnya warna merah diartikan sebagai tes positif.

Cakram -Oxidase

Mereka adalah cakram komersial yang diresapi dengan reagen untuk uji oksidase. Ada beberapa merek komersial di pasaran.

Penggunaannya cukup praktis, karena tidak perlu menyiapkan reagen segar, yang memudahkan pekerjaan. Hasil yang diperoleh dapat diandalkan selama cakram diawetkan dengan benar.

Protokol

Metode pelat langsung, metode tidak langsung di atas kertas dan penggunaan cakram yang diresapi dengan reagen oksidase.

Metode papan -Direct

2 atau 3 tetes reagen yang disebutkan sebelumnya ditambahkan untuk tujuan ini langsung ke koloni yang terdapat dalam cawan media kultur yang tidak mengandung glukosa.

Berubah atau tidaknya warna koloni diartikan, bukan medianya. Waktu reaksi yang valid tergantung pada reagen yang digunakan.

-Metode tidak langsung di atas kertas

Potong selembar kertas saring (Whatman No. 1) menjadi ukuran 6 cm ² dan letakkan di dalam cawan petri kosong.

Tambahkan 2 atau 3 tetes reagen oksidase Kovacs di atas kertas, ambil bagian koloni yang akan dipelajari dengan gagang platina atau tusuk gigi kayu dan sebarkan dalam garis lurus pada kertas yang diresapi reagen. Tafsirkan dalam 5 hingga 10 detik.

Dengan strip yang disiapkan dengan reagen Carpenter, Suhrland dan Morrison, sebuah koloni disebarkan pada strip kering. Sebuah strip tunggal digunakan untuk menguji beberapa strain. Menafsirkan dalam 10 detik.

-Disk (m

Basahi sedikit cakram komersial dengan air suling steril dan taruh di atas koloni yang akan dipelajari. Dianjurkan untuk menggunakan pelat pada suhu 35 ° C, jika pelat pada suhu kamar atau pelat berpendingin digunakan reaksinya sedikit lebih lambat. Tafsirkan perubahan warna antara 10 hingga 20 detik.

Koloni yang terdapat pada darah atau agar coklat dapat digunakan.

-Disk (metode tidak langsung)

Basahi disk seperti yang dijelaskan sebelumnya. Tempatkan di cawan Petri kosong. Ambil koloni dalam jumlah yang cukup untuk dipelajari dengan gagang platina atau tusuk gigi kayu dan letakkan di atas cakram. Tafsirkan perubahan warna antara 10 hingga 20 detik.

Menggunakan

Genus Neisseria dan Acinetobacter terkadang sangat mirip secara morfologis karena meskipun genus Acinetobacter adalah batang Gram-negatif, kadang-kadang dapat mengambil bentuk coccoid dan didistribusikan berpasangan, menirukan genus Neisseria.

Dalam hal ini uji oksidase sangat berguna. Genus Neisseria positif dan Acinetobacter negatif.

Namun genus Moraxella sangat mirip dengan genus Neisseria dan keduanya memberikan reaksi positif; Inilah mengapa uji fermentasi karbohidrat harus selalu dilakukan untuk identifikasi yang pasti.

Di sisi lain, uji oksidase berguna untuk membedakan bakteri yang termasuk dalam famili Enterobacteriaceae (semuanya oksidase negatif) dari fermentor lain, seperti genus Pasteurella, Aeromonas, Plesiomonas (oksidase positif).

Genus Vibrio dan Helicobacter juga oksidase positif.

QA

Gunakan strain Escherichia coli yang diketahui sebagai kontrol negatif dan strain Pseudomonas aeruginosa sebagai kontrol positif.

Batasan

- Reagen harus digunakan dalam keadaan segar, umur simpannya dalam larutan pada suhu kamar pendek karena sangat tidak stabil. Didinginkan mereka bisa bertahan antara 5 hari sampai 2 minggu.

-Reagen tidak berwarna, jika berubah warna maka harus dibuang. Disk yang rusak muncul karena semakin gelap seiring waktu.

-Raksi positif dengan pereaksi oksidase Kovacs antara 15-60 detik dianggap sebagai reaksi tertunda dan setelah 60 detik harus dianggap negatif.

-Haemophylus influenzae memberikan reaksi oksidase negatif jika ada pereaksi dengan dimetil-p-fenilenediamin yang digunakan, tetapi positif jika pereaksi oksidase Kovacs (tetrametil-p-fenilenadiamina) digunakan.

-Media yang mengandung glukosa mengganggu tes, memberikan negatif palsu.

Strain -Bordetella pertussis dapat memberikan reaksi positif palsu jika berasal dari piring agar darah yang sangat pekat.

-Penggunaan pegangan logam (besi) memberikan reaksi positif palsu.

rekomendasi

-Karena reagen sangat tidak stabil dan cenderung teroksidasi sendiri, dianjurkan untuk membekukan alikuot 1 sampai 2 ml dan membuangnya sesuai kebutuhan.

-Cara lain untuk menunda oksidasi otomatis reagen adalah dengan menambahkan asam askorbat 0,1% saat menyiapkan reagen.

-Karena reagen tidak stabil, kontrol kualitas mingguan direkomendasikan.

-Reagen yang tidak lulus uji kendali mutu sebaiknya tidak digunakan.

Referensi

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. "Uji Oksidase." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 15 Jan 2018, 10:32 UTC. 3 Apr 2019 pada 14:03
4. Organisasi Kesehatan Dunia. Manual Laboratorium untuk Identifikasi dan Pengujian Kerentanan terhadap Antimikroba dari Bakteri Patogen Pentingnya Kesehatan Masyarakat di Dunia Berkembang.2004. Tersedia di: who.int/drugresistance/infosharing
5. Strip reagen untuk diagnosis aktivitas oksidase pada bakteri. Rev Cubana Med Trop. 2000; 52 (2): 150-151.