TES KOAGULASE: ALASAN, PROSEDUR, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

Uji koagulase adalah teknik laboratorium yang digunakan untuk mengungkap keberadaan enzim koagulase. Enzim ini memiliki sifat koagulasi plasma. Loeb pada tahun 1903 adalah orang pertama yang mendeskripsikan enzim ini.

Tes ini dilakukan pada Gram-positif, cocci katalase-positif, memungkinkan untuk membedakan strain Staphylococcus aureus dari sisa stafilokokus, karena merupakan satu-satunya mikroorganisme penting secara klinis yang memproduksinya.

Kedua gambar menunjukkan Tes Koagulase positif. Sumber: Gambar kiri: Philippinjl. Gambar kanan: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.

Dalam pengertian ini, anggota keluarga Staphylococaceae yang hasil tesnya negatif sering disebut sebagai Staphylococcus negatif koagulase.

Terdapat beberapa strain selain S. aureus yang dapat menghasilkan koagulase, seperti Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius dan S. delphini.

Namun, tiga yang pertama memiliki kepentingan klinis di tingkat veteriner dan sangat jarang ditemukan sebagai agen penyebab infeksi pada manusia, sedangkan S. delphini hanya ditemukan di lingkungan laut.

Lebih lanjut, mereka mudah dibedakan karena S. hyicus dan S. intermedius tidak memfermentasi manitol dan S. schleiferi spp coagulans tidak memfermentasi maltosa atau trehalosa, sedangkan S. aureus memfermentasi karbohidrat ini.

Kehadiran enzim koagulase telah dikaitkan dengan virulensi strain. Namun, teori ini telah runtuh, karena spesies negatif koagulase-virulen lain yang mampu menghasilkan infeksi yang signifikan diamati.

Dasar

Penafsiran

Aglutinasi dalam 5-20 detik (uji positif kuat).

Aglutinasi variabel terjadi antara 20 detik dan satu menit (uji positif tertunda).

Beberapa derajat aglutinasi setelah satu menit (bukti meragukan). Dianjurkan untuk mengulangi tes atau konfirmasi dengan metode tabung.

Tidak ada aglutinasi (tes negatif).

Hasil dengan SSF. Itu harus selalu memberi negatif, jika memberi positif otomatis hasil tes tidak valid.

-Tes koagulase tabung

bahan

-Tabung reaksi steril

-Plasma

-Bath of Mary pada 37 ° C.

Teknik

Pipet 0,5 ml plasma ke dalam tabung reaksi 12 x 75 dengan pipet steril. Isi loop platinum dengan 2 sampai 4 koloni murni untuk dipelajari dari kultur padat selama 18 sampai 24 jam dan larut dalam plasma campur dengan hati-hati dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 4 jam.

Periksa tabung dalam satu jam pertama tanpa mengguncangnya, cukup miringkan perlahan. Jika bekuan masih belum terlihat, dapat terus diamati setiap 30 menit hingga 4 jam selesai. Jika setelah 4 jam masih negatif, dapat dibiarkan hingga 24 jam tetapi pada suhu kamar. Amati dan laporkan hasilnya.

Berdasarkan pengalaman, beberapa ahli mikrobiologi merekomendasikan penggunaan 500 µl suspensi bakteri dari kultur 18 jam dalam media cair untuk melakukan pengujian.

Tampaknya menawarkan hasil yang lebih cepat dan lebih dapat diandalkan daripada saat mengemulsi koloni dari media padat, terutama jika plasma manusia yang diperoleh dari bank darah telah digunakan.

Penggunaan strain dari kaldu membantu mengencerkan kemungkinan adanya antibodi anti-stafilokokus manusia dalam plasma yang dapat menghambat kerja koagulase.

Penafsiran

Jika terlihat adanya gumpalan yang meliputi semua cairan (pembekuan total) atau gumpalan tanpa sisa cairan (penggumpalan sebagian), tes tersebut harus dianggap sebagai tes positif.

Jika tidak ada bekuan yang terbentuk, yaitu suspensi tetap homogen, pengujiannya negatif.

-Tes koagulase menggunakan fibrinogen

Fibrinogen digunakan sama seperti plasma dan digunakan untuk uji slide dan tube. Lanjutkan seperti yang dijelaskan untuk plasma dan interpretasikan dengan cara yang sama.

Menggunakan

Ini digunakan untuk membedakan Staphylococcus aureus dari stafilokokus koagulase negatif.

QA

Sediakan biakan segar strain S. aureus untuk digunakan sebagai kontrol positif. Strain S. epidermidis juga tersedia sebagai kontrol negatif.

Batasan

-Tes positif tidak boleh dibiarkan dalam inkubasi selama 24 jam, karena S. aureus menghasilkan fibrinolysin yang melarutkan gumpalan.

-Untuk tes yang andal, plasma segar atau yang baru dilarutkan harus digunakan, serta penting untuk menggunakan kultur bakteri segar (18 hingga 24 jam). Ini menghindari negatif palsu.

-Pengujian harus dilakukan bersama dengan kontrol negatif dan positif.

-Beberapa media padat dapat mengganggu tes koagulase. Tidak disarankan menggunakan koloni dari agar manitol yang asin.

-Jika plasma sitrat digunakan, dianjurkan untuk menempatkan 5 unit heparin per ml plasma untuk menghindari kesalahan positif. Hal ini dikarenakan beberapa mikroorganisme selain S. aureus dapat mengurai sitrat dan menyebabkan plasma membeku. Dalam hal ini, disarankan untuk melakukan uji Gram dan katalase.

-Penting, dalam uji tabung, untuk memantau reaksi setiap 30 menit, karena ada strain S. aureus yang menghasilkan fibrinolysin konsentrasi tinggi dan akan mengencerkan bekuan yang baru terbentuk dengan cepat. Hindari negatif palsu.

-Ketika memantau tes, hindari mengguncang tabung secara tiba-tiba, ini dapat menghancurkan inisiasi pembentukan gumpalan yang tidak akan dipulihkan nanti, menyebabkan negatif palsu.

Referensi

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratorium Pro-Lab. Kelinci membekukan plasma. Tersedia di: pro-lab.com
5. "Koagulase." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 12 Feb 2019, 04:23 UTC. 22 Apr 2019, 15:50 wikipedia.org.