ORCEIN: FONDASI DAN PERSIAPAN - KIMIA - 2025

The orceína adalah alami berwarna ungu, diekstrak dari berbagai lumut sebagai orchilla atau archill, fruticose lichen Rocella tinctoria dan Lecanora Parella terutama. Rocella tinctoria ditemukan di benua Afrika dan Amerika, meskipun dapat digantikan oleh spesies lain yang terletak di Eropa.

Pewarnaan ini telah banyak digunakan dalam penelitian sitogenetik sejak zaman kuno. Dalam pengertian ini, sediaan orcein yang mencakup asam asetat diperkenalkan oleh LaCourt pada tahun 1941, itulah mengapa pada awalnya disebut teknik LaCourt.

Struktur kimia larutan orcein dan orcein. Sumber: Wikipedia.org/ Oguenther di de.wikipedia (Dr. Guenther)

Demikian juga, karena kesederhanaan dan biayanya yang rendah, bahan ini telah digunakan untuk pembuatan lakmus (noda yang diekstrak dari lumut) dan dalam studi histologis (pewarnaan sel dan jaringan).

Beberapa penelitian telah menggunakan pewarnaan ini yang dikombinasikan dengan bahan kimia lain, seperti amonia picrocarminate dan asam asetat, masing-masing untuk mewarnai serat elastis dan kromosom. Saat ini, orcein terus digunakan dalam studi sitogenetik hewan dan tumbuhan.

Baru-baru ini, Silva et al. Pewarnaan ini berhasil digunakan pada tahun 2017 untuk mengamati berbagai perubahan yang terjadi pada serat elastis kulit ibu jari pada lansia Chili. Studi ini mengungkapkan bagaimana serat ibu jari berubah seiring bertambahnya usia.

Dalam hal ini, serat elastis diamati berwarna hitam kecoklatan pada individu yang berusia lebih dari 80 tahun; sedangkan yang paling muda (dari 60 tahun) terlihat berwarna coklat kemerahan. Sitoplasma dan struktur sel lainnya berubah menjadi hijau kekuningan.

Hal ini memungkinkan pembuktian keberadaan dan kondisi serat elastis, dalam hal disposisi, kuantitas dan integritasnya. Di sisi lain, orcein juga telah diindikasikan sangat membantu dalam mengidentifikasi aneurisma dan mendiagnosis arteritis, di antara kondisi lainnya.

Dasar

Orcein adalah bagian dari kelompok pewarna oksazin, dan pewarnaan didasarkan pada afinitasnya dengan DNA. Pewarna mengikat muatan negatif molekul ini, yang diwakili oleh gugus fosfat. Itu sebabnya, kromosomnya diwarnai ungu.

Namun, struktur sel lainnya memiliki warna yang berbeda. Khususnya, dalam kasus serat elastis, ini berwarna coklat kemerahan, inti sel dari biru menjadi ungu tua, sedangkan kolagen tidak ternoda.

Untuk alasan ini, orcein digunakan untuk mewarnai kromatin dan membedakan jenis kelamin pada beberapa spesies lalat. Demikian juga, inti dan beberapa inklusi hati yang dihasilkan oleh antigen hepatitis B dapat ternoda.

Larutan orcein memiliki fungsi khusus dalam pewarnaan. Orcein A berfungsi melembutkan membran sel, menyebabkan kematiannya dan melumpuhkan proses pembelahannya. Sedangkan orcein B bertanggung jawab untuk menyelesaikan pewarnaan dengan cara adhesi ke kromosom.

Persiapan

Larutan aseto-orcein 1%

Untuk membuat larutan aseto-orcein 1%, 2 gram orcein dilarutkan dalam 45 ml asam asetat glasial, sebaiknya panas, dan 55 ml air suling ditambahkan pada suhu kamar.

Kemudian, terus-menerus dicampur untuk menghomogenkan larutan, kemudian diamkan sampai dingin. Terakhir, disimpan pada suhu 4ºC dalam stoples gelap. Sediaan ini digunakan oleh Flores 2012 untuk melihat fase pematangan oosit sapi.

Dalam hal ini, misalnya, larutan aseto-orcein ditempatkan pada jaringan yang sebelumnya difiksasi dalam asam asetat-etanol selama 24 jam. Proses pewarnaan ini dilakukan selama 30 menit dan jaringan kemudian berubah warna.

Demikian juga, dapat digunakan dalam identifikasi organel di jaringan multiseluler. Dalam hal ini, apusan mukosa bukal diwarnai dengan setetes larutan aseto-orcein, penutup penutup ditempatkan pada slide dan inti sel dengan substrukturnya dapat segera diamati.

Larutan lakto-proponik orcein 1%

Selain itu, orcein dapat dibuat dengan bahan kimia lain seperti asam laktat dan asam propionat. Untuk melakukan ini, satu gram orcein dilarutkan dalam larutan yang telah dicampur sebelumnya pada suhu kamar 23 ml asam laktat dan 23 ml asam propionat; mengencangkan volume dengan akuades hingga 100 ml.

Dengan larutan orcein lakto-propionik ini dimungkinkan untuk mengamati berbagai fase pembelahan meiosis sel tumbuhan. Dalam hal ini, sampel yang telah difiksasi dan dihidrolisis ditempatkan selama 15 menit dalam larutan orcein lakto-propionik dan kemudian jaringan disebarkan pada slide mikroskop.

Dalam studi Duque 2016 tentang kromosom poligenik, ia menggunakan sediaan 2 gram orcein yang diencerkan dalam asam asetat dan 85% asam laktat, diencerkan dengan larutan asam asetat 65%. Akhirnya, dia melihat kromosom di kelenjar ludah Drosophila melanogaster.

Orcein A dan Orcein B

Penting untuk dicatat bahwa tergantung pada sampel dan apa yang akan dievaluasi, larutan orcein yang sesuai disiapkan. Jadi, misalnya, asam klorida 1N ditambahkan ke larutan orcein A untuk mengamati sel yang membelah.

Sedangkan larutan orcein B dilarutkan dalam 45% asam asetat. Teknik ini adalah metode pewarnaan yang disingkat dan umumnya digunakan sebagai tambahan untuk pewarnaan struktur kromosom.

Pikiran terakhir

Sejak berabad-abad yang lalu, lumut seperti Lecanora, Parmelia, dan Umbilicaria dapat ditemukan di negara-negara di benua Amerika seperti Argentina, yang merupakan sumber orcein yang hebat. Juga daerah Eropa seperti Kepulauan Canary, pada saat itu merupakan penghasil besar anggrek.

Ini diekspor ke kota-kota lain di benua yang sama seperti Genoa dan negara-negara seperti Inggris, sementara Belanda memonopoli pembuatan lakmus dari orkilla. Oleh karena itu, lumut ini kemudian berkurang hingga hampir punah.

Ini menyebabkan anggrek digantikan oleh tanaman lain dengan sifat pewarna. Namun, munculnya pewarna sintetis berkontribusi pada penghentian perdagangan lumut sumber orcein ini.

Ini dimungkinkan berkat Cocq, yang pada tahun 1812 mendeskripsikan sintesis orcein, mengetahui kemudian bahwa itu disintesis oleh senyawa fenolik yang disebut orcinol. Namun, meskipun demikian, orcein alami masih menjadi yang disukai saat ini.

Ini mungkin karena orcinol adalah senyawa yang berbau sangat menyengat, dan kontak yang terlalu lama dapat membawa risiko kesehatan, seperti hilangnya kemampuan untuk mendeteksi bau. Kerusakan pada hipofisis ini bisa berubah dari sementara menjadi permanen semakin besar paparannya.

Referensi

1. Ortega L, García R, Morales C. «Penerapan lakase yang dihasilkan oleh jamur untuk degradasi pewarna mikrobiologis (orcein dan kristal violet).» Kaum Muda dalam Sains 2. 2015; 633-637. Tersedia di: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína dan Serat Elastis. Kedokteran (Buenos Aires) 2003; 63: 453-456. Tersedia di: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Karakteristik Histologis Kulit Wajah Terbang Jempol pada Individu Cile dengan Dactylogram Fading. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107-1113. Tersedia di: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. "Biologi reproduksi dan sitogenetika kentang." International Potato Center (CIP). Manual teknis. Tersedia di: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. «Pengumpulan, kultur, dan pematangan in vitro oosit sapi (bos taurus) di dataran tinggi Bolivia." . Universitas Nasional Altiplano, Puno-Peru; 2012. Tersedia di: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Polytenic chromosomes: Melihat fenomena endoreduplikasi. Universitas Nasional Kolombia, Medellín; 2016. Tersedia di: edu.
7. Camarena F. Biologi Seluler dan Molekuler. Manual praktik. Universitas Otonom Baja California. 2017. Tersedia di: pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / IAEA. 2018. Manual untuk membedakan lalat Anastrepha ludens (Loew) liar dan yang dibudidayakan dari strain normal (“bi-seksual”) dan strain genetik (Tapachula-7), yang diiradiasi dan tidak disinari. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF dan Soto García DN Organisasi Pangan dan Pertanian Perserikatan Bangsa-Bangsa. Roma, Italia, 95 hal.
9. Orcein. (2018, 30 November). Wikipedia, ensiklopedia gratis. Tanggal konsultasi: 03:38, 31 Juli 2019 es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018, 16 Juli). Mikroskopi Orcein untuk mikroskop Certistain. Tersedia di: merckmillipore.com