- Dasar
- Peralatan
- Jenis HPLC
- Kromatografi fase normal
- Kromatografi fase terbalik
- Kromatografi pertukaran ion
- Ukuran Pengecualian Kromatografi
- Aplikasi
- Referensi
The -kromatografi cair kinerja tinggi adalah teknik berperan digunakan dalam analisis kimia yang campuran terpisah studi lebih lanjut diperbolehkan, memurnikan dan mengukur komponen-komponennya, dan. Dikenal dengan singkatan HPLC, berasal dari bahasa Inggris: Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.
Jadi, seperti yang ditunjukkan namanya, ia bekerja dengan memanipulasi cairan. Ini terdiri dari campuran yang terdiri dari analit atau sampel yang diinginkan, dan satu atau lebih pelarut yang bertindak sebagai fase gerak; yaitu, salah satu yang menyeret analit melalui semua peralatan HPLC dan kolom.
Peralatan HPLC. Sumber: Dqwyy
HPLC digunakan secara luas oleh laboratorium analisis kualitas di banyak perusahaan; seperti obat-obatan dan makanan. Analis yang dimaksud harus menyiapkan sampel, fase gerak, memeriksa suhu dan parameter lainnya, dan menempatkan botol kecil di dalam roda atau korsel agar peralatan dapat melakukan injeksi secara otomatis.
Peralatan HPLC dihubungkan ke komputer di mana kromatogram yang dihasilkan dapat diamati, serta untuk memulai analisis, mengontrol aliran fase gerak, memprogram jenis elusi (isokratik atau gradien), dan menyalakan detektor (UV -Vis atau spektrofotometer massa).
Dasar
Tidak seperti kromatografi cair konvensional, seperti kromatografi kolom berisi kertas atau silika gel, HPLC tidak bergantung pada gravitasi agar cairan membasahi fase diam. Sebaliknya, ia bekerja dengan pompa bertekanan tinggi, yang mengairi fase gerak atau eluen melalui kolom dengan intensitas lebih besar.
Dengan cara ini, fase gerak tidak perlu terlalu sering dituangkan melalui kolom, tetapi sistem melakukannya secara terus menerus dan dengan laju aliran yang lebih tinggi.
Tetapi efisiensi teknik ini tidak semata-mata karena detail ini, tetapi juga karena partikel pengisi kecil yang menyusun fase diam. Semakin kecil luas kontaknya dengan fase gerak lebih besar, sehingga akan berinteraksi lebih baik dengan analit dan molekulnya akan lebih terpisah.
Kedua karakteristik ini, ditambah fakta bahwa teknik ini memungkinkan penggandengan detektor, membuat HPLC jauh lebih unggul daripada kromatografi lapis tipis atau kertas. Pemisahan lebih efisien, fase gerak bergerak lebih baik melalui fase diam, dan kromatogram dapat mendeteksi kegagalan dalam analisis.
Peralatan
Diagram yang disederhanakan dari pengoperasian peralatan HPLC. Sumber: Gabriel Bolívar.
Di atas adalah diagram sederhana tentang cara kerja peralatan HPLC. Pelarut berada dalam wadahnya masing-masing, diatur dengan selang sehingga pompa mengambil sedikit volume ke dalam peralatan; sehingga kami memiliki fase bergerak.
Fasa gerak atau eluen harus dibuang gasnya terlebih dahulu, sedemikian rupa sehingga gelembung tidak mempengaruhi pemisahan molekul analit, yang bercampur dengan fasa gerak setelah peralatan melakukan injeksi.
Kolom kromatografi terletak di dalam oven yang memungkinkan untuk mengatur suhu. Jadi, untuk sampel yang berbeda terdapat suhu yang memadai untuk mencapai pemisahan berkinerja tinggi, serta katalog kolom dan jenis tambalan atau fase diam yang luas untuk analisis tertentu.
Fase gerak dengan analit terlarut memasuki kolom, dan darinya molekul yang "merasakan" lebih sedikit afinitas untuk fase diam terelusi terlebih dahulu, sedangkan yang lebih tertahan olehnya kemudian terelusi. Setiap molekul yang dielusi menghasilkan sinyal yang ditampilkan pada kromatogram, di mana waktu retensi dari molekul yang terpisah diamati.
Dan di sisi lain, fase gerak setelah melewati detektor berakhir di wadah limbah.
Jenis HPLC
Ada banyak jenis HPLC, tetapi di antara semuanya yang paling menonjol adalah empat jenis berikut.
Kromatografi fase normal
Kromatografi fase normal mengacu pada kromatografi di mana fase diam bersifat polar, sedangkan fase gerak nonpolar. Meskipun disebut normal, pada kenyataannya ini paling jarang digunakan, dengan fase balik menjadi yang paling luas dan efisien.
Kromatografi fase terbalik
Menjadi fase terbalik, sekarang fase diam adalah fase apolar dan fase gerak polar. Ini sangat berguna dalam analisis biokimia, karena banyak biomolekul larut lebih baik dalam air dan pelarut polar.
Kromatografi pertukaran ion
Dalam jenis kromatografi ini, analit, dengan muatan positif atau negatif, bergerak melalui kolom, menggantikan ion yang ditampungnya. Semakin tinggi muatan, semakin tinggi retensinya, itulah sebabnya ia banyak digunakan untuk memisahkan kompleks ionik logam transisi.
Ukuran Pengecualian Kromatografi
Kromatografi ini, alih-alih memisahkan, bertugas memurnikan campuran yang dihasilkan. Sesuai dengan namanya, analit dipisahkan tidak lagi bergantung pada seberapa dekat hubungannya dengan fase diam, tetapi menurut ukuran dan massa molekulnya.
Molekul yang lebih kecil akan lebih tertahan daripada molekul besar, karena molekul yang lebih kecil tidak terperangkap di antara pori-pori pengisian kolom polimerik.
Aplikasi
HPLC memungkinkan dilakukannya analisis kualitatif dan kuantitatif. Di sisi kualitatif, dengan membandingkan waktu retensi kromatogram dalam kondisi tertentu, keberadaan senyawa tertentu dapat dideteksi. Kehadiran seperti itu mungkin menunjukkan penyakit, pemalsuan, atau penggunaan narkoba.
Oleh karena itu, ini adalah bagian komputer dari laboratorium diagnostik. Demikian juga, ditemukan dalam industri farmasi, karena memungkinkan untuk memverifikasi kemurnian produk, serta kualitasnya berkaitan dengan pembubarannya dalam lingkungan lambung. Bahan awal juga dikenakan HPLC untuk memurnikannya dan memastikan kinerja yang lebih baik dalam sintesis obat.
HPLC memungkinkan analisis dan pemisahan campuran kompleks protein, asam amino, karbohidrat, lipid, porfirin, terpenoid, dan pada dasarnya merupakan pilihan yang sangat baik untuk bekerja dengan ekstrak tumbuhan.
Dan akhirnya, kromatografi pengecualian molekuler memungkinkan pemilihan polimer dengan ukuran berbeda, karena beberapa mungkin lebih kecil atau lebih besar dari yang lain. Dengan cara ini, produk dengan massa molekul rata-rata rendah atau tinggi diperoleh, ini menjadi faktor penentu dalam sifat dan aplikasi atau sintesisnya di masa depan.
Referensi
- Day, R., & Underwood, A. (1989). Kimia Analitik Kuantitatif. (edisi kelima). PEARSON Prentice Hall.
- Bussi Juan. (2007). Kromatografi cair kinerja tinggi. . Diperoleh dari: fing.edu.uy
- Wikipedia. (2019). Kromatografi cair kinerja tinggi. Dipulihkan dari: en.wikipedia.org
- Clark Jim. (2007). Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Diperoleh dari: chemguide.co.uk
- Matthew Barkovich. (05 Desember 2019). Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Kimia LibreTexts. Diperoleh dari: chem.libretexts.org
- GP Thomas. (15 April 2013). Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC) - Metode, Manfaat, dan Aplikasi. Diperoleh dari: azom.com