AIR PEPTON: ALASAN, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

Air pepton adalah media pengayaan cairan, nonselektif, terutama digunakan sebagai pengencer sampel makanan atau bahan lainnya. Media ini dari sudut pandang kimia sangat sederhana, mengandung pepton daging, natrium klorida dan air.

Ini memiliki nilai gizi tertentu, memungkinkan untuk memperkaya sampel. Jika ada bakteri yang disalahgunakan, media ini memiliki kekuatan untuk memperbaiki kelangsungan hidup. Ini sangat berguna dalam pemulihan bakteri yang termasuk dalam keluarga Enterobacteriaceae.

Air pepton dalam botol. Sumber: MSc. Marielsa gil

Dalam kasus pemulihan Salmonellas, penggunaan varian air pepton dianjurkan; Ini berfungsi sebagai media pra-pengayaan sampel, dalam hal ini mengandung unsur lain seperti disodium fosfat dan kalium fosfat.

Biasanya air pepton dibuat pada pH netral, namun ada varian lain yang membutuhkan pH 8,5 ± 0,2 (basa), karena bakteri yang akan diisolasi bersifat alkalifilik, seperti Vibrio cholerae.

Selanjutnya media ini dapat digunakan sebagai media dasar pengujian fermentasi karbohidrat.

Dasar

Pepton menyediakan nutrisi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri, terutama nitrogen dan asam amino rantai pendek, sedangkan natrium klorida menjaga keseimbangan osmotik.

Selanjutnya media memungkinkan untuk membubarkan, menghomogenkan dan memperbaiki sel bakteri yang telah rusak akibat proses industri.

Sebagai pengencer, bahan ini ideal, secara efektif menggantikan larutan fisiologis (SSF) atau larutan buffer fosfat (PBS).

Pertumbuhan bakteri dibuktikan dengan mengamati kekeruhannya.

Persiapan

Persiapan buatan sendiri (bukan komersial)

Timbang 1 g pepton dan 8,5 g natrium klorida, larutkan dalam 1 liter air suling. PH harus disesuaikan menjadi 7.0. Untuk ini, natrium klorida 1N dapat digunakan.

Persiapan menggunakan media komersial

Timbang 15 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Homogenkan campuran. Jika perlu, campuran direbus selama 1 menit untuk membantu pelarutan total. Sajikan dalam botol 100 ml atau tabung 10 ml sesuai kebutuhan. Autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Dinginkan dan gunakan atau simpan di lemari es. PH akhir media adalah 7,2 ± 0,2.

Warna media dehidrasi adalah krem ​​muda dan media yang disiapkan berwarna kuning muda.

Persiapan untuk uji fermentasi

Untuk sediaan sebelumnya - sebelum disterilkan - karbohidrat harus ditambahkan ke konsentrasi akhir 1%, ditambah indikator Andrade (asam fuchsin) atau fenol merah (0,018 g / L). Tabung harus dilengkapi dengan bel Durham untuk mengamati pembentukan gas.

Varian air pepton lainnya

Air pepton dengan buffer atau buffered

Ini mengandung hidrolisat enzimatik kasein, natrium klorida, dihidrogen kalium fosfat dan natrium hidrogen fosfat dodecahydrate. PH akhir adalah 7,0 ± 0,2.

Untuk persiapannya, timbang 20 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Biarkan istirahat selama kurang lebih 5 menit. Panaskan selama 1 menit hingga larut sepenuhnya.

Tuang ke dalam toples yang sesuai sesuai kebutuhan. Sterilkan menggunakan autoclave pada 121 ° C selama 15 menit.

-Air pepton alkali

Timbang 25 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Lanjutkan seperti yang dijelaskan di atas. PH berkisar dari 8,3 hingga 8,7.

Menggunakan

Inokulum dilakukan dengan menempatkan sampel secara langsung.

Ini digunakan untuk mengencerkan sampel, terutama jika diduga ada bakteri yang rusak. Biasanya pengencerannya 1:10 dan 1: 100.

Inkubasi selama 24 jam dalam aerobiosis pada suhu 35-37 ° C.

Sampel feses

Untuk sampel tinja untuk Salmonella, penggunaan buffer atau air buffer direkomendasikan sebagai media pra-pengayaan.

Untuk melakukan ini, lakukan sebagai berikut:

Jika tinja terbentuk, ambil 1 g sampel. Jika berbentuk cair, ambil 1 ml tinja dan taruh di dalam tabung berisi 10 ml air pepton yang sudah dihancurkan. Dalam kasus usap rektal, buang bahan yang terkandung di kapas ke dalam tabung dengan air pepton penyangga.

Dalam semua kasus, campur dan homogenkan sampel dengan sangat baik.

Inkubasi pada suhu 37 ° C selama 18 hingga 24 jam. Selanjutnya, lakukan subkultur dalam kaldu pengayaan seperti kaldu selenite cystine atau kaldu tetrathionate pada suhu 37 ° C selama 18-24 jam lebih. Terakhir di budidayakan pada media selektif untuk Salmonella, seperti agar SS, agar XLD, agar Hektoen, dan lain-lain.

Sampel makanan

Air pepton digunakan sebagai media pengayaan atau sebagai pengencer sederhana, tetapi jika spesies Salmonella dicari, digunakan sebagai media pra-pengayaan, seperti yang telah dijelaskan.

Dalam makanan, lanjutkan sebagai berikut:

Untuk makanan padat timbang 25 g sampel dan untuk makanan cair ukur 25 ml. Tempatkan bagian tersebut dalam labu yang berisi 225 ml air pepton. Campur dan homogenkan sampel.

Jika beban mikroba diduga tinggi, pengenceran serial atau desimal dapat dilakukan untuk memfasilitasi penghitungan unit pembentuk koloni (CFU).

Jumlah pengenceran akan tergantung pada jenis sampel dan pengalaman analis.

Sebaliknya, jika muatan mikroba diduga sangat rendah, tidak diperlukan pengenceran. Selanjutnya dilakukan subkultur pada media selektif.

Untuk makanan dari laut, seperti kerang, ikan, antara lain untuk mencari Vibrio cholerae atau jenis Vibrio lainnya, air pepton yang disesuaikan dengan pH 8,5 (air pepton alkali) harus digunakan.

QA

Dari setiap batch yang disiapkan, satu hingga dua tabung harus diinkubasi tanpa inokulasi selama 24 jam dalam aerobiosis pada suhu 37 ° C. Pada akhirnya, tidak ada kekeruhan atau perubahan warna yang harus diamati.

Strain kontrol yang diketahui juga dapat digunakan untuk mengevaluasi keefektifannya:

Untuk ini, strain bakteri berikut dapat digunakan: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Dalam semua kasus, perkembangan mikroba yang memuaskan diharapkan, yang diamati oleh kekeruhan medium.

Batasan

-Media dehidrasi sangat higroskopis, sehingga harus dijauhkan dari kelembaban.

-Media tidak boleh digunakan jika semua jenis kerusakan diamati.

-Media kultur dehidrasi harus disimpan antara 10 - 35 ° C

-Media yang disiapkan harus disimpan dalam lemari es (2-8 ° C).

Referensi

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. Teknik untuk Analisis Mikrobiologi Makanan. 2009, edisi ke-2. Fakultas Kimia UNAM. Mexico. Versi untuk Administrator Manual dan Dokumen (AMyD) Fakultas Kimia UNAM 1. Tersedia di: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratorium Britannia. Air pepton yang dihancurkan. 2015. Tersedia di: britanialab.com
3. Laboratorium Neogen. Air pepton. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
4. Laboratorium Britannia. Air pepton. 2015. Tersedia di: britanialab.com
5. Laboratorium Merck. Air pepton penyangga. Tersedia di: merckmillipore.com
6. Laboratorium Conda Pronadisa. Air pepton alkali. Tersedia di: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.