AGAR-AGAR HIJAU CERAH: ALASAN, PERSIAPAN, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The agar hijau brilian adalah media kultur padat dengan tingkat tinggi selektivitas. Ini digunakan secara eksklusif untuk isolasi strain dari genus Salmonella, namun ada beberapa pengecualian, seperti spesies typhi dan paratyphi yang tidak tumbuh pada media ini.

Pencarian genus Salmonella sering dilakukan pada sampel tinja, air atau makanan. Dalam pengertian ini, media ini bisa sangat berguna. Agar ini dibuat pada tahun 1925 oleh Kristensen, Lester dan Jurgens, kemudian dimodifikasi oleh Kauffmann.

Agar-agar hijau cerah. Koloni fermentasi dan non-fermentasi. Sumber: Pameran MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Lisensi Creative Commons.

Ini terdiri dari pluripeptones dari pencernaan peptik jaringan hewan dan pencernaan kasein pankreas, juga mengandung ekstrak ragi, natrium klorida, laktosa, sukrosa, merah fenol, hijau cerah dan agar-agar.

Hal ini ditandai dengan lingkungan yang agak tidak ramah bagi sebagian besar bakteri, mendukung pertumbuhan Salmonella, namun beberapa coliform mampu bertahan di dalamnya, berkembang dengan lemah.

Penting untuk dicatat bahwa genus Shigella dan baik Salmonella typhimurium maupun Salmonella paratyphi tidak tumbuh pada media ini. Oleh karena itu, jika ingin mengisolasi mikroorganisme tersebut, sebaiknya gunakan media lain seperti agar XLD.

Dasar

Agar-agar hijau cerah

Setiap komponen penyusun media tersebut memiliki fungsi khusus yang menentukan sifat dan sifat agar-agar.

Pluripeptones dan ekstrak ragi adalah sumber nutrisi dimana mikroorganisme mengambil nitrogen dan mineral yang diperlukan untuk perkembangannya. Laktosa dan sukrosa merupakan sumber energi bagi mikroorganisme yang mampu melakukan fermentasi.

Hijau cerah adalah zat penghambat yang mencegah pertumbuhan bakteri Gram positif dan sejumlah besar mikroorganisme Gram negatif.

Natrium klorida memberikan stabilitas osmotik ke media. Sementara fenol merah adalah indikator pH, warnanya berubah saat mendeteksi produksi asam dari fermentasi karbohidrat.

Koloni laktosa dan sukrosa yang tidak berfermentasi tumbuh pada media ini dalam warna putih merah muda atau transparan, dengan latar belakang merah. Misalnya bakteri dari genus Salmonella.

Sedangkan bakteri pemfermentasi laktosa atau sukrosa yang mampu tumbuh pada media ini mengembangkan koloni kuning-hijau atau kuning-hijau dengan latar belakang kuning-hijau. Misalnya Escherichia coli dan Klebsiella pneumoniae.

Varian agar hijau cerah (BGA)

Ada varian lain dari agar-agar hijau cerah; Agar Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) dan Agar Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL).

Agar Glukosa Hijau Terang Novobiocin

Mengandung Agar Kedelai Trypticase, Ferric Ammonium Citrate, Sodium Thiosulfate Pentahydrate, Phenol Red, Glucose, Bright Green, Novobiocin, and Distilled Water.

Ini digunakan untuk isolasi koloni Salmonella dari sampel tinja.

Dalam hal ini, hijau terang dan novobiocin merupakan zat penghambat yang mencegah pertumbuhan bakteri Gram positif dan beberapa mikroorganisme Gram negatif.

Natrium tiosulfat adalah sumber sulfida dan besi sitrat adalah sumber besi, keduanya diperlukan untuk mengungkapkan produksi hidrogen sulfida melalui pembentukan endapan sulfida besi hitam.

Glukosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi dan merah fenol adalah indikator pH.

Pada medium ini, koloni Salmonella berkembang menjadi besar dengan pusat berwarna hitam dikelilingi lingkaran kemerahan dan diikuti oleh daerah yang terlihat jelas. Beberapa strain Citrobacter freundii menghasilkan koloni yang identik dengan Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Media ini mengandung agar kedelai trypticase, besi amonium sitrat, natrium tiosulfat, laktosa, gliserol, hijau terang, novobiocin, dan air suling.

Perbedaan antara media ini dengan media sebelumnya adalah glukosa yang digantikan oleh laktosa dan gliserol dan fenol merah tidak digunakan.

Media juga digunakan untuk mengisolasi spesies Salmonella, koloni berkembang menjadi hitam, karena produksi hidrogen sulfida.

Hanya koloni yang tidak menghasilkan asam dari gliserol atau laktosa mencapai memadai H ₂ S produksi , karena rendah ikut campur pH dengan H ₂ S formasi . Hasil ini di koloni berwarna untuk sebagian besar spesies Proteus dan Citrobacter.

Persiapan

-Timbang 58 gram media dehidrasi yang diperoleh secara komersial. Tambahkan ke satu liter air yang dialirkan ulang. Campur, diamkan beberapa menit, dan letakkan di atas sumber panas hingga benar-benar larut.

-Autoclave pada 121 ° C selama 15 menit, jangan melebihi waktu sterilisasi.

-Biarkan istirahat dan sajikan selagi panas dalam cawan petri steril. PH akhir harus 6,9 ± 0,2.

-Biarkan mengeras dan simpan di lemari es sampai digunakan. Sebelum penyemaian, piring harus mengukur suhu kamar.

-Media bubuk berwarna hijau dan disiapkan mengambil warna oranye-coklat atau hijau kemerahan, tergantung pada pH dan perusahaan komersial. Warna yang sangat coklat menunjukkan bahwa agar-agar terlalu panas.

-Setelah agar-agar memadat, tidak disarankan untuk menyusun kembali, karena medianya memburuk.

Penggunaan / aplikasi

Media ini digunakan untuk mencari strain genus Salmonella dari sampel tinja dan makanan olahan susu, antara lain.

Karena ini adalah lingkungan yang agak tidak ramah, disarankan untuk menanam inokulum yang melimpah jika sampel langsung digunakan. Jika tidak, sebaiknya dilakukan pra-pengayaan dan pengayaan spesimen sebelum disemai di media ini.

Karena beberapa strain Salmonella terhambat atau tumbuh dengan susah payah, disarankan untuk menyertai media ini dengan agar selektif lain untuk Salmonella.

Setiap koloni dengan karakteristik Salmonella yang khas harus menjalani uji biokimia untuk identifikasi definitifnya.

QA

Untuk menguji performansi media agar-agar hijau terang yang baik, strain ATCC dapat digunakan untuk mengamati perkembangannya.

Strain yang paling sering digunakan untuk pengendalian kualitas adalah: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

3 yang pertama harus memberikan koloni putih merah muda atau transparan dengan latar belakang merah. Salmonella dengan perkembangan yang baik dan Proteus dengan pertumbuhan sedikit atau teratur.

Untuk Klebsiella dan Escherichia, koloni kuning-hijau dengan latar belakang kuning diharapkan dan dalam kasus Shigella dan Staphylococcus mereka harus dihambat.

Media dehidrasi harus disimpan pada suhu kamar, di tempat yang kering, karena medianya sangat higroskopis.

Referensi

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Agar-agar Ramah Lingkungan. 2009
2. Laboratorium Britannia. Agar-agar Hijau Cerah. 2015.
3. Laboratorium BD. Agar-agar BD Brilliant Green. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA