TSI AGAR: ALASAN, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The TSI agar atau tiga iron agar gula adalah medium padat yang berfungsi sebagai sebuah uji biokimia untuk memandu identifikasi awal Gram negatif basil. Ini didasarkan pada pertunjukan fermentasi gula yang ada, dan produksi hidrogen sulfida dan gas.

Komposisi dan dasarnya sangat mirip dengan uji besi Kligler, dengan perbedaan bahwa uji besi Kligler hanya mengandung glukosa dan laktosa. Sebaliknya, seperti tersirat dalam namanya, agar besi tiga gula mengandung tiga karbohidrat yang dapat difermentasi: glukosa, laktosa, dan sukrosa.

Gambar uji TSI dengan mikroorganisme berbeda A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Sumber: Witmadrid, dari Wikimedia Commons

Selain itu, media TSI memiliki empat turunan protein yang membuatnya menjadi agar yang sangat bergizi: ekstrak ragi, ekstrak daging, pepton, dan pepton proteosa. Ini juga mengandung besi amonium sulfat, natrium tiosulfat, natrium klorida, merah fenol, dan agar.

Ketidakmampuan mikroorganisme untuk memfermentasi glukosa yang ada di media segera mengeluarkannya dari keluarga Enterobacteriaceae. Oleh karena itu, pengujian ini penting untuk menentukan jalur identifikasi mana yang akan diambil untuk menentukan genus dan spesies.

Setiap laboratorium memutuskan apakah akan bekerja dengan agar TSI atau dengan agar besi Kligler.

Dasar

Setiap senyawa memenuhi fungsi di dalam medium.

Natrium klorida dan agar

Natrium klorida diperlukan untuk menjaga keseimbangan osmotik media. Sedangkan agar-agar memberikan konsistensi padat.

Indikator PH (merah fenol)

PH media yang disiapkan seimbang pada 7,3 dan indikator pH (merah fenol) berubah menjadi kuning di bawah 6,8. Artinya, sedikit asam yang dihasilkan oleh fermentasi gula akan mengubah medium dari merah-jingga menjadi kuning.

Jika tidak terjadi fermentasi maka akan terjadi alkalinisasi medium melalui penggunaan pepton, berubah dari merah-jingga menjadi merah kuat.

Turunan protein (ekstrak ragi, ekstrak daging, pepton dan pepton proteosa)

Ketika bakteri memetabolisme protein yang ada dalam agar TSI, amina diproduksi yang membuat medium menjadi basa (terutama pada tingkat bevel), karena reaksinya membutuhkan oksigen. Amina mengubah bezel menjadi merah cerah.

Tetapi ini akan tergantung pada kemampuan bakteri untuk memfermentasi karbohidrat atau tidak.

Fermentasi karbohidrat (glukosa, laktosa dan sukrosa)

Studi tentang fermentasi gula dapat memberikan beberapa gambar dan masing-masing diartikan berbeda. Interpretasi tes membagi mikroorganisme menjadi 3 kategori: non-fermentor glukosa, non-fermentor laktosa, dan fermentor laktosa / sukrosa.

Perlu diperhatikan bahwa jumlah glukosa dalam medium dibatasi, sedangkan konsentrasi laktosa dan sukrosa 10 kali lebih tinggi.

Bakteri dari Famili Enterobacteriaceae dan mikroorganisme pemfermentasi glukosa lainnya akan mulai memfermentasi gula ini karena merupakan karbohidrat paling sederhana untuk energi.

Di sisi lain, laktosa dan sukrosa adalah karbohidrat kompleks yang harus dipecah dan diubah menjadi glukosa agar bisa memasuki siklus Embden-Meyerhof.

-Mikroorganisme yang tidak memfermentasi glukosa

Ketika mikroorganisme yang diinokulasi tidak dapat memfermentasi glukosa, apalagi dapat memfermentasi karbohidrat lain. Oleh karena itu, tidak ada asam yang terbentuk di sini, tetapi ada pembentukan amina di bevel dengan menggunakan pepton.

Dalam hal ini bezel berubah menjadi merah lebih kuat dan bagian bawah tabung mungkin tetap tidak berubah atau mungkin juga mengalami alkali, meninggalkan seluruh tabung berwarna merah.

Interpretasi: K / K berarti bevel alkaline / alkaline atau dasar netral

Pada gambar di awal artikel lihat gambar tabung D.

Hasil ini menunjukkan bahwa mikroorganisme tersebut bukan termasuk famili Enterobacteriaceae.

-Mikroorganisme yang tidak memfermentasi laktosa / sukrosa

Jika bakteri dapat memfermentasi glukosa tetapi tidak dapat memfermentasi laktosa atau sukrosa, hal berikut akan terjadi:

Bakteri akan mengkonsumsi semua glukosa yang ada setelah kira-kira 6 sampai 8 jam, mampu mengasamkan bevel dan blok; artinya, agar-agar benar-benar menguning. Tetapi ketika glukosa habis dan laktosa serta sukrosa tidak dapat digunakan, bakteri akan memulai metabolisme protein.

Reaksi ini membutuhkan oksigen, oleh karena itu degradasi pepton terjadi di permukaan (bevel). Amina yang dihasilkan membuat bingkai berubah menjadi basa dari kuning menjadi merah. Reaksi ini dibuktikan setelah 18 hingga 24 jam inkubasi.

Interpretasi: K / A berarti bevel alkali dan gumpalan asam.

Pada gambar di awal artikel lihat gambar tabung B.

-Mikroorganisme fermentasi laktosa / sukrosa

Mikroorganisme yang mampu memfermentasi laktosa dan sukrosa jelas dapat memfermentasi glukosa. Setelah jumlah minimum glukosa yang ada dalam medium habis, piruvat yang terbentuk mulai bermetabolisme membentuk asam melalui siklus Krebs aerobik, dan dalam periode 8 hingga 12 jam semua medium akan berwarna kuning.

Jika bakteri mampu memecah laktosa atau sukrosa, asam akan terus diproduksi, dan setelah 18 hingga 24 jam seluruh tabung - bevel dan sumbat - akan terus menguning.

Perlu dicatat bahwa penggunaan glukosa dilakukan dengan dua cara: satu secara aerob di bevel tabung, dan yang lainnya secara anaerob di bagian bawah tabung.

Interpretasi: A / A berarti bevel asam / acid bottom. Ini mungkin atau mungkin tidak memiliki gas.

Pada gambar di awal artikel lihat gambar tabung A.

Produksi gas

Beberapa mikroorganisme mampu menghasilkan gas selama fermentasi gula. Gas dibuktikan di dalam tabung dengan tekanan yang diberikan di dalam agar. Tekanan menyebabkan pembentukan gelembung atau perpindahan agar-agar. Terkadang pembentukan gas dapat memecah medium.

Hal yang penting adalah pada saat penyemaian media TSI, tusukan dilakukan secara bersih melalui bagian tengah agar-agar hingga mencapai dasar. Jika tusukan dialihkan ke dinding tabung, ini dapat menyebabkan positif palsu dalam produksi gas, karena akan keluar melalui saluran yang salah bentuk.

Produksi gas, serta reaksi yang terjadi pada bevel agar-agar membutuhkan oksigen, oleh karena itu disarankan agar tabung ditutup dengan sumbat kapas, dan jika menggunakan tutup Bakelite, tidak boleh benar-benar kencang.

Produksi gas dilaporkan sebagai positif (+) atau negatif (-).

Pola pembentukan gas. Sumber: Skema dibuat oleh MSc. Marielsa Gil. Sumber gambar: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, melalui Wikimedia Commons

Natrium tiosulfat dan besi amonium sulfat

Bakteri yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tak berwarna) mengambil sulfur dari natrium tiosulfat yang ada di dalam medium. Setelah H ₂ S terbentuk, ia bereaksi dengan besi amonium sulfat, menghasilkan besi sulfida (endapan hitam yang terlihat jelas).

Produksi H ₂ S dilaporkan sebagai positif (+) atau negatif (-).

Pada gambar di awal artikel lihat gambar tabung C.

Persiapan

Timbang 62,5 g medium agar-agar besi gula tiga lapis (TSI) dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling.

Panaskan sampai agar-agar benar-benar larut. Rebus sebentar sambil diaduk. Bagikan 4 ml media ke dalam 13/100 tabung reaksi dengan tutup kapas.

Sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit. Keluarkan dari autoclave dan biarkan miring. Berhati-hatilah agar alas dan bezel memiliki jarak yang sama.

Simpan di lemari es 2-8 ° C. Biarkan hangat sebelum menabur strain bakteri.

Warna media dehidrasi adalah krem ​​muda dan media yang disiapkan berwarna merah-oranye.

PH akhir dari media yang disiapkan adalah 7,3 ± 0,2.

Aplikasi

Tes TSI banyak digunakan di tingkat laboratorium mikrobiologi. Tes ini penting untuk memandu jenis tes yang harus diterapkan untuk mencapai identifikasi marga dan spesies. Eksekusi dan interpretasinya yang baik dapat menghemat material dan tenaga kerja.

Jika hasilnya adalah TSI K / K dan uji sitokrom oksidase positif, diketahui bahwa tes harus digunakan untuk mengidentifikasi batang Gram negatif non-fermentasi, seperti Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, di antara genera lainnya. Jika oksidase negatif, ia berorientasi pada genera Acinetobacter, Stenotrophomonas, dll.

Sebaliknya, jika diperoleh TSI A / A atau K / A dan uji sitokrom oksidase negatif, semakin banyak nitrat yang tereduksi menjadi nitrit, dapat dipastikan itu adalah mikroorganisme yang termasuk dalam famili Enterobacteriaceae. Dalam kasus ini, jalur identifikasi akan difokuskan pada tes khusus untuk kelompok bakteri ini.

Sebaliknya, jika diperoleh citra K / A atau A / A dan uji sitokrom oksidase positif, uji tambahan yang akan dilakukan akan ditujukan untuk mengidentifikasi strain fermentasi yang tidak termasuk famili Enterobacteriaceae, seperti: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio dan Pasteurella.

TSI dengan hidrogen sulfida, oksidase negatif, akan memandu identifikasi genera berikut dari Keluarga Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella atau Salmonella.

TSI dengan sedikit atau sedang hidrogen sulfida dalam bevel alkali dengan latar belakang alkali dan oksidase positif akan memandu penggunaan tes untuk identifikasi batang Gram-negatif penghasil H ₂ S non-fermentasi , seperti Shewanella putrefaciens.

Akhirnya, TSI dapat digunakan untuk penyelidikan produksi hidrogen sulfida pada basil Gram positif, terutama bila diduga Erysipelothrix rhusiopathiae.

Ditabur

Media TSI harus diinokulasi dengan koloni murni, diisolasi dalam kultur primer atau selektif. Jika koloni diambil dari media selektif yang disemai dengan sampel dengan flora campuran, perhatian harus dilakukan hanya dari permukaan, karena strain yang dapat hidup dihambat dalam media tersebut mungkin ada di bagian bawah koloni.

Oleh karena itu, loop tidak boleh didinginkan pada media selektif dan kemudian koloni diambil dan diinokulasi dengan media TSI.

Penaburan akan dilakukan dengan putaran atau jarum yang lurus. Dilakukan tusukan dengan hati-hati melalui bagian tengah tengah hingga mencapai dasar, kemudian penaburan selesai dengan cara menyuntikkan permukaan secara zigzag. Jangan lakukan dua tusukan.

Inkubasi pada 37 ° C dalam aerobiosis selama 18-24 jam. Interpretasikan saat ini, baik sebelum maupun sesudah.

Batasan

Tes TSI harus dibaca dalam waktu 18 hingga 24 jam setelah inkubasi. Pembacaan sebelum waktu ini dapat memberikan positif palsu untuk fermentasi A / A. Padahal, pembacaan setelah waktu ini dapat menimbulkan citra negatif palsu non-fermentor, karena konsumsi pepton yang membuat media menjadi alkali.

Referensi

1. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. "TSI agar." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 10 Jul 2018, 08:09 UTC. 10 Feb 2019, 03:33 Tersedia di: es.wikipedia.org
5. Laboratorium Britannia. TSI Agar (Triple sugar iron agar). 2015. Tersedia di: britanialab.com
6. Laboratorium BD. Triple sugar iron agar (TSI Agar). 2003. Tersedia di: bd.com