The TCBS agar adalah sarana budaya yang solid sangat selektif dan diferensial, digunakan untuk isolasi dan budidaya bakteri dari genus Vibrio, terutama Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus dan V. vulnificus sebagai patogen utama dari jenis ini.
Akronim TCBS adalah singkatan dari tiosulfat sitrat empedu sukrosa. Agar ini juga dikenal sebagai media selektif untuk Vibrios. Formula asli dibuat oleh Nakanishi dan kemudian dimodifikasi oleh Kobayashi.
Medium TCBS komersial dan pelat agar TCBS diunggulkan dengan Vibrio cholerae. Sumber: foto 1: diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India
Ini terdiri dari ekstrak ragi, pepton daging, triptein, natrium sitrat, natrium tiosulfat, empedu sapi, sukrosa, natrium klorida, besi sitrat, biru bromotimol, biru timol dan agar.
Komposisi ini memungkinkan perkembangan spesies Vibrio yang memadai dari sampel air, makanan, dan feses; kecuali Vibrio hollisae, yang tidak tumbuh di media ini. Selain itu, media TCBS mampu menghambat pertumbuhan bakteri pendamping lainnya, terutama koliform.
Karena masalah gastrointestinal dan ekstra-intestinal yang serius yang disebabkan oleh beberapa spesies dari genus Vibrio, diagnosisnya sangat penting. Manusia terutama terinfeksi dengan makan makanan mentah atau setengah matang dari laut atau air yang tercemar, tetapi juga melalui infeksi luka.
Oleh karena itu, laboratorium klinis harus menyertakan agar TCBS dalam studi kultur feses sampel feses cair, terutama dengan munculnya air beras. Apalagi jika pasien melaporkan pernah kontak dengan air laut atau pernah mengonsumsi kerang atau ikan.
Dasar
Ekstrak ragi, pepton daging, dan triptein adalah sumber nutrisi media ini. Namun, agar TCBS adalah media yang tidak ramah bagi kebanyakan bakteri.
Selektivitasnya yang tinggi diberikan dengan penambahan natrium sitrat dan empedu sapi; keduanya adalah agen penghambat yang juga memberikan pH basa pada medium, membatasi pertumbuhan flora yang menyertainya dan mendukung pertumbuhan V. cholerae, di antara spesies lainnya. Perlu dicatat bahwa Vibrio cholerae sangat sensitif terhadap keasaman.
Untuk bagiannya, natrium klorida secara osmotik menyeimbangkan media. Selain itu, karena konsentrasinya yang tinggi, ia juga bertindak sebagai agen penghambat, mendukung pertumbuhan bakteri halofilik.
Sukrosa adalah gula yang dapat difermentasi, bersama dengan indikator pH biru bromotimol dan biru timol, memberikan karakter diferensial pada medium. Untuk alasan ini, dengan media ini dimungkinkan untuk membedakan strain sukrosa yang difermentasi dari yang tidak difermentasi.
Koloni strain fermentasi sukrosa berkembang menjadi kuning dan akan mengubah medium dari hijau menjadi kuning karena produksi asam. Non-fermentor tumbuh tembus cahaya dan medianya tetap berwarna asli (hijau).
Demikian juga media ini mengandung natrium tiosulfat sebagai sumber belerang dan besi sitrat sebagai zat pembangun. Keduanya menunjukkan bakteri yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tak berwarna). H 2 S terbentuk dari tiosulfat dan selanjutnya setelah bereaksi dengan besi sitrat membentuk endapan hitam yang terlihat.
Terakhir, agar-agar yang memberikan konsistensi padat pada media.
Persiapan
Timbang 89 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Bantu pelarutan dengan memanaskan dan sering mengaduk. Campuran tersebut bisa direbus hingga 2 menit.
Media ini tidak diautoklaf. Setelah larut disajikan langsung di piring steril. Saat mengeras, mereka disusun secara terbalik pada trombosit dan disimpan di lemari es (2-8 ° C) sampai digunakan.
Media setelah pembuatan harus tetap pada pH 8,6 ± 0,2.
Warna media dehidrasi adalah krem muda atau krem kehijauan, dan warna medianya hijau hutan atau hijau kebiruan.
Penting untuk membiarkan pelat memanas sebelum menyemai sampel.
Menggunakan
Spesimen yang paling umum untuk isolasi Vibrios adalah feses diare.
Sampel feses, jika tidak dapat segera disemai pada media selektif, harus diangkut pada media Cary Blair.
Untuk meningkatkan kepekaan kultur, feses dapat dialirkan melalui air pepton pada pH 8,4 sebagai media pengayaan maksimal 8 jam, kemudian disubkultur ke media TCBS.
Juga harus diperhatikan bahwa beberapa strain Vibrios dapat menyebabkan septikemia pada pasien yang mengalami imunosupresi, oleh karena itu dapat diisolasi dari kultur darah. Demikian pula sampel air dan makanan dari laut dapat dianalisis saat terjadi wabah penyakit kolera.
Ditabur
Inokulum sampel penelitian harus menonjol, penaburan dilakukan dengan metode striasi dengan cara kelelahan. Pelat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.
Koloni dugaan Vibrio cholerae berukuran sedang, halus, buram, dengan pinggiran tipis dan berwarna kuning akibat fermentasi sukrosa.
Spesies V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii dan beberapa V. vulnificus tumbuh dengan cara yang sama. Spesies Vibrios penting lainnya secara klinis seperti V. parahaemolyticus tidak memfermentasi sukrosa, berkembang sebagai koloni hijau zaitun.
Plat agar TCBS diunggulkan dengan Vibrio parahaemolyticus. Sumber: isis325 Flickr
Di sisi lain, harus diingat bahwa beberapa strain Aeromonas dan Plesiomonas yang bersifat oksidase (+) dapat tumbuh dalam media ini, mengembangkan koloni kuning yang dapat membingungkan klinisi. Sedangkan beberapa strain Pseudomonas juga oksidase (+) tumbuh sebagai koloni hijau seperti V. parahaemolyticus.
Keterbatasan
Uji oksidase yang positif untuk genus Vibrio tidak boleh dilakukan dari koloni yang diperoleh dari agar TCBS, karena hasil yang diperoleh bernilai negatif palsu. Senyawa di tengah sangat mengganggu pengujian ini. Oleh karena itu, harus dibuat dari subkultur pada agar darah.
QA
Untuk membuktikan bahwa media dalam kondisi baik, disarankan untuk menabur strain kontrol yang diketahui atau bersertifikat, dan mengamati apakah pertumbuhannya memenuhi karakteristik yang diharapkan.
Untuk ini, Anda dapat menggunakan alunan:
-Vibrio cholerae -– pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning, batas tembus cahaya).
-Vibrio parahaemolyticus --– pertumbuhan yang memuaskan (koloni dengan pusat hijau dan batas tembus cahaya).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning dengan lingkaran cahaya dengan warna yang sama di sekitar koloni).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - penghambatan total atau parsial (koloni kuning kecil atau tembus cahaya).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853-– penghambatan parsial atau total (koloni biru).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Benar-benar terhambat.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Penghambatan total atau parsial. (Koloni kecil batas tembus tengah hijau).
Inkubasi media yang tidak diinokulasi harus tidak berubah.
Referensi
- Laboratorium Difco Francisco Soria Melguizo. TCBS agar. 2009. Tersedia di: f-soria.es
- Laboratorium BD. BD. TCBS Agar 2003. Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Britannia. TCBS Medium. 2015. Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Acumedia. TCBS Agar. 2016. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.