AGAR KEDELAI TRIPTIKASEIN: ALASAN, PERSIAPAN, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The kedelai agar tryptone atau Trypticase Soy Agar adalah medium kultur yang solid, dan nonselektif gizi. Ini ditunjuk oleh huruf TSA untuk akronimnya dalam Bahasa Inggris Trypticase Soy Agar. Ini terdiri dari triptein, pepton kedelai, natrium klorida, dan agar-agar.

Karena kekuatan nutrisinya yang tinggi, sangat ideal untuk budidaya mikroorganisme yang sedang dan tidak banyak menuntut. Media tanpa suplemen tambahan tidak direkomendasikan untuk kultur primer, tetapi sangat berguna untuk mensubkultur galur murni dan menjaganya tetap hidup, di antara kegunaan lainnya.

Agar-agar kedelai triptikasein dipotong dalam tabung dengan tutup bakelite. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.

Juga, agar ini berfungsi sebagai dasar untuk pembuatan media yang diperkaya seperti agar darah, terutama bila diperlukan untuk mengamati pola hemolisis dan untuk memasang taksa optoquine dan basitracin, yang diperlukan dalam diagnosis Streptococcus pneumoniae dan Streptococcus pyogenes.

Di sisi lain, bila dikombinasikan dengan antibiotik, berguna untuk mengisolasi mikroorganisme fakultatif dan ketat anaerobik penting secara klinis dari sampel dengan flora campuran.

Akhirnya, komposisi agar kedelai trypticasein dan kinerjanya memenuhi persyaratan yang ditetapkan oleh farmakope yang berbeda (Eropa, Jepang dan Amerika Utara).

Dasar

Untuk perkembangan bakteri yang tepat, diperlukan adanya pasokan energi, seperti asam amino, vitamin, purik dan basa pirimida.

Dalam pengertian ini, triptein dan pepton kedelai memberikan nutrisi ini kepada mikroorganisme, sehingga memungkinkan perkembangan penuh mereka. Namun, untuk bakteri yang rewel, perlu untuk melengkapi agar-agar ini dengan darah yang didefibrinasi atau darah yang dihangatkan untuk meningkatkan pengayaannya.

Di sisi lain, jika antibiotik ditambahkan ke media, itu menjadi media selektif. Ekstrak ragi 0,6% juga dapat ditambahkan untuk mendukung isolasi spesies dari genus Listeria, sedangkan penambahan cystine tellurite dan darah domba sangat ideal untuk Corynebacterium diphteriae.

Akhirnya, natrium klorida memberikan keseimbangan osmotik ke media dan agar-agar memberikan konsistensi padat.

Persiapan

Pelat Agar Kedelai Trypticasein

Untuk menyiapkan agar kedelai trypticasein, 40 g media komersial dehidrasi harus ditimbang dalam skala digital. Itu dilarutkan dalam satu liter air suling yang terkandung dalam labu.

Campuran didiamkan selama 5 menit dan kemudian dibawa ke sumber panas untuk membantu melarutkan medium. Ini harus sering diaduk dan direbus selama 1 hingga 2 menit. Selanjutnya media disterilkan dalam autoclave dengan suhu 121 ° C selama 15 menit.

Biarkan dingin hingga 50 ° C dan distribusikan ke dalam cawan Petri steril. Biarkan mengeras, terbalik, pesan dalam plaqueros dan simpan di lemari es.

PH akhir media harus 7,3 ± 0,2.

Perlu dicatat bahwa warna media kultur dehidrasi adalah krem ​​muda dan harus disimpan antara 10 hingga 35 ° C, di tempat yang kering.

Untuk bagiannya, agar yang disiapkan berwarna kuning muda. Piring yang sudah disiapkan harus disimpan di lemari es (2-8 ° C) sampai digunakan.

Pelat harus mencapai suhu ruangan sebelum digunakan.

Piring agar kedelai triptikasein dilengkapi dengan darah

Agar darah dibuat dengan menambahkan darah yang didefibrinasi 5% pada saat mendinginkan agar kedelai trypticasein hingga 50 ° C. Campuran dihomogenisasi dengan memutar dengan gerakan lembut.

Sajikan dalam cawan Petri steril. Warna tengah harus merah ceri.

Piring agar kedelai triptikasein dilengkapi dengan darah hangat

Untuk menyiapkan agar darah berbasis TSA, lakukan prosedur yang sama seperti yang telah dijelaskan, tetapi ketika meninggalkan autoklaf dibiarkan diam sampai suhu medium kira-kira antara 56 hingga 70 ° C. Saat itu darah ditempatkan dan diaduk sampai medium berubah warna menjadi coklat.

Sajikan dalam cawan Petri steril. Warna mediumnya coklat coklat.

Wedges Agar Kedelai Trypticasein

Prosedur pembuatan agar-agar sama seperti yang dijelaskan untuk cawan, dengan perbedaan bahwa media tersebut tidak disajikan di atas cawan Petri, melainkan didistribusikan antara 10 hingga 12 ml dalam tabung dengan tutup Bakelite sebelum disterilkan.

Selanjutnya, tabung diautoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Ketika mereka pergi, mereka cenderung dengan bantuan dukungan dan dibiarkan menjadi kuat.

Irisan yang telah disiapkan ditaburkan menurut luas permukaan dan berfungsi untuk menjaga mikroorganisme tertentu yang tidak menuntut tetap hidup untuk waktu tertentu.

Aplikasi

Trypticasein Soy Agar digunakan dalam kasus-kasus berikut:

-Sebagai bahan dasar untuk menyiapkan agar darah klasik yang digunakan secara rutin di sebagian besar laboratorium.

-Isolasi bakteri yang menuntut.

-Pengamatan pola hemolisis.

-Pelaksanaan tes diagnostik.

-Sebagai dasar untuk menyiapkan agar darah khusus untuk Corynebacterium diphteriae, dengan telurit sistin dan darah domba.

-Sebagai bahan dasar pembuatan agar darah domba, ditambah kanamycin-vancomycin untuk pertumbuhan anaerob khususnya Bacteroides sp.

- Untuk pemeliharaan strain yang tidak menuntut (Bacterioteca).

- Jumlah mikroba aerobik dalam studi batas mikroba air, lingkungan, makanan dan sampel kosmetik.

Ditabur

Sampel dapat ditaburkan langsung ke permukaan Agar Kedelai Trypticasein yang dilengkapi dengan darah atau zat aditif lainnya. Itu ditaburkan oleh kelelahan.

Sedangkan plat agar kedelai trypticasein tanpa bahan tambahan umumnya digunakan untuk subkultur mikroba strain (bakteri atau ragi).

QA

Kontrol sterilitas

Untuk memeriksa sterilitas dari berbagai media yang dibuat dengan trypticasein soy base agar, berikut ini direkomendasikan: dari setiap batch yang disiapkan, 1 atau 2 piring atau tabung yang tidak diinokulasi harus diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam untuk menunjukkan sterilitasnya. Dalam semua kasus itu harus tetap tanpa pertumbuhan.

Jika kontaminasi ditemukan, seluruh bets harus dibuang.

Kontrol pertumbuhan

Strain bakteri berikut dapat digunakan untuk mempelajari fungsi agar trypticasein soy agar: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 dan Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Strain disemai dan diinkubasi secara aerob pada suhu 37 ° C selama 24 jam.

Dalam semua kasus, pertumbuhan harus memuaskan.

Dapat juga digunakan jamur seperti Candida albicans Complex ATCC 10231 dan Aspergillus niger ATCC 16404. Kedua strain tersebut diharapkan tumbuh baik.

Kontrol pertumbuhan dan pola hemolisis agar kedelai trypticasein ditambah dengan darah

Untuk memverifikasi berfungsinya agar darah yang dibuat dengan basis ini, strain berikut dapat digunakan: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 dan Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Mereka diunggulkan dan diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam mikroaerofilisitas selama 24 jam.

Dalam semua kasus, pertumbuhan harus memuaskan, dengan mempertimbangkan bahwa beta-hemolisis (cahaya halo di sekitar koloni) harus diamati pada S. pyogenes dan hemolisis alfa (lingkaran kehijauan di sekitar koloni) harus diamati pada kedua strain S. pneumoniae. koloni).

Referensi

1. Kontributor Wikipedia. Trypticase I am agar. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 17 Desember 2018, 15:47 UTC. Tersedia di: https://en.wikipedia.org
2. Laboratorium Britannia. Agar kedelai triptein. 2015. Tersedia di: britanialab.com
3. Laboratorium Neogen. Agar kedelai tryptic. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
5. Laboratorium BD. Trypticase Saya Agar. 2014. Tersedia di: .bd.com