SABOURAUD AGAR: ALAS BEDAK, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The agar Sabouraud , juga dikenal sebagai Sabouraud Dextrose Agar, adalah media padat, terutama diperkaya untuk isolasi dan pengembangan jamur, seperti ragi, jamur dan dermatofita.

Oleh karena itu, media ini tidak boleh kekurangan di laboratorium mikrobiologi untuk menyelidiki keberadaan jamur patogen atau oportunistik, baik dari sampel klinis maupun non klinis. Selain itu, ini juga ideal untuk pertumbuhan bakteri berfilamen seperti Streptomyces dan Nocardias. Penggunaannya sangat luas, karena dapat digunakan pada mikologi manusia, hewan, tumbuhan dan industri.

A. Agar Sabouraud yang tidak diunggulkan. B. Sabouraud agar diunggulkan dengan ragi. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa gil

Media ini dibuat pada tahun 1896 oleh dokter kulit terkemuka Raimond Sabouraud, yang menjadi spesialis gangguan kulit kepala yang terkenal di dunia, terutama yang disebabkan oleh dermatofita.

Pembuatannya sangat penting sehingga telah digunakan sejak saat itu dan tetap ada hingga saat ini, meskipun dengan beberapa modifikasi.

Walaupun khusus untuk jamur, bakteri dapat tumbuh pada media ini, oleh karena itu untuk sampel dengan flora campuran, diperlukan pencantuman antibiotik dalam sediaannya untuk menghambat pertumbuhan flora bakteri yang mungkin ada.

Pemilihan antibiotik harus dilakukan dengan hati-hati dan mempertimbangkan jenis jamur yang akan disembuhkan, karena beberapa di antaranya dihambat dengan adanya zat tertentu.

Dasar

Sabouraud dextrose agar adalah media yang dalam formulasi aslinya bersifat selektif lemah, karena pH asamnya 5,6 ± 0,2, namun bakteri masih dapat berkembang, terutama pada inkubasi yang berkepanjangan.

Mediumnya mengandung pepton kasein dan jaringan pencernaan hewan pankreas, yang menyediakan sumber karbon dan nitrogen untuk pertumbuhan mikroorganisme.

Ini juga mengandung konsentrasi glukosa tinggi, yang bertindak sebagai sumber energi, mendorong pertumbuhan jamur di atas bakteri. Semua ini dicampur dengan agar-agar, komponen yang membuatnya memiliki konsistensi yang tepat.

Di sisi lain, agar dekstrosa Sabouraud dapat menjadi selektif jika ditambahkan antibiotik.

Dengan antibiotik, ini sangat berguna dalam sampel luka, tukak terbuka atau sampel apa pun yang dicurigai terkontaminasi bakteri besar.

Kombinasi agar Sabouraud dekstrosa yang paling umum digunakan dengan antibiotik

-Saburaud agar dengan kloramfenikol: ideal untuk memulihkan ragi dan jamur berserabut.

- Agar Sabouraud dengan gentamisin dan kloramfenikol: hampir semua jamur dan khamir berserabut tumbuh di media ini, dan ia menghambat sejumlah besar bakteri, termasuk Enterobacteria, Pseudomonas dan Staphylococcus.

- Agar Sabouraud dengan cycloheximide: sangat berguna untuk sampel dari kulit atau saluran pernapasan, selama kecurigaannya adalah jamur dimorfik.

Cycloheximide harus digunakan dengan hati-hati; Meskipun digunakan untuk menghambat pertumbuhan jamur dan khamir non-patogen atau lingkungan yang mungkin terdapat sebagai kontaminan dalam sampel, ia juga menghambat pertumbuhan beberapa jamur seperti Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp dan jamur oportunistik lainnya.

- Agar Sabouraud dengan kloramfenikol plus sikloheksimida: digunakan terutama untuk mengisolasi dermatofita dan jamur dimorfik. Kekurangannya adalah menghambat beberapa spesies jamur oportunistik seperti Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes atau C. neoformans.

- Agar Sabouraud dengan kloramfenikol, streptomisin, penisilin G dan sikloheksimida: sangat ideal untuk sampel yang sangat terkontaminasi bakteri dan jamur saprofit, tetapi memiliki kelemahan yaitu menghambat pertumbuhan Actinomyces dan Nocardias, selain jamur oportunistik yang disebutkan di atas.

Persiapan

Jika Anda memiliki bahan secara terpisah, dapat disiapkan sebagai berikut:

Sabouraud dekstrosa agar

Menimbang:

- 40 gr dekstrosa

- 10 g pepton

- 15 gr agar-agar

- Takar 1000 ml air suling

Semua bahan dicampur, pH diatur menjadi 5,6. Zat terlarut dilarutkan dengan mendidih, 20 ml medium didistribusikan dalam tabung berukuran 25 x 150 mm, tanpa tepi dan lebih disukai dengan tutup kapas.

Tabung dengan tutup kapas. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa gil

Ukuran tabung lain juga dapat digunakan, tergantung ketersediaan.

Mereka diautoklaf selama 10 menit pada atmosfer tekanan (121 ° C). Waktu autoklaf tidak boleh dilampaui. Saat meninggalkan autoklaf, tabung dimiringkan dengan bantuan penyangga sampai mengeras menjadi paruh seruling.

Cara lainnya adalah dengan melarutkan bahan dengan cara memanaskannya hingga mendidih. Autoclave selama 10 menit dalam vial yang sama lalu distribusikan 20 ml dalam cawan petri.

Jika Anda memiliki media agar Sabouraud dekstrosa yang sudah mengandung semua bahan, lanjutkan menimbang jumlah yang ditentukan oleh perusahaan komersial untuk satu liter air. Langkah-langkah selanjutnya sama dengan yang dijelaskan di atas.

Sabouraud dextrose agar (modifikasi Emmons)

Menimbang:

- 20 gr dekstrosa

- 10 g pepton

- 17 gr agar-agar

- Takar 1000 ml air suling

Semua bahan dicampur, pH diatur menjadi 6,9. Lanjutkan dengan cara yang sama seperti kasus sebelumnya.

Ada rumah komersial yang menawarkan media dengan semua bahan. Dalam kasus ini, timbang dan persiapkan seperti yang dijelaskan pada sisipan.

Sabouraud dextrose agar (modifikasi Emmons) dengan kloramfenikol

Larutan Stok Kloramfenikol

- Timbang 500 mg basis kloramfenikol

- Takar 100 ml etanol 95%

- Campur

Media agar Sabouraud dekstrosa (Emmons) disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya dan sebagai tambahan untuk setiap liter media tambahkan 10 ml larutan stok kloramfenikol sebelum diautoklaf.

Sabouraud Emmons Dextrose Agar dengan Cycloheximide

Larutan Stok Cycloheximide

- Timbang 5 gr sikloheksimida

- Takar 100 ml aseton

- Campur

Media agar Sabouraud dekstrosa (Emmons) disiapkan seperti yang telah dijelaskan dan sebagai tambahan untuk setiap liter media tambahkan 10 ml larutan stok sikloheksimida sebelum diautoklaf.

Sabouraud dextrose agar (Emmons) dengan kloramfenikol dan sikloheksimida

Media agar Sabouraud dekstrosa (Emmons) disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya dan sebagai tambahan untuk setiap liter media tambahkan 10 ml larutan stok kloramfenikol dan 10 ml larutan stok sikloheksimida sebelum diautoklaf.

Antibiotik lain yang bisa ditambahkan

20.000 hingga 60.000 unit penisilin per liter media.

30 mg streptomisin per liter media.

Keduanya harus digabungkan setelah media diautoklaf, sedikit didinginkan (50-55 ° C).

0,04 g neomisin per liter media.

0,04 g gentamisin per liter media.

Pertimbangan khusus

Untuk keamanan, lebih disukai menabur agar dekstrosa Sabouraud dalam tabung berbentuk baji (miring pada paruh seruling) daripada di cawan Petri, untuk menghindari penyebaran dan penghirupan spora.

Tabung agar Sabouraud harus ditutup dengan kapas dan bukan dengan tutup ulir, karena kondisi semi-anaerob telah terbukti menghambat pembentukan spora pada beberapa galur, misalnya Coccidioides immitis. Juga, kebanyakan jamur bersifat aerobik.

Jika menggunakan tutup ulir, jangan tutup rapat.

QA

Media yang disiapkan harus menjalani kontrol kualitas untuk memverifikasi fungsinya dengan benar. Untuk ini, strain kontrol tertentu ditanam.

Untuk agar Sabouraud dekstrosa dengan kloramfenikol, strain ATCC dari Candida albicans dapat digunakan, yang harus memiliki pertumbuhan yang sangat baik. Piring lain diinokulasi dengan strain Escherichia coli, yang harus dihambat sepenuhnya.

Piring yang tidak diinokulasi juga diinkubasi di mana tidak ada mikroorganisme yang tumbuh.

Untuk agar Sabouraud dekstrosa dengan kloramfenikol dan sikloheksimida, strain Trichophyton mentagrophytes dapat digunakan, dan mereka akan berkembang dengan baik. Cawan lain diinokulasi dengan strain Aspergillus flavus, yang pertumbuhannya harus sedikit atau tidak sama sekali. Selain itu, pelat yang tidak diinokulasi diinkubasi untuk menunjukkan sterilitasnya.

Untuk agar Sabouraud dextrose dengan cycloheximide, strain Candida albicans, Trichophyton rubrum atau Microsporum canis digunakan, yang harus menunjukkan pertumbuhan yang baik.

Demikian juga, strain Aspergillus flavus disertakan, menunjukkan sedikit atau tidak ada pertumbuhan. Terakhir, inkubasi pelat yang tidak diinokulasi untuk mengontrol kemandulan.

Aplikasi

Budaya primer

Classic Sabouraud dextrose agar mengandung 4 gram dekstrosa dan sangat baik sebagai media isolasi primer, karena menunjukkan karakteristik morfologi dari masing-masing jamur.

Ini juga sangat baik untuk menunjukkan produksi pigmen. Namun, ini bukan cara terbaik untuk mengamati sporulasi.

Juga tidak dianjurkan untuk membudidayakan Blastomyces dermatitidis, yang dihambat oleh konsentrasi glukosa yang tinggi.

Di sisi lain, untuk penanaman pertimbangan tertentu harus diperhitungkan.

Beberapa jamur tumbuh paling baik pada suhu kamar, seperti kapang, yang lain tumbuh dengan sukses pada suhu 37 ° C, seperti beberapa khamir, dan yang lainnya dapat tumbuh pada kedua suhu tersebut (jamur dimorfik).

Untuk alasan ini, terkadang perlu menggunakan beberapa piring agar Sabouraud untuk sampel yang sama, karena penyemaian duplikat sering dilakukan untuk menginkubasi satu piring pada suhu kamar dan satu lagi pada 37 ° C.

Misalnya, Sporothrix schenckii ditaburkan dalam dua lempengan; satu diinkubasi pada suhu kamar untuk mendapatkan fase jamur dan yang lainnya diinkubasi pada suhu 37 ° C untuk mendapatkan fase ragi, tetapi pada yang terakhir perlu menambahkan 5% darah ke media.

Dalam kasus lain, seperti sampel misetoma, dua piring agar Sabouraud diunggulkan, satu dengan kloramfenikol dan yang lainnya dengan sikloheksimida. Yang pertama akan memungkinkan pertumbuhan agen penyebab misetoma yang berasal dari jamur (Eumycetoma) dan agen penyebab kedua dari misetoma yang berasal dari bakteri, seperti aktinomisetoma.

Sporulasi

Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar mengandung 2 gram dekstrosa dan digunakan tidak hanya untuk isolasi, tetapi juga untuk sporulasi dan pengawetan jamur.

Dalam media ini, strain dermatitidis Blastomyces dapat disembuhkan.

Konservasi

Untuk mengawetkan kultur jamur, dapat disimpan di lemari es (2-8 ° C). Waktu konservasi dapat bervariasi antara 2 hingga 8 minggu. Setelah itu, mereka harus disubkultur untuk mengulangi proses tersebut.

Beberapa jamur paling baik disimpan pada suhu kamar, seperti Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum, dan Microsporum audounii.

Pemeliharaan strain dapat diperpanjang untuk menghindari pleomorfisme jika dekstrosa benar-benar dikeluarkan dari agar-agar dan jika jumlah agar-agar dalam media dikurangi untuk menghindari kekeringan.

Budaya mikro

Untuk identifikasi beberapa jamur berfilamen, perlu dilakukan kultur mikro dengan menggunakan agar Sabouraud atau sarana khusus lainnya untuk mengamati struktur reproduksi seksual dan aseksual.

Dalam mikologi manusia

Ini digunakan terutama untuk diagnosis penyakit jamur, terutama yang mempengaruhi kulit dan keterikatannya (rambut dan kuku).

Sampel dapat berupa sekret, eksudat, kulit, rambut, kuku, dahak, CSF atau urine. Patogen yang sering diisolasi adalah dermatofita, jamur penyebab mikosis subkutan dan sistemik.

Mikologi hewan

Hewan sering terkena infeksi jamur, oleh karena itu agar Sabouraud berguna dalam mikologi hewan seperti halnya pada manusia.

Misalnya, dermatofita seringkali dapat menyerang hewan. Demikian halnya dengan Microsporum canis var distortum yang sering menginfeksi anjing, kucing, kuda, babi dan monyet. Demikian juga, Microsporum gypseum menginfeksi anjing, kucing dan ternak.

Burung seperti ayam, ayam jantan, dan ayam dipengaruhi oleh Microsporum gallinae.

Jamur lain, seperti Zymonema farciminosum, juga merupakan penyebab penyakit pada hewan, terutama pada kuda, bagal, dan keledai, menyebabkan peradangan yang signifikan pada pembuluh limfatik.

Sporothrix schenkii dan Histoplasma capsulatum mempengaruhi hewan peliharaan dan manusia.

Mikologi lingkungan

Banyak jamur patogen atau oportunistik dapat terkonsentrasi pada waktu tertentu di lingkungan tertentu, terutama di ruang operasi dan Intensive Care Unit (ICU) klinik dan rumah sakit. Oleh karena itu perlu dilakukan pengendalian terhadap mereka.

Ruang rentan lainnya adalah perpustakaan dan bangunan tua, yang dapat dipengaruhi oleh konsentrasi jamur lingkungan.

Dalam studi lingkungan, agar dekstrosa Sabouraud digunakan untuk isolasi jamur.

Mikologi industri

Sabouraud dextrose agar tidak dapat diabaikan untuk studi pencemaran jamur dalam produksi kosmetik, makanan, minuman, kulit, tekstil, dan lain-lain.

Mikologi tanaman

Tanaman juga menderita penyakit yang disebabkan oleh jamur, mempengaruhi berbagai bagian tanaman, yang bahkan dapat mengakhiri panen, menyebabkan kerugian besar di bidang pertanian.

Referensi

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Diagnosis mikrobiologis dari mikosis dan studi sensitivitas antijamur. Rekomendasi dari Masyarakat Spanyol untuk Penyakit Menular dan Mikrobiologi Klinis. Tersedia di: coesant-seimc.org
2. Laboratorium ValteK. (2009). Sabouraud dextrose agar dengan cycloheximide. Tersedia di: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Mikologi kedokteran hewan. Universitas Agraria Nasional. Nikaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
5. Casas-Rincón G.Mikologi Umum. 1994. Edisi ke-2 Universitas Pusat Venezuela, Edisi Perpustakaan. Venezuela Caracas.