POTATO DEXTROSE AGAR: ALASAN, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The potato dextrose agar adalah media, non padat - budaya nutrisi selektif. Spesies bakteri dan jamur dapat tumbuh di dalamnya, tetapi penggunaannya sangat diindikasikan untuk isolasi jamur dan khamir berserabut. Ia juga dikenal sebagai media PDA untuk ekspresi bahasa Inggris Potato Dextrose Agar.

Ini sangat berguna untuk isolasi jamur fitopatogenik, yaitu yang mempengaruhi tanaman. Untuk menabur sampel dari sayuran yang terinfeksi, cara lain seperti agar Sabouraud atau agar malta dapat digunakan, namun, untuk penggunaan rutin, agar dekstrosa kentang lebih disukai karena memperoleh sporulasi yang lebih besar.

Aspergillus niger dan Sinemas masing-masing pada agar dekstrosa kentang. Sumber: Alextrevelian 006 di Wikipedia bahasa Inggris / Joselrojas

Ini juga digunakan untuk menghitung koloni jamur dalam sampel kosmetik, produk farmasi dan beberapa makanan olahan susu. Demikian juga, cocok untuk menabur sampel kerokan kulit untuk mencari dermatofita, yang tumbuh sangat baik di media ini, mengembangkan pigmen khasnya.

Medium dekstrosa kentang adalah media yang sangat sederhana dan mudah dibuat di laboratorium. Ini berisi, seperti namanya, infus kentang, dekstrosa dan agar-agar. Selain itu, zat penghambat dapat ditambahkan untuk mencegah pertumbuhan bakteri dan meningkatkan selektivitas spesies jamur.

Dasar

Potato dextrose agar adalah media kultur yang menyediakan elemen nutrisi yang diperlukan untuk perkembangan jamur dan khamir berserabut.

Kombinasi infus kentang dengan glukosa memberikan sumber energi yang sempurna untuk pertumbuhan jamur yang memuaskan. Sedangkan agar-agar yang memberikan konsistensi pada medianya.

Media saja tidak menghambat pertumbuhan bakteri, oleh karena itu merupakan media non-selektif. Untuk membuatnya selektif maka perlu penambahan zat penghambat seperti asam tartarat atau antibiotik.

Persiapan

- Sediaan agar dekstrosa kentang buatan rumah (non-komersial)

Cawan petri

Ini disiapkan sebagai berikut:

Pertama-tama, kentang dicuci dengan sangat baik, menghilangkan tanah yang dimilikinya. Mereka dipotong menjadi irisan tipis dengan segala sesuatu dan cangkang. 200 gram kentang ditimbang dan direbus dalam satu liter air suling selama setengah jam.

Di penghujung waktu, saring atau saring semua sediaan melalui kain katun tipis.

Cairan yang diperoleh dilengkapi dengan akuades sebanyak satu liter. 20 g agar-agar dan 20 g dekstrosa ditambahkan ke dalam infus, dicampur dengan baik dan diautoklaf pada 121 ° C, pada tekanan 15 pon selama 15 menit.

Biarkan dingin hingga 50 ° C dan sajikan dalam cawan Petri steril. Piring yang sudah disiapkan disimpan di lemari es.

Wedges

Irisan agar-agar dekstrosa kentang juga bisa disiapkan.

Dalam hal ini, sebelum disterilkan dalam autoklaf, 12 hingga 15 ml media ditempatkan dalam tabung, kemudian diautoklaf dan saat dibiarkan diletakkan di atas penyangga khusus sampai mengeras. Simpan di lemari es.

Medium tetap pada pH 5,6 ± 0,2, namun, beberapa laboratorium menambahkan asam tartarat 10% untuk menurunkan pH menjadi 3,1 ± 0,1 untuk menghambat pertumbuhan bakteri.

Dalam hal ini, laboratorium lain lebih suka menambahkan antibiotik agar selektif dalam budidaya jamur dan mencegah pertumbuhan bakteri.

-Persiapan komersial agar kentang dekstrosa

Timbang 39 g media dehidrasi yang tersedia secara komersial dan larutkan dalam satu liter air suling. Biarkan istirahat selama 5 menit.

Campuran tersebut dipanaskan dengan sering diaduk sampai larut sepenuhnya. Selanjutnya disterilkan dalam autoclave dengan suhu 121 ° C selama 15 menit.

Piring atau irisan bisa disiapkan. Lanjutkan seperti yang dijelaskan di atas.

PH tetap pada 5,6 ± 0,2. Jika diinginkan pH 3,1, 14 ml asam tartarat 20% steril harus ditambahkan sebelum disajikan ke piring.

Media mentah berwarna krem ​​dan media yang disiapkan berwarna kuning muda dengan tampilan agak keruh atau opalescent.

Aplikasi

Proses untuk menabur sampel tanaman pada potato dextrose agar

-Untuk daun yang bernoda

Daunnya dipotong-potong.

Dalam gelas 50 cc dengan alkohol 50%, tempatkan potongan daun (potongan bernoda dan sehat), untuk mensterilkan permukaan selama 20 sampai 30 detik. Buang alkohol dan tambahkan 20% natrium hipoklorit selama 40 hingga 50 detik jika daunnya tipis dan tambah waktunya menjadi 80 detik jika itu kulit kayu dan batang kayu.

Buang natrium hipoklorit dan ambil potongan yang telah didesinfeksi dengan tang steril dan letakkan di permukaan media (maksimal 10 buah). Atur tanggal dan inkubasi pada 20-30 ° C.

-Untuk buah-buahan dan umbi-umbian

Jika buah berdaging, buka buah yang terkena jamur dan ambil potongan dengan pisau bedah steril dari bagian yang sakit dan sehat lalu letakkan di permukaan agar-agar.

Jika buahnya jeruk, seperti jeruk nipis atau jeruk, maka harus dibuka dan bijinya disemai.

Jika permukaan buah terpengaruh dan spora teramati, yang ideal adalah menggunakan metode parutan di atas piring; Ini terdiri dari menyentuh spora dengan spatula berbentuk "L" yang telah disterilkan dan didinginkan, dan kemudian membuat penyemaian zigzag 2 sampai 3 kali pada agar.

-Untuk biji-bijian

Mereka didesinfeksi seperti yang dijelaskan pada daun dan kemudian ditempatkan pada agar.

-Untuk cabang dan batang

Kulit kayunya dikerok dan kemudian bagian yang sehat dan sakit diambil dan disemai langsung pada agar-agar.

Pelat unggulan diinkubasi secara aerob pada suhu 20-30 ° C selama 72 jam.

Proses untuk menabur sampel kulit, rambut atau sisik kuku pada agar dekstrosa kentang

Pengambilan sampel harus dilakukan dengan menggunakan pisau bedah no. 11, baik untuk memotong rambut yang terkena, sisik kulit atau kuku untuk mencari dermatofita. Sebelum mengambil sampel, area tersebut harus didesinfeksi dengan alkohol 70%.

-Sampel kulit

Pada lesi bersisik, tepi lesi harus dikikis, karena jamur lebih mungkin ditemukan di sana.

Pada lesi eksudatif, sampel diambil dengan kapas kering atau basah. Taburkan segera di agar kentang dekstrosa atau agar Sabouraud. Hindari alat transportasi.

Metode pengambilan sampel lainnya adalah melalui teknik karpet persegi Mariat dan Adan Campos. Dalam hal ini, area yang terkena digosok 5 kali dengan sepotong wol steril untuk penanaman selanjutnya.

Sampel dapat ditempatkan langsung ke dalam media kultur.

Sampel rambut

Bergantung pada patologi, bagian yang terkena dapat dipotong atau dicabut. Tempatkan sampel dalam media kultur.

Sampel kuku

Bagian tertentu dari kuku yang terkena bisa tergores atau dipotong. Itu akan tergantung pada jenis cederanya.

Potong sampel menjadi potongan-potongan berukuran 1 mm sebelum disemai untuk meningkatkan kemungkinan kontak jamur dengan media kultur.

Prosedur identifikasi

Koloni yang diperoleh di cawan diisolasi dalam tabung yang berisi agar dekstrosa kentang untuk melakukan studi makroskopik dari koloni (penampilan, warna, konsistensi, tingkat perkembangan.

Studi mikroskopis (pengamatan struktur dan formasi mereka) dapat dilakukan dengan mikrokultur atau pengamatan langsung di bawah mikroskop antara kaca objek dan kaca objek.

Jumlah koloni

Media ini juga dapat digunakan untuk menentukan beban jamur dan ragi yang ada dalam sampel tanaman, makanan, kosmetik atau obat. Untuk tujuan ini, agar kentang dekstrosa yang ditambah dengan antibiotik digunakan, seperti: (kloramfenikol, klorotetrasiklin atau keduanya).

Tuang 1 ml sampel - sebaiknya diencerkan - ke dalam cawan Petri yang steril dan kosong, kemudian lelehkan media agar kentang dekstrosa dan biarkan dingin hingga 45 ° C. Tuang ke dalam cawan petri dan putar hingga homogen. Biarkan istirahat sampai mengeras.

Inkubasi secara aerob pada suhu 20-25 ° C (jamur) atau 30-32 ° C (ragi) selama 5 hingga 7 hari atau lebih, tergantung pada jenis jamur yang dicari dan jenis sampel. Dua pelat dapat digunakan untuk diinkubasi di kedua rentang suhu.

Menghitung koloni jamur dalam sampel makanan. Potato dextrose agar ditambah dengan antibiotik. Sumber: Pxhere.com foto / 777267

Pemeliharaan strain jamur

Potato Dextrose Agar dapat digunakan untuk memelihara strain jamur yang bertahan hidup selama beberapa tahun.

Untuk ini, jamur ditanam pada irisan agar kentang dekstrosa dan setelah jamur tumbuh, ia ditutup dengan minyak mineral. Oli harus disterilkan dalam autoclave selama 45 menit, dan memiliki viskositas sekitar 300 hingga 330 Saybolt. Minyak harus berada 1 hingga 2 cm di atas ujung bevel.

QA

Dari setiap batch yang disiapkan, ambil 1 atau 2 piring dan inkubasi pada suhu 25 ° C selama 48 jam atau pada 20 ° C selama 96 jam. Pengendalian sterilitas yang baik adalah di mana perkembangan koloni tidak diamati.

Strain kontrol yang dikenal atau bersertifikat juga dapat digunakan seperti:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Pertumbuhan yang baik diharapkan dalam semua kasus.

Referensi

1. Laboratorium Britannia. Kentang agar glukosa. 2015. Tersedia di: britanialab.com
2. Laboratorium Neogen. Potato Dextrose agar. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
3. Laboratorium Insumolab. Agar dekstrosa kentang. Tersedia di: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G.Mikologi Umum. 1994. Edisi ke-2 Universitas Pusat Venezuela, Edisi Perpustakaan. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Evaluasi Kualitas Mikrobiologi pada Eyeshadow Jenis Bedak Padat Laboratorium Produksi Nasional, Sesuai Metode Referensi Pharmacopea Usp 2005. Skripsi untuk memenuhi syarat sebagai Ahli Kimia Farmasi. Universitas San Carlos dari Guatemala.
7. Cuétara M. Pengolahan sampel permukaan. Jurnal Mikologi Iberoamerika. 2007; hal. 1-12