AGAR XLD: ALASAN, PERSIAPAN, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The XLD agar atau Xylose Lysine desoxycholate agar media adalah selektif dan budaya yang solid diferensial untuk isolasi enteropatogen. Taylor merancang formula XL agar (Xylose, Lysine) untuk meningkatkan isolasi genus Shigella.

Dia mengamati bahwa genus ini dihambat di sebagian besar media yang dimaksudkan untuk isolasi enteropatogen. Selanjutnya, natrium deoksikolat, natrium tiosulfat dan besi amonium sitrat ditambahkan untuk meningkatkan selektivitasnya. Formula ini telah terbukti bermanfaat untuk isolasi Shigella dan Salmonella.

Perbedaan koloni Shigella, Salmonella dan coliforms pada agar XLD. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Sumber: A. Oleh: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, Courtesy: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Oleh: CDC / Dr. Petani JJ, Sumber: Public Health Image Library

Agar XLD terdiri dari ekstrak ragi, natrium deoksikolat, xilosa, lisin, laktosa, sukrosa, natrium tiosulfat, besi amonium sitrat, natrium klorida, fenol merah dan agar. XLD Agar dan SS Agar duo digunakan di sebagian besar laboratorium bakteriologi untuk mempelajari sampel kotoran untuk Shigella dan Salmonella.

Laboratorium lain lebih memilih kombinasi CHROMagar Salmonella dan agar XLD, di antara pilihan lain yang tersedia. Duo ini dapat disiapkan dalam cawan Petri ganda. Di satu sisi mereka menempatkan agar XLD dan di sisi berlawanan media yang dipilih lainnya.

Dasar

-Kekuatan nutrisi

Agar XLD memiliki ekstrak yeast yang berfungsi sebagai sumber nutrisi bagi mikroorganisme yang tumbuh pada agar ini. Selain itu, adanya karbohidrat (xilosa, sukrosa, dan laktosa) memberikan energi pada bakteri yang dapat memfermentasinya.

- Selektivitas media

Sebagai zat penghambat, ia menghadirkan natrium deoksikolat; Ini mencegah pertumbuhan bakteri Gram positif, memberikan media karakter selektif.

Daya -Differential

Koloni Shigella yang khas

Seperti yang telah disebutkan, agar XLD mengandung xilosa; Karbohidrat ini difermentasi oleh semua bakteri yang tumbuh di media ini kecuali dari genus Shigella.

Inilah salah satu ciri yang memberikan sifat pembeda, karena koloni Shigella dibedakan dari yang lain dengan mengembangkan koloni merah, sedangkan bakteri lain menghasilkan koloni kuning.

Koloni khas Salmonella

Genus Salmonella juga memfermentasi xilosa, awalnya menghasilkan koloni kuning. Namun, setelah karbohidrat xilosa habis, ia menyerang lisin untuk enzim lisin dekarboksilase. Dekarboksilasi lisin menghasilkan alkali yang mengubah warna koloni dan media sekitarnya menjadi merah asli.

Perilaku ini hanya dilakukan oleh Salmonella, karena koliform yang dekarboksilat lisin tidak dapat membuat medium menjadi basa. Ini karena coliforms juga memfermentasi laktosa dan sukrosa yang ada; oleh karena itu, produksi asam sangat tinggi, meninggalkan koloni kuning pada bakteri ini.

Perlu dicatat bahwa genus Salmonella tidak memfermentasi sukrosa atau laktosa.

Produksi H

Agar XLD juga memungkinkan deteksi spesies Salmonella penghasil H ₂ S; Untuk ini, ini mengandalkan sumber belerang yang diwakili oleh natrium tiosulfat dan pengembang reaksi, yaitu besi amonium sitrat.

Yang terakhir bereaksi dengan H ₂ S (gas tak berwarna) dan membentuk endapan besi sulfat hitam tak larut yang terlihat. Dalam pengertian ini, ciri-ciri koloni salmonella akan berwarna merah dengan pusat berwarna hitam.

Perlu dicatat bahwa untuk terjadinya reaksi pembentukan H ₂ S, diperlukan pH basa. Itulah mengapa Enterobacteriaceae lain yang membentuk H ₂ S tidak dapat melakukannya atau melakukannya dengan buruk di media ini, karena keasaman tinggi yang dihasilkan dengan memfermentasi karbohidrat yang ada menghambat atau menghambat reaksi.

-Sodium klorida, agar dan merah fenol

Akhirnya, natrium klorida menjaga keseimbangan osmotik; Agar adalah zat pemadat dan fenol merah mendeteksi perubahan pH, mengubah warna koloni dan medium.

Persiapan

Timbang 55 g medium XLD dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Panaskan dan aduk adonan hingga mencapai titik didih. Jangan terlalu panas, karena panas merusak medium dan menciptakan endapan yang mengubah morfologi koloni pada umumnya.

Media ini tidak boleh diautoklaf. Saat melarutkan, itu harus dilewatkan ke penangas air pada suhu 50 ° C. Saat mendingin, harus disajikan langsung di atas cawan Petri yang steril. Mereka dapat dituangkan ke dalam piring tunggal atau piring ganda. Mereka dibiarkan mengeras dan disimpan di lemari es sampai digunakan.

Temper sebelum digunakan. Karena ini adalah media non-steril, disarankan untuk menyiapkannya mendekati tanggal penggunaan.

PH akhir media harus 7,4 ± 0,2. Warna media yang disiapkan oranye-merah, tembus cahaya, tanpa endapan.

Jika Anda memiliki agar basa Xylose Lysine (XL), Anda dapat menambahkan natrium deoksikolat, natrium tiosulfat, dan besi amonium sitrat. Dengan cara ini, rumus agar XLD diperoleh.

Aplikasi

Agar XLD digunakan untuk pemulihan enteropatogen, terutama dari genus Shigella dan yang kedua dari genus Salmonella. Ini berguna untuk mengevaluasi sampel tinja, air dan makanan.

Jenis sampel

Kotoran

Sampel feses dapat langsung disemai pada agar XLD, sehingga menghasilkan distribusi bahan yang baik untuk mendapatkan koloni yang terisolasi.

Untuk meningkatkan pemulihan Salmonella, agar XLD dapat diambil dari media pengayaan Salmonella.

Makanan

Untuk makanan, kaldu pengayaan untuk Salmonella dan Shigella dapat digunakan. Untuk Salmonella Anda bisa menggunakan kaldu cystine selenite, kaldu tetrathionate hijau cerah, antara lain.

Dalam kasus Shigella, dapat diperkaya dengan kaldu Shigella dengan 0,5 µ / ml novobiocin, diinkubasi pada 42 ° ± 1 ° C selama 16-20 jam.

air

Dalam analisis air, teknik filtrasi membran dan penggunaan agar XLD direkomendasikan antara lain.

Kondisi penanaman dan identifikasi

Media benih diinkubasi secara aerob pada suhu 35 ° C selama 24 sampai 48 jam.

Koloni khas dari setiap genus diamati, koloni yang mencurigakan harus menjalani tes biokimia untuk identifikasi mereka.

QA

Untuk mengevaluasi kontrol kualitas media, strain bakteri berikut dapat digunakan: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Genus Salmonella dicirikan dengan adanya koloni berwarna merah dengan pusat hitam atau koloni hitam seluruhnya pada medium ini. Padahal, pada genus Shigella koloni harus berwarna merah, yaitu warna medium.

Dalam kasus Escherichia coli, diharapkan terhambat secara total atau sebagian; jika tumbuh koloni berwarna kuning. Untuk Proteus mirabilis, pertumbuhan yang buruk diharapkan dengan koloni merah muda dengan atau tanpa pusat hitam. Akhirnya genus Klebsiella akan tumbuh sebagai koloni kuning.

Pikiran terakhir

Agar XLD banyak digunakan di laboratorium bakteriologi karena efisiensinya yang tinggi untuk pemulihan Shigella dan juga pemulihan genus Salmonella yang baik.

Rall et al. (2005) dalam karyanya yang berjudul "Evaluasi tiga kaldu pengayaan dan lima media padat untuk deteksi Salmonella pada unggas" menunjukkan bahwa dari 3 media klasik yang diuji (agar hijau cerah, agar SS dan agar XLD) , Agar XLD memiliki tingkat pemulihan terbaik.

Persentase pemulihannya adalah sebagai berikut: 13,8% untuk agar-agar hijau cerah, 27,6% untuk SS, dan 34,5% untuk XLD. Agar Rambach dengan recovery 48% dan CHROMagar dengan 79,3% hanya dilampaui oleh media chromogenic.

Referensi

1. Penyakit bawaan makanan. Shigellosis. Tersedia di: anmat.gov.ar
2. "Agar XLD." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 9 Feb 2019, 11:46 UTC. 10 Apr 2019, 19:25 wikipedia.org
3. Laboratorium BBL. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Tersedia di: bd.com
4. Lab. Neogen. XLD agar. Tersedia di: foodsafety.neogen
5. Laboratorium Francisco Soria Melguizo. Agar XLD. Tersedia di: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Evaluasi tiga kaldu pengayaan dan lima media pelapisan untuk deteksi Salmonella pada unggas. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Tersedia dari: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.