LIA (BESI LISIN) AGAR: ALAS BEDAK, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The LIA agar (Lysine Iron) adalah tes biokimia digunakan untuk mengidentifikasi bakteri dari keluarga Enterobacteriaceae. Media ini dibuat oleh Edwards dan Fife, berdasarkan rumus Falkow.

Awalnya tes ini adalah kaldu yang mengandung pepton, ekstrak ragi, glukosa, L-lisin, ungu bromokresol, dan air suling. Edwards dan Fife menambahkan agar-agar, besi amonium sitrat, dan natrium tiosulfat.

Tes positif dan negatif untuk dekarboksilasi lisin. Sumber: Foto dan diagram milik penulis MSc. Marielsa gil

Tes pada dasarnya terdiri dari mendemonstrasikan keberadaan enzim lisin dekarboksilase, yang mampu bereaksi dengan gugus karboksil dari asam amino L-lisin. Deaminasi asam amino juga dapat terjadi karena adanya enzim lisin deaminase.

Selain itu, komposisi medium tersebut menunjukkan kemampuan beberapa genus bakteri untuk menghasilkan hidrogen sulfida. Terakhir, dimungkinkan juga untuk mengamati terbentuk atau tidaknya gas dalam medium.

Dasar

Pepton dan ekstrak ragi

Seperti kebanyakan media kultur, Lysine Iron Agar mengandung komponen yang menyediakan sumber nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Komponen ini diwakili oleh pepton dan ekstrak ragi.

Glukosa

Demikian juga, agar-agar ini mengandung glukosa sebagai karbohidrat yang dapat difermentasi. Semua bakteri dalam keluarga Enterobacteriaceae diketahui memfermentasi glukosa.

Langkah ini penting, karena akan bertanggung jawab untuk mengasamkan media, suatu kondisi penting bagi enzim lisin dekarboksilase -jika ada- untuk bekerja pada substratnya.

Pada beberapa genera bakteri, produksi gas akibat fermentasi glukosa dapat diamati.

Gas dibuktikan bila ada perpindahan agar-agar di dalam tabung, meninggalkan ruang kosong di dasar tabung, atau dengan retaknya media menjadi dua bagian atau lebih.

L-lisin

Setelah lisin dekarboksilasi, diamina (kadaverin) dan karbon dioksida terbentuk.

Dekarboksilasi terjadi dengan adanya koenzim piridoksal fosfat. Reaksi ini tidak dapat diubah.

Indikator PH (bromocresol ungu)

Semua perubahan pH yang terjadi di dalam medium oleh berbagai reaksi dideteksi oleh indikator pH bromokresol ungu.

Dalam pengertian ini, ketika terjadi pengasaman, media berubah menjadi kuning, dan ketika terjadi alkalisasi, media kembali ke warna ungu atau ungu semula.

Ketika deaminasi lisin terjadi karena adanya enzim deaminase lisin, warna kemerahan terbentuk di permukaan, khas pada genera Proteus, Providencia, dan beberapa spesies Morganella.

Hal ini disebabkan fakta bahwa selama proses deaminasi terbentuk asam alfa-keto-karbonat, yang bereaksi dengan amonium sitrat dengan adanya oksigen, yang menyebabkan warna tersebut.

Ferric ammonium citrate dan sodium thiosulfate

Di sisi lain, bakteri penghasil hidrogen sulfida akan dibuktikan dengan adanya natrium tiosulfat (sumber belerang) dan besi amonium sitrat yang merupakan pembangun H ₂ S.

Bakteri yang memiliki enzim tiosulfat reduktase memiliki kemampuan untuk bertindak dengan mereduksi natrium tiosulfat yang ada, membentuk sulfit dan hidrogen sulfida (H ₂ S).

Yang terakhir adalah gas tidak berwarna, tetapi ketika bereaksi dengan garam besi itu membentuk sulfida logam besi, yang merupakan senyawa tidak larut (endapan hitam terlihat).

Namun, kemampuan untuk membentuk H ₂ S dengan media ini tidak terlalu diandalkan, karena beberapa lisin dekarboksilase bakteri negatif mampu menghasilkan H ₂ S tidak akan membentuk endapan hitam, sebagai keasaman ikut campur media. Oleh karena itu, disarankan untuk mengecek dengan media lain yang mengandung zat besi.

Interpretasi tes

Dekarboksilasi lisin

Tabung harus dibaca setelah 24 jam inkubasi, jika tidak ada risiko salah menafsirkan reaksi, melaporkan negatif palsu.

Harus diingat bahwa reaksi pertama yang akan terjadi adalah fermentasi glukosa, oleh karena itu semua tabung setelah 10 sampai 12 jam akan menguning.

Jika pada akhir waktu inkubasi (24 jam) terlihat latar belakang kuning dengan permukaan ungu atau ungu, reaksinya negatif. Warna ungu permukaan sesuai dengan alkalinisasi medium dengan menggunakan pepton.

Reaksi positif adalah reaksi di mana dasar dan permukaan tabung berwarna ungu seluruhnya, yaitu kembali ke warna aslinya.

Oleh karena itu, yang menentukan positivitas dari tes adalah dasar atau latar dari medianya. Jika ragu tentang warnanya, ini dapat dibandingkan dengan tabung LIA yang tidak diinokulasi.

Deaminasi lisin

Sebuah tabung yang menunjukkan deaminasi lisin akan memiliki permukaan merah marun kemerahan dan latar belakang kuning (asam), atau seluruh tabung berwarna merah marun kemerahan.

Reaksi ini diinterpretasikan sebagai negatif untuk dekarboksilasi lisin, tetapi positif untuk deaminasi lisin.

Reaksi ini didefinisikan dan diinterpretasikan pada bezel.

Produksi hidrogen sulfida (H

Reaksi positif diamati dengan munculnya endapan hitam di semua atau sebagian medium. Biasanya antara tepi bevel dan alas.

Jika endapan terjadi di seluruh tabung, maka tidak akan menampakkan reaksi lain yang terjadi di tengah.

Rekam hasil

Saat menafsirkan tes, hasilnya dicatat sebagai berikut:

Pertama bevel dibaca, kemudian bagian bawah atau blok, kemudian produksi H ₂ S, dan terakhir produksi gas.

Contoh: K / A + (-). Ini berarti:

• K: Bezel alkalin (warna ungu)
• A: Latar belakang asam (kuning), yaitu reaksi dekarboksilasi negatif dan deaminasi negatif.
• +: Produksi hidrogen sulfida
• (-): Tanpa gas.

Persiapan

Timbang 35 g medium agar besi lisin dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling.

Panaskan sampai agar-agar benar-benar larut, untuk melakukannya biarkan mendidih sebentar sambil diaduk. Bagikan 4 ml media ke dalam 13/100 tabung reaksi dengan tutup kapas.

Sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit. Keluarkan dari autoclave dan biarkan berdiri miring sehingga ada alas yang dalam dan kemiringan pendek.

Simpan di lemari es 2-8 ° C. Biarkan hangat sebelum menabur strain bakteri.

Warna media dehidrasi berwarna krem ​​dan media yang disiapkan berwarna ungu kemerahan.

PH akhir dari media yang disiapkan adalah 6,7 ± 0,2

Media berubah menjadi kuning pada pH 5,2 atau kurang, dan ungu pada pH 6,5 ke atas.

Aplikasi

Tes ini, bersama dengan tes biokimia lainnya, digunakan untuk identifikasi basil dari famili Enterobacteriaceae.

Media diunggulkan dengan lingkaran atau jarum lurus, satu atau dua tusukan dibuat ke bagian bawah tabung, dan kemudian permukaan media dicetak secara zigzag.

Inkubasi selama 24 jam pada suhu 35-37 ° C dalam aerobiosis. Jika perlu, dibiarkan diinkubasi selama 24 jam lagi.

Hal ini terutama berguna untuk membedakan spesies Citrobacter laktosa-negatif dari Salmonellas sp.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.

Referensi

1. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Laboratorium Britannia. Agar besi lisin. 2015. Tersedia di: britanialab.com
5. Laboratorium BD. Miring Agar Besi BBL Lisin. 2007. Tersedia di: bd.com
6. Laboratorium Valtek. Medium LIA 2009. Tersedia di: andinamedica.com