The agar Hektoen atau Hektoen enteric agar media padat adalah selektif dan budaya diferensial. Itu dibuat di Institut Hektoen oleh King dan Metzger untuk isolasi bakteri enteropatogenik dari genera Shigella dan Salmonella.
Mediumnya terdiri dari pepton proteosa, ekstrak ragi, garam empedu, laktosa, sukrosa, salisin, natrium tiosulfat, natrium klorida, sitrat besi, amonium sitrat, bromotimol biru, asam fuchsin dan agar. Formulasi ini memungkinkan untuk membedakan genera Shigella dan Salmonella dari sisa bakteri yang mampu tumbuh di media ini.
A. Agar Virgin Hektoen B. Agar Hektoen berbiji. Sumber: Flickr.com/ Pengunggah asli adalah Philippinjl di Wikipedia bahasa Prancis.
Meskipun ada media lain yang fungsinya sama dengan agar Hektoen, namun memiliki keunggulan lebih dibandingkan media lain, terutama bila ingin memulihkan spesies Shigella.
Spesies dari kedua jenis kelamin menyebabkan masalah gastrointestinal yang parah pada manusia karena konsumsi makanan yang terkontaminasi; oleh karena itu penularannya melalui fekal - oral. Itulah mengapa penggunaan agar Hektoen terutama diindikasikan dalam analisis mikrobiologis sampel tinja dan makanan.
Dasar
Agar Hektoen mengandung pepton dan ekstrak ragi sebagai sumber nutrisi, menyediakan unsur-unsur penting bagi perkembangan mikroba.
Namun, ia juga memiliki garam empedu yang bekerja dengan menghambat pertumbuhan beberapa bakteri, terutama Gram positif dan beberapa Gram negatif. Karena alasan inilah ia dianggap sebagai media selektif.
Di sisi lain, agar Hektoen adalah media diferensial. Sifat ini diperoleh dengan adanya karbohidrat yang dapat difermentasi seperti laktosa, sukrosa dan salisin, bersama dengan sistem indikator pH, yang diwakili oleh bromotimol biru dan asam fuchsin.
Semua bakteri yang mampu tumbuh pada medium ini yang tidak termasuk dalam genus Salmonella dan Shigella akan mengembangkan koloni salmon atau oranye kecuali dari genus Proteus. Ini karena fermentasi satu atau lebih karbohidrat yang ada, yang mengasamkan medium, yang membuat indikator pH berubah.
Sementara itu, genus Shigella dan Salmonella tidak mampu memfermentasi karbohidrat yang ada, hanya menggunakan pepton sebagai sumber energi, yang membuat medium menjadi alkali dan oleh karena itu koloninya berwarna biru kehijauan.
Bakteri yang mampu membentuk hidrogen sulfida (gas tak berwarna) juga dapat dibedakan dalam media ini. Sodium tiosulfat bertindak sebagai sumber belerang sedangkan besi sitrat adalah pengembangnya. Kedua senyawa tersebut memungkinkan terbentuknya endapan hitam besi sulfida yang menunjukkan reaksi.
Endapan hitam di tengah koloni dengan lingkaran transparan di sekelilingnya memberikan tampilan mata ikan. Karakteristik ini menunjukkan adanya genus Salmonella.
Akhirnya, natrium klorida mempertahankan keseimbangan osmotik dan agar-agar memberikan konsistensi padat ke media.
Persiapan
Timbang 76 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Kocok campuran dengan kuat lalu diamkan selama 10 hingga 15 menit. Dapat dipanaskan dan direbus, memberikan gerakan berputar sampai larut total. Media ini tidak diautoklaf.
Saat medium mencapai suhu kurang lebih 45 ° C, volume 20 ml dituang langsung ke dalam cawan petri steril.
Agar dibiarkan mengeras. Saat itu mereka siap untuk digunakan. Dianjurkan untuk segera menggunakannya. Jika tidak memungkinkan, simpan di lemari es sampai digunakan.
Piring harus dikeluarkan dari lemari es terlebih dahulu sebelum disemai agar mencapai suhu kamar.
PH media harus 7,5 ± 0,2. Warna media dehidrasi adalah ungu dan media yang disiapkan berwarna hijau kecoklatan.
Menggunakan
Penggunaan agar Hektoen direkomendasikan untuk pencarian bakteri dari genus Shigella dan Salmonella pada sampel tinja dan makanan.
Kemungkinan mengisolasi bakteri ini sangat meningkat jika sampel sebelumnya diperkaya dengan kaldu khusus, seperti kaldu selenite, kaldu sistin selenite, kaldu tetrationat, dll.
Inokulum harus kuat dan penaburan dilakukan dengan coretan. Pelat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam aerobiosis.
Direkomendasikan inkubasi selama 48 jam karena karakteristik koloni lebih jelas untuk interpretasi dan diferensiasinya saat ini.
QA
Untuk melakukan kontrol kualitas pada media ini digunakan strain bakteri bersertifikat, seperti: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 dan Shigella sonnei ATCC 25931.
Hasil yang diharapkan adalah sebagai berikut: Salmonella typhimurium dan Salmonella enteritidis akan berkembang menjadi koloni biru kehijauan dengan atau tanpa pusat hitam. Sedangkan spesies Shigella akan tumbuh sebagai koloni biru kehijauan.
Strain Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923 juga dapat dimasukkan.
Dalam kasus ini, karakteristik yang diamati adalah sebagai berikut: E. coli dan K. pneumoniae akan mengembangkan koloni salmon-oranye pada media ini, dengan endapan warna yang sama di sekitarnya. Sedangkan Proteus akan mengembangkan koloni biru kehijauan dengan atau tanpa pusat hitam.
Sementara S. aureus dan E. faecalis harus dihambat, E. faecalis kadang-kadang berhasil tumbuh sebagai koloni kuning yang sangat kecil.
Di sisi lain, karena media ini tidak diautoklaf, penting untuk mengevaluasi sterilitas media. Oleh karena itu, dari setiap batch yang disiapkan, satu hingga dua pelat yang tidak diinokulasi harus diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.
Jelas tidak ada pertumbuhan apa pun yang diharapkan di atas piring.
Batasan
-Spesies Proteus dapat berkembang di media ini dan karakteristik koloni mereka dapat disalahartikan dengan spesies Salmonella atau Shigella. Untuk alasan ini, setiap koloni yang mencurigakan harus dikonfirmasi dengan uji biokimia.
-Perlu menyertai penggunaan media ini dengan agars lain yang kurang selektif, karena jika mikroorganisme yang dicari ditemukan dalam konsentrasi rendah, mungkin tidak berkembang di media ini.
-Jangan terlalu panas selama persiapan, karena panas yang berlebihan mengubah komposisi media.
-Biasanya, koloni Salmonella yang memfermentasi laktosa mungkin muncul tanpa disadari.
Referensi
- Kontributor Wikipedia. Agar enterik hektoen. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 13 Maret 2019 23.38 UTC. Tersedia di: .wikipedia.org / Diakses 16 Maret 2019.
- Laboratorium BD. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Britannia. Agar Enterik Hektoen. 2015. Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium Difco Francisco Soria Melguizo. Agar hektoen. Tersedia di: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. Edisi ke-2. Tersedia di: bd.com/europe