The EMB agar adalah selektif dan menengah diferensial digunakan untuk isolasi padat budaya Gram negatif basil, terutama Enterobacteriaceae dan bakteri Gram negatif lainnya undemanding. Ia juga dikenal dengan akronim EAM, yang merupakan singkatan dari eosin-methylene blue.
Media ini diciptakan oleh Holt-Harris dan Teague pada tahun 1916. Berisi pepton, laktosa, sukrosa, kalium fosfat, agar, eosin, biru metilen, dan air. Ini sangat mirip dengan Agar MacConkey, terutama bila menggunakan Agar EMB Modifikasi Levine, yang tidak mengandung sukrosa.
Kilap metalik Escherichia coli pada agar EMB Sumber: Carmen Moreno González, dari Wikimedia Commons
Faktanya, setiap laboratorium memutuskan apakah akan bekerja dengan satu atau yang lain, karena mereka memenuhi fungsi yang sama, meskipun secara biokimia berbeda.
Ia bahkan memiliki kelemahan yang sama dengan agar MacConkey klasik dalam hal produksi yang banyak oleh genus Proteus. Oleh karena itu, untuk menghindari fenomena ini, konsentrasi agar-agar dapat ditingkatkan hingga 5%.
Dasar
Selektif
Agar EMB sangat selektif karena mengandung pewarna anilin (eosin dan metilen biru), yang bertindak sebagai penghambat, mencegah pertumbuhan sebagian besar bakteri Gram positif dan beberapa batang Gram negatif yang rewel.
Akan tetapi, agar-agar ini memiliki kekurangan yaitu beberapa bakteri Gram positif dapat menahan keberadaan zat penghambat dan tumbuh sebagai koloni belang-belang kecil yang tidak berwarna, seperti Enterococcus faecalis dan beberapa Staphylococcus.
Ragi tertentu juga dapat tumbuh, seperti Candida albicans complex, yang akan menghasilkan koloni berwarna merah muda yang sangat kecil. Chlamydospora bahkan dapat berkembang dari ragi ini jika sampelnya berbiji dalam.
Diferensial
Di sisi lain, agar EMB juga merupakan media diferensial, karena pewarna ini bersama-sama (eosin dan biru metilen) memiliki sifat membentuk endapan pada pH asam, oleh karena itu mereka berfungsi sebagai indikator produksinya.
Dengan demikian, bakteri fermentasi laktosa atau sukrosa yang lemah menghasilkan koloni ungu dalam waktu 24 hingga 48 jam. Misalnya marga Klebsiella, Enterobacter dan Serratia.
Bakteri yang sangat memfermentasi laktosa, seperti Escherichia coli, atau sukrosa, seperti Yersinia enterocolitica atau Proteus penneri, membentuk endapan hitam kehijauan, memberikan tampilan kilau logam yang khas pada spesies ini.
Perlu dicatat bahwa jika media EMB levine (tanpa sukrosa) digunakan, Yersinia enterocolitica dan Proteus penneri akan menghasilkan koloni yang jernih.
Bakteri yang tidak memfermentasi laktosa atau sukrosa dipelihara dengan adanya pepton, yang menyediakan asam amino dan nitrogen yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri, dan menghasilkan koloni bening. Misalnya marga Salmonella dan Shigella, antara lain.
Demikian juga, penting untuk dicatat bahwa genus Acinetobacter dapat menghadirkan koloni biru lavender, meskipun bukan merupakan fermentor laktosa atau sukrosa, tetapi memiliki sifat mengikat biru metilen pada dinding selnya. Ini juga bisa terjadi dengan bakteri oksidatif lainnya.
Persiapan
Media dehidrasi asli berwarna krem muda.
Untuk menyiapkan media kultur ini, 36 gram media dehidrasi harus ditimbang dan disuspensikan dalam labu berisi satu liter air suling.
Setelah campuran didiamkan selama 5 menit, bawa labu ke sumber panas, aduk dengan kuat dan terus menerus sampai mendidih dan larut sepenuhnya.
Selanjutnya media kultur yang sudah terlarut harus disterilkan menggunakan autoclave pada suhu 121 ° C selama 15 menit.
Pada akhir waktu, itu dikeluarkan dari autoclave dan dibiarkan berdiri sebentar. Kemudian, masih hangat (45-50 ° C), 15-20 ml agar disajikan di setiap cawan petri steril. Mediumnya harus berwarna biru lakmus.
Setelah disajikan, piring dibiarkan sedikit terbuka hingga agar-agar agak dingin. Mereka kemudian ditutup dan dibiarkan mengeras sepenuhnya. Selanjutnya, mereka diatur dalam pemegang piring terbalik dan disimpan di lemari es (8 ° C) sampai digunakan.
Prosedur ini sebaiknya dilakukan di dalam kap aliran laminar atau di depan pembakar Bunsen untuk menghindari kontaminasi.
Penting untuk diingat bahwa setiap rumah komersial akan menunjukkan jumlah yang akan ditimbang untuk menyiapkan media kultur.
PH akhir media harus 7,2 ± 0,2
Aplikasi
Media ini digunakan untuk menabur urine dan feses atau jenis spesimen klinis apa pun, terutama jika dicurigai terdapat basil Gram negatif non-rewel, seperti basil dari famili Enterobacteriaceae, yang tumbuh sangat baik pada media ini.
Bakteri enteropatogenik dari genera Shigella dan Salmonella dibedakan berdasarkan koloni tidak berwarna atau agak kuning.
Basil fermentasi non laktosa lainnya seperti Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, antara lain juga tumbuh.
Demikian juga, media ini sangat berguna dalam analisis mikrobiologi makanan dan air, karena sangat ideal untuk fase konfirmasi lengkap dari penentuan koliform, yaitu untuk menguatkan keberadaan E. coli dari kaldu EC keruh dari dari teknik angka paling mungkin (MPN).
QA
Untuk memverifikasi bahwa media kultur yang baru disiapkan berfungsi dengan baik, strain kontrol dapat ditanam untuk mengamati karakteristik koloni dan memverifikasi bahwa mereka memberi seperti yang diharapkan.
Untuk ini, strain ATCC atau strain E. coli yang teridentifikasi dengan baik, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa dan beberapa bakteri Gram positif, seperti S. aureus, dapat digunakan.
E. coli diharapkan menghasilkan koloni biru-hitam yang berkembang dengan baik dengan kilau metalik hijau. Sedangkan Enterobacter aerogenes dan Klebsiella sp menghasilkan koloni mukosa hitam kebiruan yang berkembang baik.
Sebaliknya, Salmonella typhimurium dan Shigella flexneri, harus mengembangkan koloni yang besar, tidak berwarna atau dengan warna agak kuning.
Akhirnya genus Pseudomonas aeruginosa tumbuh sebagai koloni tak berwarna dengan ukuran tidak beraturan, sedangkan bakteri Gram positif harus dihambat total atau tumbuh jarang dengan koloni yang sangat kecil.
Pikiran terakhir
Terkadang sterilisasi menyebabkan biru metilen berkurang, menunjukkan warna oranye sedang. Agar biru metilen mengoksidasi dan memulihkan warna ungu, itu harus dicampur dengan lembut sampai warnanya pulih.
Selain itu, setelah sterilisasi, pewarna dapat mengendap, jadi harus tercampur dengan baik sebelum menyajikan cawan petri.
Referensi
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. 2009. Teknik untuk Analisis Mikrobiologi Makanan. Edisi ke-2. Fakultas Kimia UNAM. Mexico.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterisasi dan Distribusi Strain Escherichia coli yang Berpotensi Patogen yang Diisolasi dari Ayam Broiler dari Peternakan Unggas di Peru. Pdt. Investigasi dokter hewan. Peru 2012 23 (2): 209-219. Tersedia di: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Eosin dan Methylene Blue Agar. 2010. Tersedia di: condalab.com
- Laboratorium Britannia. Levine EMB (With Eosin and Methylene Blue) 2011. Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium BD. Agar BD EMB (Agar Eosin Methylene Blue), Dimodifikasi. 2013. Tersedia di: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA