CZAPEK AGAR: ALASAN, PERSIAPAN, PENGGUNAAN DAN BATASAN - BIOLOGI - 2025

The Czapek (CZA) adalah medium padat selektif khusus dirancang untuk tumbuh bakteri saprofit dan jamur. Itu diciptakan oleh ahli botani Friedrich Johann Franz Czapek, asal Polandia, dan ahli kimia Amerika Arthur Wayland Dox; Oleh karena itu, agar-agar ini juga dikenal sebagai media Czapek-Dox.

Media aslinya adalah cair, tetapi kemudian ditambahkan agar-agar menjadi media padat. Media Czapek terdiri dari natrium nitrat, bipotasium fosfat, magnesium sulfat, kalium klorida, besi sulfat, sukrosa, agar, dan air suling.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Sumber: A. Medmyco / B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH agar Czapek adalah 7,3, tetapi ada varian yang ditambahkan asam laktat 10%, yang pH-nya tetap 3,5. Media asam ini digunakan untuk budidaya mikroorganisme asidofilik.

Di sisi lain, beberapa rumah komersial memodifikasi komposisi agar Czapek dengan mengubah magnesium sulfat dan bipotassium fosfat dengan gliserofosfat; modifikasi ini mencegah endapan magnesium fosfat yang diamati dengan rumus konvensional dari pembentukan. Demikian juga, ada varian lain yang ditambahkan ekstrak ragi.

Terakhir, agar Czapek direkomendasikan oleh American Public Health Association APHA untuk penelitian Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp dan Penicillium sp. Spesies ini dicirikan sebagai mikroorganisme lingkungan dan patogen oportunistik.

Dasar

Media ini mengandung sukrosa; Karbohidrat ini berfungsi sebagai sumber karbon, sedangkan natrium nitrat adalah sumber nitrogen, tetapi tidak seperti media lain, nitrogen yang diberikan bersifat anorganik.

Untuk alasan ini, media Czapek dianggap selektif, karena hanya mikroorganisme yang mampu menggunakan senyawa anorganik sebagai satu-satunya sumber nitrogen yang dapat tumbuh.

Sebagai zat pengatur osmolaritas medium adalah bipotassium fosfat. Untuk bagian mereka, magnesium sulfat, kalium klorida dan besi sulfat menyediakan mineral penting untuk pertumbuhan mikroorganisme saprofitik (hidup bebas). Rumus ini membentuk endapan magnesium fosfat.

Akhirnya, agar-agar adalah senyawa yang memberikan konsistensi padat ke media dan air adalah pelarut untuk semua komponen.

Dengan formula agar Czapek yang dimodifikasi, tidak ada pembentukan endapan dan meningkatkan kinerja pertumbuhan beberapa jamur.

Keasaman ekstrim Acid Czapek Agar membuatnya menjadi media yang lebih selektif, hanya memungkinkan pertumbuhan mikroorganisme asidofilik, yang mampu memanfaatkan nitrogen anorganik. Sedangkan Czapek-yeast agar meningkatkan performa jamur tertentu.

Persiapan

Sedang Czapek-Dox

Timbang 49 g media kultur dehidrasi dan larutkan dalam air suling. Oleskan panas sampai mendidih. Kocok adonan sesering mungkin sampai larut sepenuhnya.

-Czapek Agar Wedges

Distribusikan campuran terlarut ke dalam tabung dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Saat melepas dari autoclave, homogenkan sebelum meletakkan tabung dan biarkan mengeras.

-Czapek agar piring

Autoclave campuran terlarut pada 121 ° C selama 15 menit dan biarkan dingin hingga 50 ° C, homogenkan dan tuangkan 20 ml ke dalam cawan Petri steril. Biarkan mengeras, balikkan dan simpan di lemari es sampai digunakan.

PH harus tetap pada 7,3 ± 0,2. Warna media dehidrasi adalah putih dan media yang disiapkan berwarna kuning muda, sedikit keruh karena adanya endapan yang berflokulasi.

Medium Czapek pada pH asam

Siapkan seperti yang telah dijelaskan, tetapi tambahkan 10 ml asam laktat 10% steril untuk setiap liter media yang disiapkan. Media Czapek yang dimodifikasi harus pada pH 3,5 ± 0,2.

Modifikasi Czapek Medium

Timbang 45,4 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Sisa persiapannya sama seperti yang dijelaskan di atas. Warna media dehidrasi berwarna putih dan media yang disiapkan berwarna keputihan. PH akhir medium adalah 6,8 ± 0,2.

Media ragi czapek

Juga disebut Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Ini berisi elemen agar Czapek klasik ditambah ekstrak ragi.

Menggunakan

Media Czapek digunakan untuk mencari mikroorganisme saprofit pada sampel tanah, sayuran, biji-bijian, udara, serangga, dan lain-lain.

Agar Czapek pada pH asam digunakan untuk pertumbuhan mikroorganisme asidofilik, sedangkan agar Czapek yang dimodifikasi sangat berguna untuk pembentukan klamidospora pada spesies kompleks Candida albicans.

Terakhir, agar ragi Czapek sangat berguna untuk isolasi Aspergillus dan Penicillium.

Ditabur

-Czapek agar

Untuk mencari Actinomycetes dalam tanah, lakukan sebagai berikut: sampel diolah dengan air yang telah difenolisasi selama 30 menit dan kemudian 1 mL suspensi ditaburkan pada agar Czapek. Inkubasi pada suhu 28 ° C selama 5 hingga 7 hari.

Sampel sayuran, biji-bijian dan serangga ditempatkan langsung pada agar-agar. Anda juga bisa membuat pengenceran dan menyemai 0,1 ml pada permukaan agar-agar.

-Agar Czapek yang dimodifikasi

Untuk penyemaian, digunakan loop atau jarum lurus, diresapi dengan swab dan agar-agar diinokulasi membuat tusukan sampai menyentuh dasar piring. Inkubasi selama 24 jam pada suhu 28 ° C dan periksa di bawah mikroskop di atas dan di bawah piring untuk melihat apakah klamidospora telah terbentuk.

Suhu dan waktu inkubasi

Suhu dan waktu inkubasi bervariasi tergantung pada jenis mikroorganisme yang akan diisolasi. Pelat umumnya diinkubasi selama satu hingga dua minggu dalam kisaran suhu 20 hingga 25 ° C.

Namun, ada kondisi khusus untuk beberapa strain. Misalnya, kebanyakan spesies dari marga Aspergillus tumbuh optimal pada suhu 30 ° C; namun A. fumigatus tumbuh pada suhu 50 ° C.

Mengenai waktu inkubasi satu atau dua minggu adalah normal, namun Candida albicans dapat berkembang dalam 24 hingga 48 jam pada suhu 25 ° C.

Karakteristik beberapa koloni pada media ini

-Penicillium atrovenetum

Ini berkembang dalam 12 hari inkubasi pada 27 ° C. Koloni mereka kecil (25 mm).

Koloni memiliki penampilan seperti beludru, dengan batas putih tegas dan corak biru-hijau di tengah yang berubah menjadi abu-abu seiring bertambahnya usia. Sisi belakang koloni berwarna jingga, membuat bagian tengahnya berwarna sama karena produksi pigmen.

-Aspergillus niger

Ini berkembang dengan miselium putih ke kuning dan spora hitam.

-Candida albicans

Koloni krem ​​muda krem ​​berkembang. Dalam agar Czapek yang dimodifikasi itu membentuk klamidospora.

-Aspergillus parasiticus

Miselium hijau tua berkembang dalam 7 hari pada suhu 25 ° C.

QA

Untuk mengevaluasi kualitas media kultur dapat ditanam strain kontrol bersertifikat, seperti: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger mengembangkan miselium putih menjadi kuning dan spora hitam dalam waktu sekitar 5 hari, sedangkan Candida albicans akan memiliki pertumbuhan yang memuaskan dalam 24 jam inkubasi pada suhu 25 ° C; koloni berwarna krem.

Batasan

Beberapa penelitian telah mengungkapkan bahwa untuk pemulihan Actinomycetes, agar dengan hasil terbaik adalah agar dekstrosa kentang, dengan agar Czapek di tempat kedua, tetapi untuk pemulihan Aspergillus dan Penicillium, agar Czapek adalah yang memberikan tingkat pemulihan tertinggi.

Referensi

1. Dávila M, dkk. Aktinomisetes antagonis terhadap jamur fitopatogenik penting pertanian. Rev. Mex. Ilmu. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Tersedia di: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Wheats Á. Isolasi galur Aspergillus niger yang menghasilkan okratoksin A pada kopi hijau yang disimpan (Coffea arabica). Rev. Mex. Mikrofon. 2010; 32: 63-68. Tersedia di.scielo.org.
3. Kontributor Wikipedia. Media Czapek. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 13 Januari 2019, 20:30 UTC. Tersedia di: en.wikipedia.org
4. Laboratorium Conda Pronadisa. Agar Czapek-Dox yang dimodifikasi. Tersedia di: condalab.com
5. Microkit Media Budaya. Agar Czapek-Dox. Diosponible di: Medioscultivo.com