The setrimid agar atau setrimid adalah media kultur padat selektif dirancang untuk isolasi Pseudomonas aeruginosa. Ini didasarkan pada penampilan produksi pigmen karakteristik spesies ini dan dibuat dari modifikasi agar Tech, yang dibuat oleh King, Ward dan Raney.
Formula aslinya mengandung garam magnesium klorida, kalium sulfat, gelatin pencernaan pankreas, dan agar-agar. Modifikasi formula terdiri dari penambahan setrimida (setil trimetil amonium bromida) dan gliserol.
Cetrimide agar diunggulkan dengan Pseudomonas aeruginosa Sumber: BiotechMichael, dari Wikimedia Commons
Agar setrimida berguna untuk studi mikrobiologi dari sampel yang dicurigai adanya Pseudomonas aeruginosa. Perlu dicatat bahwa bakteri ini sangat penting, karena meskipun merupakan bagian dari mikrobiota lingkungan normal, ia sering berperilaku sebagai patogen oportunistik.
Oleh karena itu, salah satu masalah yang paling sering ditimbulkan oleh kuman ini adalah infeksi nosokomial, yaitu yang terjadi di lingkungan rumah sakit yang menyerang pasien yang sistem kekebalannya tertekan.
Di sisi lain, karena afinitas mikroorganisme ini dengan kelembapan, target kontaminasi yang paling rentan adalah: alat bantu pernapasan, obat-obatan, nebulizer, sumber air, AC, disinfektan, larutan sabun, larutan suntik, luka terbuka. , kateter, saluran kemih, antara lain.
Dalam hal ini, agar setrimida berguna untuk melakukan kontrol mikrobiologis dan kultur ke elemen yang disebutkan sebelumnya.
Dasar
Agar setrimida didasarkan pada kemampuan media untuk mendorong pertumbuhan P. aeruginosa, merangsang produksi pigmennya, dan pada gilirannya menghambat pertumbuhan mikroorganisme lain.
Properti ini karena fungsi masing-masing komponennya. Pepton gelatin yang ada berfungsi sebagai sumber nitrogen, vitamin dan mineral. Gliserol atau gliserin bekerja sebagai sumber karbon.
Sedangkan setrimida (cetyl trimethyl ammonium bromide) merupakan zat yang menghambat pertumbuhan bakteri selain P. aeruginosa, termasuk spesies lain yang termasuk dalam genus yang sama.
Penghambatan terjadi karena cetramide bertindak sebagai deterjen kationik, yang menyebabkan ketidakstabilan membran plasma sebagian besar bakteri, kecuali P. aeruginosa dan beberapa bakteri lain yang berhasil bertahan.
Di sisi lain, mengandung magnesium klorida dan kalium sulfat. Senyawa tersebut merangsang ekspresi fenotipik terkait kemampuan Pseudomonas aeruginosa dalam menghasilkan berbagai pigmen, antara lain: pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin, dan fluorescein. Terakhir, ini mengandung agar-agar, yang memberikan konsistensi yang solid.
Penafsiran
Interpretasi pertumbuhan yang diperoleh dalam agar ini dilakukan sebagai berikut:
Pengamatan koloni bulat dan halus dengan tepi teratur, dengan produksi pigmen biru kehijauan, hijau, coklat atau kemerahan, ditambah emisi bau buah (aminoacetophenone), merupakan hasil dugaan adanya bakteri ini dalam sampel tersebut.
Di sisi lain, pengamatan pigmen kuning kehijauan yang cerah pada koloni merupakan indikasi P. aeruginosa bila lempeng tersebut terkena sinar ultraviolet.
Fluoresensi koloni P. aeruginosa pada agar setrimida di bawah sinar ultraviolet.
Perlu dicatat bahwa setiap warna yang diamati disebabkan oleh produksi pigmen tertentu. Pigmen biru-hijau berhubungan dengan produksi pyocyanin, hijau menjadi pyoverdin, kemerahan menjadi pyorubin, coklat menjadi pyomelanine, dan fluoresensi kuning-hijau cerah di bawah sinar UV menjadi fluorescein.
Persiapan
Timbang 43 g media dehidrasi dan larutkan dalam air suling. Tambahkan 10 ml gliserol. Ambil campuran tersebut ke sumber panas. Biarkan mendidih selama beberapa menit sampai larut sempurna.
Autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Diamkan dan sajikan dalam cawan petri yang steril bila suhu sekitar 50 ° C.
Biarkan mengeras, terbalik, pesan dalam plaqueros dan simpan di lemari es sampai digunakan. Cawan agar setrimida harus dikeluarkan dari lemari es sebelum penyemaian dan dibiarkan mencapai suhu kamar.
PH akhir media harus 7,2 ± 0,2.
Warna media dehidrasi berwarna krem dan sediaannya putih buram.
Aplikasi
Semua jenis sampel yang diduga mengandung Pseudomonas aeruginosa dapat disemai pada agar setrimida. Oleh karena itu, berguna di semua bidang mikrobiologi (lingkungan, industri, klinis, air dan makanan).
Sangatlah penting untuk menganalisis lingkungan rumah sakit dan dengan demikian dapat menerapkan tindakan korektif, karena mikroorganisme ini menjangkau pasien melalui peralatan, obat-obatan, larutan dan persediaan yang terkontaminasi yang digunakan oleh pasien.
Dengan cara ini, mikroorganisme dapat menginfeksi saluran pernafasan bagian bawah, saluran kemih dan luka pasien yang mengalami imunosupresi.
Penghitungan koloni P. aeruginosa juga dapat dilakukan pada uji batas mikroba.
Ditabur
Agar setrimida dapat digunakan sebagai kultur primer. Pelat diinokulasi pada salah satu ujungnya dan dari sana ia didistribusikan melalui pengosongan ke seluruh pelat. Sampel cairan dapat disemai di permukaan dengan spatula drigalski.
Pelat diinkubasi secara aerob pada suhu 37 ° C selama 24 jam inkubasi.
Batasan
-Sebagian kecil strain Pseudomonas aeruginosas tidak menghasilkan pyocyanin, sehingga negatif palsu dapat diinterpretasikan.
-Beberapa spesies Pseudomonas yang penting secara klinis dihambat dalam media ini.
-Meskipun mengamati karakteristik yang dijelaskan untuk Pseudomonas aeruginosa, mereka harus dikuatkan dengan tes identifikasi tambahan. Tes yang tidak boleh dilewatkan adalah tes oksidase, harus positif.
-Beberapa Enterobacteriaceae dapat tumbuh di media ini dan mengembangkan pigmen kuning, tetapi berbeda dengan Pseudomonas aeruginosa di mana ketika pelat terkena sinar ultraviolet tidak ada fluoresensi.
- Serratia marcescens berhasil mengembangkan dan menghasilkan pigmen berwarna merah muda.
-Jika pelat yang diunggulkan dengan agar setrimida terpapar selama beberapa waktu pada suhu kamar, strain P. aeruginosa dapat kehilangan fluoresensi yang diamati di bawah sinar ultraviolet, namun properti tersebut pulih jika diinkubasi lagi pada suhu 37 ° C.
QA
Untuk menganalisis performansi yang baik dari agar setrimida dapat digunakan strain kontrol seperti: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Hasil yang diharapkan adalah:
- Pertumbuhan yang baik untuk P. aeruginosa, dengan pigmen biru-hijau dan fluorescein positif.
- S. maltophilia dan S. aureus akan dihambat sebagian hingga seluruhnya.
- Escherichia coli diharapkan dapat dihambat sepenuhnya.
Referensi
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Phenotypic dan karakterisasi serologis isolat klinis Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Laboratorium Conda Pronadisa. Basis agar setrimida. 2014. Tersedia di: condalab.com
- Laboratorium Britannia. Agar setrimida. 2015. Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium BD. BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Tersedia di: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA Cetrimide agar. 2009. Tersedia di: http://f-soria.es