BHI AGAR: ALAS BEDAK, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The BHI agar atau Otak Jantung Infusion agar media adalah budaya yang solid gizi. Dalam bahasa Spanyol kami menyebutnya sebagai agar infus jantung otak. Ini adalah media kultur non-selektif, yang berarti bahwa semua jenis bakteri Gram positif dan Gram negatif dapat berkembang, serta beberapa jamur ragi dan berserabut.

Ini terdiri dari infus otak dan jantung anak sapi, hidrolisat peptik dari jaringan hewan, hidrolisat pankreas dari kasein, natrium klorida, glukosa, disodium fosfat dan agar.

Piring BHI. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.

Perlu dicatat bahwa BHI agar merupakan salah satu media kultur yang paling sering digunakan di laboratorium bakteriologi. Ini dapat digunakan tanpa suplemen sebagai kultur primer, subkultur koloni yang diperoleh pada media selektif lain atau untuk pemeliharaan strain di laboratorium.

Di sisi lain, ini merupakan media yang ideal untuk digunakan sebagai bahan dasar dalam pembuatan media yang diperkaya, seperti agar darah dan agar coklat. Keduanya ideal untuk mengisolasi mikroorganisme yang menuntut dari sudut pandang nutrisi. Namun, perlu dicatat bahwa karena mengandung glukosa, ini tidak sesuai untuk mengamati pola hemolisis.

Demikian pula agar BHI dapat digunakan untuk pembuatan media khusus isolasi mikroorganisme patogen yang sulit tumbuh pada media umum, antara lain: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae dan Histoplasma capsulatum.

Dengan aditif antibiotik, BHI agar menjadi media selektif untuk isolasi cendawan.

Dasar

Ini adalah media kultur bergizi untuk mengisolasi mikroorganisme yang sedang menuntut, dan pengayaannya dapat ditingkatkan dengan penambahan darah dan suplemen nutrisi lainnya.

Ini adalah media kultur non-selektif, oleh karena itu memungkinkan pertumbuhan sebagian besar bakteri Gram positif dan Gram negatif, serta beberapa jamur. Namun, dapat dibuat selektif dengan penambahan antibiotik.

Mediumnya berisi infus otak dan jantung betis, hidrolisat peptik jaringan hewan dan hidrolisat pankreas kasein; Semua senyawa ini berperan sebagai sumber vitamin, asam amino, nitrogen, dan karbon.

Glukosa adalah karbohidrat yang memberikan energi kepada mikroorganisme setelah difermentasi. Sementara itu, natrium klorida dan disodium fosfat menjaga keseimbangan osmotik dan memberikan pH mendekati netralitas. Akhirnya, agar-agar memberikan konsistensi padat medium.

Persiapan

Timbang 52 gram media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Bawa campuran ke sumber panas sampai mendidih, aduk terus selama proses pelarutan.

Piring atau irisan agar BHI dapat dibuat tanpa bahan tambahan.

Wedges

Untuk persiapan irisan, sajikan hingga setengah dari setiap tabung terisi, tutup dan sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit, saat dibiarkan, taruh di alas sampai mengeras. Kemudian simpan di lemari es sampai digunakan.

BHI memotong untuk bacterioteca. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil.

Piring

Campuran terlarut diautoklaf pada 121 ° C selama 15 menit, biarkan dingin hingga 50 ° C dan 20 ml medium disajikan dalam cawan Petri steril. Mereka dibiarkan mengeras, dibalik dan disimpan di lemari es sampai digunakan. Biarkan piring mencapai suhu kamar sebelum penyemaian.

PH media harus tetap pada 7,4 ± 0,2.

Media mentah berwarna krem ​​dan media yang disiapkan berwarna kuning muda.

Persiapan agar darah

Setelah media disterilkan, dinginkan hingga suhu kira-kira 45 sampai 50 ° C, kemudian tambahkan darah (50 ml), aduk perlahan untuk menghomogenkan, dan sajikan secara aseptik 20 ml di setiap cawan petri. Jika gelembung terbentuk di piring, api yang lebih ringan harus segera melewati gelembung untuk menghilangkannya.

Demikian juga, media khusus dapat dibuat dengan menambahkan aditif yang sesuai ketika campuran mencapai suhu 45 hingga 50 ° C.

Mediumnya tetap merah ceri.

Aplikasi

Gunakan tanpa suplemen

Agar BHI tanpa aditif berguna sebagai kultur primer dan untuk menabur strain mikroorganisme rendah atau sedang untuk identifikasi selanjutnya.

Karena ini adalah media berwarna terang, sangat ideal untuk mengamati pigmen dan, karena tidak mengandung zat yang mengganggu, beberapa uji biokimia, seperti oksidase dan katalase, dapat dilakukan di atasnya, atau uji biokimia lainnya dapat dipasang dari koloni dari ini agar.

Demikian juga, irisan agar BHI banyak digunakan untuk pemeliharaan strain selama waktu tertentu di laboratorium (bacterioteca).

Pelat atau irisan yang diunggulkan pada permukaan dengan strain bakteri diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam. Sedangkan pada cendawan suhu dan waktu inkubasinya akan tergantung dari jenis cendawan yang dicari.

Sebagai base agar untuk sediaan media lain

Dengan basis ini, media yang diperkaya dan selektif dapat disiapkan.

Diperkaya

Fungsi utamanya adalah sebagai dasar pembuatan agar darah untuk penggunaan rutin di laboratorium mikrobiologi. Terutama, basis BHI yang kondusif untuk isolasi Streptococcus sp. Namun, memiliki kekurangan yaitu tidak sesuai untuk mengamati pola hemolisis karena mengandung glukosa.

Ini juga digunakan dalam persiapan agar darah kelinci atau kuda untuk isolasi Haemophilus sp. Untuk hasil terbaik, suplemen pengayaan (IsoVitaleX) dapat ditambahkan.

Jika sampel berasal dari saluran pernapasan, bacitracin dapat ditambahkan ke agar untuk menghambat flora yang menyertainya dan meningkatkan kemungkinan pemulihan Haemophilus sp.

Sebagai alternatif, agar darah (domba atau manusia) dengan telurit sistin dapat dibuat untuk mengisolasi Corynebacterium diphtheriae. Demikian juga, berguna untuk menyiapkan agar darah kelinci, dengan tambahan sistin dan glukosa untuk isolasi Francisella tularensis.

Pembibitan plat agar darah dilakukan dengan cara kelelahan dan diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24-48 jam dalam mikroaerofilisitas (5-10% CO ₂ ).

Selektif

Media ini dengan penambahan antibiotik dapat menggantikan agar Sabouraud untuk isolasi jamur.

Kombinasi agar BHI dengan kloramfenikol - gentamisin atau penisilin -, streptomisin, dan darah kuda sangat ideal untuk isolasi Histoplasma capsulatum.

Bergantung pada mikroorganisme yang akan diisolasi, inkubasi pada suhu 35-37 ° C atau pada suhu kamar di aerobiosis dianjurkan. Terkadang inkubasi diperlukan di kedua rentang suhu, menggunakan 2 pelat untuk ini.

Beberapa jamur seperti Trichophyton mentagrophytes harus diinkubasi pada suhu kamar hingga 7 hari.

QA

Dari setiap batch yang disiapkan, direkomendasikan untuk menginkubasi 1 piring atau irisan pada suhu 37 ° C selama 24 jam dan verifikasi bahwa tidak ada pertumbuhan; Ini terutama penting saat menyiapkan agar darah, karena ini adalah media yang mudah terkontaminasi.

Di sisi lain, kualitas media dapat dievaluasi dengan menginokulasi strain standar yang diketahui atau bersertifikat dan mengamati perkembangannya.

Dalam hal ini, untuk mengevaluasi agar BHI tanpa aditif, strain Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 atau Candida albicans ATCC 10231 dapat digunakan, diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam. Dalam semua kasus, diharapkan pertumbuhan yang memuaskan.

Strain Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, atau Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 dapat diunggulkan untuk mengevaluasi piring agar darah.

Strain bakteri diinkubasi pada suhu 37 ° C secara mikroaerofilis selama 24 jam, sedangkan jamur diinkubasi pada suhu kamar dalam ruang lembab hingga 7 hari. Pertumbuhan yang memuaskan diharapkan dalam semua kasus.

Referensi

1. Laboratorium Britannia. Agar Infus Jantung Otak. 2015. Tersedia di: britanialab.com.
2. Laboratorium BD. Agar Brain Heart Infusion (BHI). 2013. Tersedia di: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Agar Infus Jantung Otak. 2009.
4. Laboratorium Neogen. Agar Infus Jantung Otak. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Blood agar: alas bedak, penggunaan dan persiapan. 2018. Tersedia di: lifeder.com.
6. Kontributor Wikipedia. Infus jantung otak. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 19 September 2018, 03:58 UTC. Tersedia di: wikipedia.org. Diakses 2 Maret 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.