BAIRD PARKER AGAR: ALAS BEDAK, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The agar Baird Parker adalah selektif medium padat dan budaya diferensial. Itu dibuat pada tahun 1962 untuk mendeteksi dan menghitung stafilokokus koagulase positif (Staphylococcus aureus).

Itu terdiri dari hidrolisat pankreas dari kasein, ekstrak daging, ekstrak ragi, lithium klorida, glisin, natrium piruvat, kalium telurit, agar dan emulsi kuning telur.

Koloni khas Staphylococcus aureus pada agar Baird Parker. Sumber: Daizy John

Baird Parker Agar didasarkan pada kemampuan S. aureus untuk mereduksi telurit dan menghasilkan lesitinase. Kedua sifat tersebut menghasilkan koloni dengan ciri khusus untuk spesies ini. Oleh karena itu, sangat efektif dalam mendeteksi mikroorganisme ini.

Koloni khas S. aureus berwarna hitam atau abu-abu tua, dengan batas tidak berwarna dan lingkaran cahaya yang mengelilinginya, membedakannya dari mikroorganisme lain. Patogen ini dapat ditemukan dalam sampel klinis, air, kosmetik, dan makanan mentah atau matang.

Diagnosis atau pendeteksiannya sangat penting, karena berbagai patologi yang dihasilkannya, seperti keracunan makanan, sindrom kulit melepuh, sindrom syok toksik, abses, meningitis, septikemia, endokarditis, dan lain-lain.

Dasar

Kekuatan bergizi

Kasein hidrolisat pankreas, ekstrak daging, dan ekstrak ragi merupakan sumber nutrisi, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk perkembangan mikroba secara umum, sedangkan piruvat dan glisin adalah senyawa yang mendukung pertumbuhan spesifik Staphylococcus aureus.

Selektif

Baird Parker Agar selektif karena mengandung zat yang menghambat pertumbuhan flora yang menyertainya, sekaligus mendorong perkembangan S. aureus. Senyawa penghambatnya adalah litium klorida dan kalium telurit.

Diferensial

Media ini memungkinkan untuk membedakan S. aureus dari sisa stafilokokus koagulase negatif. S. aureus memiliki kemampuan mereduksi telurit menjadi telurium hitam metalik, membentuk koloni hitam atau abu-abu tua.

Demikian pula, kuning telur menyediakan substrat untuk menunjukkan keberadaan enzim lesitinase dan lipase. S. aureus adalah lesitinase positif dan oleh karena itu lingkaran cahaya yang jelas akan diamati di sekitar koloni, yang menunjukkan bahwa lesitin terhidrolisis.

Dalam hal ini, tampilan agar-agar koloni hitam mengkilap atau abu-abu tua dengan lingkaran cahaya di sekelilingnya menunjukkan adanya S. aureus.

Jika zona pengendapan terbentuk, itu menunjukkan aktivitas lipase. Beberapa strain S. aureus adalah lipase positif dan yang lainnya negatif.

Jika S. aureus memiliki lipase positif, daerah buram akan diamati di sekitar koloni hitam atau abu-abu tua, dan kemudian lingkaran cahaya karena aksi lesitinase.

Koloni bakteri selain S. aureus yang mampu tumbuh pada media ini akan membentuk koloni tidak berwarna atau coklat tanpa lingkaran halo di sekitarnya.

Koloni hitam atipikal juga dapat dilihat dengan atau tanpa batas tidak berwarna, tetapi tanpa lingkaran cahaya. Koloni-koloni ini tidak boleh diperhitungkan, mereka tidak sesuai dengan S. aureus.

Persiapan

Emulsi kuning telur

Ambil telur ayam segar, cuci bersih dan masukkan ke dalam alkohol 70% selama 2 sampai 3 jam. Telur kemudian dibuka secara aseptik dan putih telur dipisahkan dengan hati-hati dari kuningnya. Setelah itu diambil 50 ml kuning telur dan dicampur dengan 50 ml larutan fisiologis steril.

Kalium telurit 1% b / v

Beberapa rumah komersial menjual 1% kalium telurit siap pakai. Itu ditambahkan ke media sebelum media mengeras.

Untuk menyiapkan larutan ini di laboratorium, 1,0 g kalium telurit ditimbang dan dilarutkan dalam satu bagian air. Selanjutnya jumlah air diisi hingga mencapai 100 ml. Solusinya harus disterilkan dengan metode filtrasi.

Persiapan media kultur

Timbang 60 g media dehidrasi dan larutkan dalam 940 ml air suling. Biarkan campuran tersebut selama kurang lebih 5-10 menit.

Terapkan panas dengan sering mengaduk media untuk meningkatkan proses pelarutan. Didihkan sebentar. Sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit.

Diamkan hingga mencapai suhu 45 ° C dan tambahkan 50 ml emulsi kuning telur dan 10 ml telurit 1%. Aduk rata dan tuangkan 15-20 ml ke dalam cawan Petri steril.

Biarkan mengeras, pesan dibalik dalam plak dan simpan di lemari es sampai digunakan.

PH akhir dari media yang disiapkan harus 6,8 ± 0,2.

Sebelum menabur sampel, tunggu piring mencapai suhu kamar. Benih piring dengan menggores atau dengan penyemaian permukaan dengan spatula Drigalski.

Warna media dehidrasi adalah cokelat muda dan media yang disiapkan berwarna kuning muda.

Menggunakan

Sampel klinis

Sampel klinis ditaburkan secara langsung, membuang sebagian bahan di salah satu ujung pelat, dan dari sana bahan itu tercoreng oleh kelelahan. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 35-37 ° C.

Sampel makanan

Timbang 10 gr sampel makanan dan homogenkan dalam 90 ml air pepton 0,1%, dari sana pengenceran disiapkan jika perlu. Inokulasi piring dalam rangkap tiga dengan 0,3 ml larutan yang sudah disiapkan, dan benih di permukaan dengan spatula Drigalski. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 35-37 ° C.

Metodologi ini memungkinkan untuk menghitung koloni tipikal yang diperoleh dan ideal jika keberadaan S. aureus dicurigai di atas 10 CFU per g / ml sampel.

Jika diduga S. aureus jumlahnya sedikit atau terdapat banyak flora yang menyertainya, disarankan untuk memperkaya sampel dalam kaldu kedelai triptikase dengan NaCl 10% dan natrium piruvat 1%. Ini akan mendorong pertumbuhan S. aureus dan menghambat perkembangan flora yang menyertainya. Tabung keruh diunggulkan pada agar Baird Parker.

Sampel air

Dalam sistem filtrasi vakum yang disterilkan, 100 ml air studi disaring, dan kemudian membran mikropori 0,4 mikron dilepas dengan tang steril dan diletakkan di atas piring Baird Parker. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 35-37 ° C. Teknik ini memungkinkan penghitungan koloni S. aureus yang khas.

QA

Strain yang diketahui seperti Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 atau Proteus mirabilis ATCC 43071 dapat digunakan untuk mengevaluasi kualitas agar Baird Parker.

Dalam kasus strain S. aureus ATCC, diketahui dapat mereduksi telurit, dan mereka positif lipase dan lesitinase. Oleh karena itu, harus ada perkembangan yang memuaskan dan tumbuh koloni cembung dengan pusat hitam dan batas tidak berwarna, dengan lingkaran cahaya buram dan halo terluar terang.

Pada bagiannya, S. epidermidis diperkirakan akan berkembang buruk pada medium ini, dengan koloni abu-abu kecoklatan sampai hitam, tanpa lingkaran cahaya.

Untuk E. coli dan P. mirabilis diharapkan terhambat seluruhnya atau sebagian. Dalam kasus pertumbuhan, koloni coklat akan berkembang tanpa area buram atau lingkaran cahaya.

rekomendasi

-Media tidak boleh dipanaskan setelah menambahkan telurit dan kuning telur.

-Persiapan emulsi kuning telur dan penambahannya di tengah merupakan langkah yang sangat rentan terhadap kontaminasi. Sangat hati-hati harus dilakukan.

-Jika terdapat koloni khas S. aureus, itu harus dikonfirmasi dengan memasang uji koagulase pada strain tersebut.

-Jika ada hasil yang meragukan dengan koagulase, tes konfirmasi lainnya harus dipasang.

-Hati-hati untuk tidak mengacaukan keberadaan koloni S. aureus tipikal dengan koloni hitam atipikal.

Referensi

1. Kontributor Wikipedia. Agar Baird-Parker. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 15 Maret 2017, 19:36 UTC. Tersedia di: wikipedia.org/ Diakses pada 18 Februari 2019.
2. Laboratorium BD. Baird Parker Agar. 2006. Tersedia di: bd.com
3. Laboratorium Britannia. Basis agar Baird Parker. 2015. Tersedia di: britanialab.com
4. Laboratorium Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. Tersedia di: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratorium Britannia. Potasium telurit. 2015. Tersedia di: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Pembawa Staphylococcus aureus enterotoksigenik tipe A, pada apusan nasofaring pada penjamah makanan. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Perjanjian Standar Venezuela 1292-89. (1989). Makanan. Isolasi dan pencacahan Staphylococcus aureus. Tersedia di: sencamer.gob.ve