The bismuth sulfit agar adalah selektif medium padat dan budaya diferensial, diformulasikan khusus untuk isolasi Salmonella enterica subspesies enterica serotipe Typhi, di antara spesies lain dari Salmonella. Media ini dikenal sebagai agar BSA karena akronimnya dalam Bahasa Inggris Bismuth Sulfite Agar.
Formula asli untuk bismuth sulfite agar dibuat pada tahun 1927 oleh Wilson dan Blair (Glukosa Bismuth Sulphite Iron Medium); itu mengandung natrium sulfit, glukosa, larutan bismut, amonium sitrat, besi sulfat, dan agar-agar.
Pertumbuhan 48 jam inkubasi Salmonella sp pada bismuth sulfite agar. Sumber: Pixnio.com Penulis: Dr. WR Erving, USCDCP
Saat ini ada modifikasi media aslinya, terdiri dari ekstrak daging, daging dan pepton kasein, indikator bismut sulfit, glukosa, disodium fosfat, sulfat besi, hijau terang dan agar-agar.
Ada banyak cara untuk mengisolasi spesies Salmonella, tetapi dalam hal pemulihan serotipe Typhi, bismuth sulfite agar memiliki keunggulan penting di atas mereka, karena sebagian besar pemulihan mikroorganisme ini sangat rendah atau tidak ada. .
Namun, perlu menggunakan lebih dari satu jenis media saat mencoba mengisolasi enteropatogen, karena agar bismut sulfit kurang efektif untuk spesies Salmonella lain dan untuk genus Shigella, yang terhambat atau berkembang sangat buruk. di agar ini.
Perlu dicatat bahwa dari semua spesies Salmonella, serotipe Typhi adalah salah satu enteropatogen terpenting pada manusia, ini menjadi satu-satunya reservoir. Serovar ini menyebabkan demam tifoid, gastroenteritis, bakteremia, dan septikemia.
Oleh karena itu, perlu memasukkan agar-agar ini saat menganalisis sampel air, feses, atau makanan yang dicurigai keberadaannya.
Dasar
Seperti kebanyakan media kultur, Bismuth Sulfite Agar mengandung nutrisi untuk mendorong pertumbuhan bakteri, seperti pepton dan ekstrak daging. Begitu pula glukosa berfungsi sebagai sumber energi dan karbon.
Namun, tidak semua bakteri akan tumbuh pada media ini, karena Bismuth Sulfite Agar adalah media selektif. Ini mengandung senyawa yang menghambat pertumbuhan mikroorganisme Gram positif dan bakteri Gram negatif tertentu. Senyawa tersebut adalah: indikator bismuth sulfite dan hijau terang.
Disodium fosfat menjaga osmolaritas dan pH medium.
Selain itu, agar bismuth sulfite adalah media diferensial berkat keberadaan ferrous sulfate, yang menunjukkan pembentukan H 2 S. H 2 S yang dibentuk oleh bakteri bereaksi dengan ferrous sulfate dan membentuk endapan hitam tak larut yang terlihat jelas.
Akhirnya, agar-agar memberikan konsistensi padat ke media.
Persiapan
Timbang 52,3 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air. Panaskan adonan hingga mendidih selama 1 menit dengan sering diaduk, hingga benar-benar larut. Jangan terlalu panas. Media ini tidak dapat diautoklaf, karena panas yang ekstrim merusak media kultur.
Biarkan dingin hingga 45 ° C dan kocok sebelum disajikan dalam cawan petri steril. Dianjurkan untuk membuat pelat dengan ketebalan yang baik. Untuk melakukan ini, 25 ml harus dituangkan ke dalam setiap piring. Biarkan mengeras. Karena ini adalah media yang tidak disterilkan, disarankan untuk segera digunakan.
Namun, penelitian yang dilakukan oleh D'aoust pada tahun 1977, menunjukkan bahwa pemulihan Salmonella typhimurium dan Salmonella enteritidis lebih baik sebagai usia medium bismuth sulfit agar, tidak mempengaruhi kinerja untuk serovars Typhi dan Paratyphi B.
D'aoust merekomendasikan penggunaan pelat pada hari ke-4 pendinginan, meskipun ia memperingatkan bahwa seiring bertambahnya usia, selektivitas menurun, dan strain Proteus vulgaris berkembang lebih mudah.
Untuk alasan ini, untuk sampel yang sangat terkontaminasi, seperti tinja, lebih disukai menggunakan media yang baru disiapkan. Jika tidak, gunakan pada hari ke-4 persiapannya. Penulis lain merekomendasikan menggunakan piring sehari setelah persiapannya, disimpan di lemari es.
Pelat yang didinginkan harus diaduk sebelum digunakan. PH media harus 7,5 ± 0,2. Media mentah berwarna krem dan media yang disiapkan berwarna opalescent abu-abu kehijauan.
Aplikasi
Diantara sampel yang dapat ditanam pada media ini adalah sampel feses, air minum atau limbah dan makanan.
Untuk memperbaiki isolat, disarankan untuk melakukan perlakuan pra-pengayaan dengan kaldu laktosa dan setelah pengayaan dengan kaldu tetrationat atau kaldu selenit sistin, sebelum disemai pada agar bismut sulfit.
Pelat diinkubasi pada 35 ° C ± 0,2 selama 24 sampai 48 jam, dalam aerobiosis.
Karakteristik koloni pada bismuth sulfite agar
Koloni Salmonella Typhi biasanya terlihat pada agar-agar ini dalam waktu 24 jam dengan pusat hitam dan dikelilingi oleh lingkaran hijau terang. Padahal, dalam waktu 48 jam berubah menjadi hitam total karena terbentuknya hidrogen sulfida.
-Media ini menghambat sebagian besar spesies dari genus Shigella.
- S. Typhi dan S. arizonae dapat memberikan koloni yang sangat mirip.
-Koliform penghasil H 2 S seperti Proteus dan Citrobacter menghasilkan koloni yang mirip dengan Salmonella, sehingga perlu dilakukan uji identifikasi biokimia.
- Striasi yang baik harus dilakukan untuk mendapatkan koloni yang terisolasi; Ini adalah satu-satunya cara untuk mengamati ciri khas koloni dari genus Salmonella.
QA
Untuk kontrol sterilitas, plat yang tidak diinokulasi diinkubasi pada suhu 37 ° C, diharapkan tidak ada pertumbuhan atau perubahan warna.
Untuk kontrol kualitas, strain yang dikenal seperti:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli dan Shigella flexneri diharapkan terhambat sebagian dengan mengembangkan koloni coklat kehijauan dan coklat. Padahal, kedua salmonellas harus memiliki perkembangan yang sangat baik dengan koloni hitam dengan kilau logam, dan terakhir Enterococcus faecalis harus dihambat secara total.
Referensi
- Wilson, W., & EM McV. Blair. Penggunaan Medium Besi Bismut Sulfit Glukosa untuk Isolasi B. typhosus dan B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Diperoleh dari .jstor.org
- D'aoust JY. Pengaruh kondisi penyimpanan terhadap kinerja bismuth sulfite agar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Tersedia di: ncbi.nlm.nih.gov
- Laboratorium IVD. Bismuth-sulfite agar menurut WILSON-BLAIR. 2009. Tersedia di: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Laboratorium Himedia. Agar Bismuth Sulphite. 2017. Tersedia di: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G dan Ybarra M. Kualitas Bakteriologis Susu Kambing Mentah yang Diproduksi di Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54