PERSIAPAN MEDIA KULTUR: TUJUAN DAN LANGKAH - BIOLOGI - 2025

The preparasi media kultur adalah metodologi rutin digunakan di laboratorium untuk pertumbuhan mikroorganisme yang diinginkan. Media kultur adalah sediaan padat, cair atau semi padat yang memiliki semua nutrisi yang diperlukan untuk perkembangan populasi mikroba.

Secara umum sarana pembudidayaan mikroorganisme kaya akan protein dan asam amino dan biasanya mengandung beberapa komponen yang mendukung pertumbuhan organisme yang akan dipelajari, seperti vitamin, darah, serum, dan lain-lain.

Sumber: pixabay.com

Tidak ada media kultur umum atau universal, karena komposisinya bervariasi tergantung pada kebutuhan mikroorganisme yang diinginkan. Beberapa bakteri dapat tumbuh di media kultur apa pun, tetapi yang lain memiliki persyaratan khusus.

Terdiri dari apa?

Mikroorganisme, seperti jamur dan bakteri, tidak dapat dipelajari secara individual karena ukurannya yang kecil. Untuk alasan ini, mereka harus dibudidayakan dengan cara buatan yang memungkinkan peningkatan populasi yang signifikan.

Misalnya, jika kita ingin mempelajari bakteri, kita harus memberi mereka kondisi yang tepat sehingga mereka dapat berkembang biak dan membentuk koloni (yang dapat diamati dengan mata telanjang).

Penyiapan media kultur sangat bervariasi tergantung pada jenis mikroorganisme yang akan dibudidayakan. Sebelum menyiapkannya, perlu diketahui kebutuhan gizi dasar organisme kerja.

Komponen yang paling umum digunakan dalam media kultur akan dijelaskan di bawah ini untuk mendapatkan gambaran umum tentang persiapannya:

Agar

Ini digunakan dalam kultur sebagai agen pembentuk gel dan ditambahkan saat mencari media padat atau semi padat. Zat pemadat pertama yang digunakan dalam pembuatan media adalah gelatin, tetapi pada tahun 1883 agar diperkenalkan ke dunia bakteriologi oleh W. Hesse.

Agar bakteriologis memiliki komponen utamanya polisakarida dengan cabang kompleks yang diekstraksi dari alga. Senyawa ini digunakan sebagai pengental pada makanan umum seperti es krim dan selai.

Ini adalah elemen yang sangat berharga dalam mikrobiologi karena beberapa alasan. Terutama karena mikroorganisme tidak dapat mendegradasinya, ia mencair pada suhu 100 ° C dan tetap dalam keadaan cair hingga mencapai 45 ° C atau kurang.

Jika Anda ingin menyiapkan media padat, konsentrasi agar-agar harus sekitar 1,5%, sedangkan semipadat harus dibuat dari 0,3 hingga 0,5%.

Cairan

Budidaya organisme patogen membutuhkan cairan tubuh agar dapat berkembang sebagaimana mestinya di lingkungan alaminya. Untuk alasan ini, darah utuh atau defibrilasi ditambahkan. Cairan diambil dari hewan yang sehat dan, setelah disterilkan, ditambahkan ke media kultur.

Kutipan

Mereka diperoleh dari bagian hewan yang berbeda (seperti daging atau hati) atau sayuran (biji-bijian) dan diproses untuk mendapatkan konsentrat padat dalam bentuk pasta atau bubuk. Yang paling umum adalah ragi, malt, dan daging.

Pepton

Senyawa organik ini diperoleh dengan hidrolisis enzimatik atau kimiawi dari jaringan hewan atau tumbuhan. Tujuannya adalah untuk menambah kandungan yang kaya akan asam amino, yang merupakan unit dasar protein.

Peredam benturan

"Buffer" atau sistem penyangga menghindari perubahan mendadak pada pH dan membantu menjaga kisaran optimal yang dapat ditoleransi oleh tubuh.

Kebanyakan organisme dapat berkembang dengan baik pada pH 7, meskipun beberapa bakteri lebih menyukai media alkali. Namun, ada bakteri yang menolak variasi pH antara nilai 6 dan 9.

Pada spesies yang sensitif terhadap pH, kerusakan tidak disebabkan oleh jumlah ion hidrogen atau hidroksil yang berlebihan, tetapi oleh peningkatan asam atau basa lemah yang dapat masuk ke dalam sel.

Demikian pula, indikator pH ditambahkan untuk memantaunya dan menghindari penyimpangan yang disebabkan oleh fermentasi atau proses lainnya.

tujuan

Tujuan utama saat menyiapkan media kultur adalah untuk menambahkan semua komponen yang diperlukan untuk memungkinkan keberhasilan perkembangan organisme diisolasi. Kombinasi paling efektif dari komponen dan nutrisi untuk mencapai media yang diinginkan harus diidentifikasi.

Persiapan dan penyimpanan media sangat penting untuk memastikan keberhasilan pertumbuhan, karena komposisi media dan ketersediaan nutrisi bergantung pada langkah-langkah ini.

Perlu diperhatikan bahwa budidaya mikroorganisme merupakan tugas yang dipengaruhi oleh beberapa faktor di luar media kultur, seperti intensitas cahaya yang diterima, suhu dan tingkat keasaman atau alkalinitas media. Oleh karena itu, masing-masing variabel tersebut harus diperhitungkan.

Jenis media

Berdasarkan komposisinya

Berdasarkan komposisinya, terdapat tiga jenis tanaman utama: media alami atau empiris, semi-sintetik, dan sintetis atau kimia tertentu.

Lingkungan alami

Di lingkungan alami, komposisi pastinya tidak diketahui. Ini termasuk bahan-bahan seperti susu, darah encer, jus sayuran, ekstrak dan infus daging dan pepton. Untuk alasan ekonomi, komponen murah seperti ekstrak kedelai, whey, molase, dll sering ditambahkan.

Media semi sintetis

Ini disebut media semi-sintetik jika komposisinya diketahui sebagian. Setiap media yang mengandung agar-agar menjadi media semi sintetis.

Diantaranya kami memiliki agar kentang dekstrosa, agar czapek-dox, agar oat, agar pepton daging, dan beberapa contoh lainnya.

Medium berbahan sintetis atau kimiawi

Dalam hal ini komposisi media - dalam hal jumlah sumber karbon, nitrogen, sulfur, fosfor dan faktor pertumbuhan lain yang dibutuhkan - sepenuhnya diketahui. Ini sangat berguna jika Anda ingin mendapatkan hasil yang dapat direproduksi untuk peneliti lain.

Untuk apa yang disebut "mikroorganisme dengan persyaratan pertumbuhan khusus", perlu menambahkan komponen yang diperlukan. Contoh dari jenis ini adalah Lactobacillus.

Berdasarkan jenis mikroorganisme

Demikian pula terdapat klasifikasi lain untuk media kultur berdasarkan jenis mikroorganisme yang dapat tumbuh di atasnya. Mengikuti prinsip ini kami memiliki cara umum, pengayaan, selektif dan diferensial berikut. Masing-masing dijelaskan di bawah ini:

Media umum

Ini mendukung perkembangan berbagai macam mikroorganisme. Jika ada organisme yang membutuhkan kondisi khusus untuk pertumbuhannya, ia tidak akan berhasil berkembang dalam jenis budaya ini.

Media pengayaan

Media pengayaan mendukung pertumbuhan jenis mikroorganisme tertentu, tetapi tidak ada zat yang ditambahkan untuk mencegah jenis mikroba lain tumbuh di dalamnya.

Media selektif

Mereka mencari pertumbuhan spesifik suatu mikroorganisme, sebut saja jamur, bakteri, protozoa, dan lain-lain. Untuk melakukan ini, mereka menghambat perkembangan orang lain.

Untuk mencapai tujuan ini, dapat ditambahkan senyawa kimia yang mematikan bagi kelompok mikroorganisme yang luas dan tidak berbahaya bagi organisme yang diinginkan atau sumber energi yang hanya dapat diasimilasi oleh mikroba target dapat ditambahkan.

Media selektif digunakan saat mengambil sampel medis untuk menumbuhkan mikroorganisme patogen. Di sini perlu untuk mendorong pertumbuhan patogen dan menghambat perkembangan flora mikroba normal dari pasien.

Bismuth sulfite agar, misalnya, tidak memungkinkan tumbuhnya bakteri gram positif dan sejumlah besar bakteri yang ditemukan di rongga gastrointestinal. Untuk alasan ini, digunakan untuk membudidayakan bakteri gram negatif penyebab demam tifoid, Salmonella typhi dalam sampel tinja.

Media diferensial

Jenis ini menggunakan beberapa karakteristik diagnostik dari organisme yang diinginkan (keanehan dalam metabolismenya, misalnya) untuk dapat mengidentifikasinya terhadap spesies lain yang tumbuh di lingkungan yang sama.

Baik media diferensial dan media selektif sangat berguna di bidang mikrobiologi klinis dan kesehatan masyarakat, karena disiplin ilmu ini perlu mendeteksi keberadaan mikroorganisme spesifik yang terkait dengan patologi atau kondisi kebersihan yang buruk.

Zat indikator dapat ditambahkan ke kultur yang memberikan ciri khas pada koloni yang dicari. Misalnya, laktosa dan indikator pH ditambahkan ke agar-eosin-metilen biru (EMB disingkat) dan agar MacConkey.

Jadi, ketika koloni berkembang di media ini dengan kemampuan untuk memfermentasi laktosa dan menghasilkan aldehida, mereka dapat diamati dalam warna khusus.

Langkah

Saat ini media kultur dapat dibeli dalam bentuk liofilisasi. Oleh karena itu, persiapannya lebih mudah dan satu-satunya yang harus dilakukan adalah merehidrasi produk. Isi harus ditimbang (dengan mempertimbangkan jumlah akhir yang akan disiapkan) dan dilarutkan dalam air suling mengikuti semua indikasi produk.

Isi media cair harus dibagi ke dalam wadah yang diinginkan (cawan petri, tabung, dll) untuk sterilisasi selanjutnya. Untuk mendistribusikan media padat, perlu melelehkannya menggunakan microwave atau memasukkan bahan ke penangas air. PH media harus disesuaikan.

Biasanya agar-agar digunakan dalam tabung reaksi atau cawan petri. Jika agar-agar mengeras dalam posisi miring, dengan sudut yang tepat sehingga tepi terminal akhir berbentuk diagonal, susunan ini disebut tabung paruh atau tabung miring. Ketika agar-agar mengeras dalam posisi vertikal total, itu disebut "dalam".

Setelah mensterilkan media - menggunakan autoclave - media dibiarkan dingin. Ini harus ditangani di lingkungan yang bebas dari mikroorganisme, yang paling umum adalah bekerja dengan pemantik api yang memastikan lingkungan aseptik di sekitarnya.

Referensi

1. Celis, JE (2006). Biologi sel: buku pegangan laboratorium (Vol. 2). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baron, EJ, Fineglod, SM, & Scott, EG (1991). Bailey Scott: diagnosis mikrobiologis. Pan-American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Manual Praktik Mikrobiologi I dan II serta Parasitologi. Universitas Otonomi Ciudad Juarez.
4. Schlegel, HG, & Zaborosch, C. (1993). Mikrobiologi umum. Cambridge University Press.
5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Case, CL (2007). Pengantar mikrobiologi. Panamerican Medical Ed.