PEWARNAAN NEGATIF: ALASAN, TEKNIK, KELEBIHAN DAN KEKURANGAN - BIOLOGI - 2025

The pewarnaan negatif adalah metode pewarnaan khusus untuk menyoroti kehadiran kapsul di beberapa mikroorganisme , terutama Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae dan Cryptococcus neoformans-, dari spesimen klinis atau kultur murni.

Sampel langsung yang biasa digunakan untuk mengaplikasikan pewarnaan negatif adalah cairan serebrospinal. Teknik ini merupakan alternatif cepat untuk diagnosis dugaan meningitis, terutama Cryptococcus neoformans.

A. Gigi tartar diwarnai dengan tinta India, B. Cryptococcus neoformans var gatti dienkapsulasi dengan lemah seperti yang terjadi di alam, menggunakan nigrosin. C. Cryptococcus neoformans var gatti dengan kapsul tebal yang ditemukan dalam bentuk parasit, menggunakan nigrosin. D. Cryptococcus neoformans dengan tinta India yang sedikit diencerkan. Gisell Quinde, dari Wikimedia Commons / CDC, melalui Wikimedia Commons / Kredit Foto: Penyedia Konten: CDC / Dr. Leanor Haley, melalui Wikimedia Commons

Demikian juga, noda ini dapat diaplikasikan pada dahak dan cairan steril secara umum, serta pada strain yang diperoleh dari kultur murni muda. Teknik ini menggunakan tinta nigrosine atau India untuk pelaksanaannya; oleh karena itu, ini adalah metodologi yang sangat sederhana dan ekonomis untuk diterapkan yang memberikan informasi tentang nilai diagnostik yang hebat dalam waktu singkat.

Dalam pengertian ini, setiap laboratorium mampu melakukan pewarnaan ini. Tentu saja, laboratorium harus memiliki personel yang kompeten yang mampu mengenali ragi Cryptococcus neoformans yang terisolasi atau sedang bertunas dan membedakannya dari leukosit dan artefak yang mungkin ada dalam sampel.

Dasar

Tinta Nigrosine dan India bekerja dengan cara yang sama; oleh karena itu, salah satu dari dua zat dapat digunakan secara bergantian.

Teknik ini disebut pewarnaan negatif karena tindakannya berlawanan dengan teknik pewarnaan lainnya. Dalam hal ini, yang tetap tidak berubah adalah struktur yang sedang dicari atau yang ingin dilihat; yaitu mikroorganisme.

Oleh karena itu, pewarnaan didasarkan pada pewarnaan bagian bawah smear dengan warna gelap. Dalam skenario ini, struktur berkapsul akan menonjol dalam warna terang atau tidak berwarna.

Secara umum, ragi bersifat refringen, dikelilingi oleh lingkaran cahaya bening yang sesuai dengan kapsul. Ini terjadi karena tinta India dan nigrosin adalah zat yang tidak dapat menembus polisakarida yang menyusun kapsul mikroorganisme hidup.

Perlu dicatat bahwa struktur lain yang mungkin terdapat dalam sampel langsung, seperti leukosit atau sel darah merah, tidak dapat menembus.

Namun jika mikroorganisme mati maka zat pewarna dapat menembus di dalamnya, sehingga pewarnaan ini juga berguna untuk mengevaluasi viabilitas mikroorganisme tersebut.

Teknik

bahan

Nigrosine

Nigrosine mendapatkan namanya dari warna hitam yang dimilikinya. Ini adalah zat sintetis yang diperoleh dari pemanasan campuran senyawa organik -seperti nitrobenzine, anilin dan anilin hidroklorit-, menggunakan katalis (besi atau tembaga) dalam reaksi tersebut.

Tinta Cina

Tinta Cina adalah zat yang digunakan terutama oleh orang Asia untuk menulis, membuat karya seni, dan lukisan monokromatik. Ini sangat populer dalam budaya Tiongkok.

Ini diperoleh dari tinta cumi-cumi yang dicampur dengan arang bubuk, produk dari pembakaran pohon berdaya rendah.

Dimungkinkan juga untuk menyiapkannya dari jelaga dari pembakaran hidrokarbon (minyak nabati), bersama dengan gelatin protein yang memberikan konsistensi yang tepat untuk menghindari pengendapan partikel karbon.

Spesifikasi untuk pengambilan sampel

- Tidak perlu puasa.

- Sampel cairan serebrospinal, sputum atau cairan steril harus mengandung sedikitnya 1 ml volume dan harus segera dipindahkan ke laboratorium pada suhu kamar.

- CSF dan sampel cairan steril harus diambil oleh dokter spesialis.

- Ini juga bisa menjadi kultur murni dari strain yang mencurigakan yang terkait dengan patogen yang disebutkan di atas.

Eksekusi teknik dengan sampel langsung

- Sampel harus disentrifugasi, kemudian supernatannya dibuang dan sedimen diambil.

- Setetes material yang disentrifugasi (sedimen) dan setetes tinta India atau nigrosine ditempatkan pada slide yang bersih.

- Ini harus dicampur dengan baik dan ditutup dengan lembaran penutup, memungkinkan tetesan menyebar sebagai film tipis tanpa melewati tepinya.

- Selanjutnya preparasi dipasang di mikroskop.

- Jika sediaan terlalu gelap, bisa diencerkan dengan air.

Eksekusi teknik dengan strain dari budaya

- Sebagian kecil dari budaya muda diambil dengan jarum penyemaian dan dilarutkan dalam setetes tinta India yang sebelumnya ditempatkan pada slide bersih.

- Penutupan ditempatkan di atas.

- Itu diamati di mikroskop pada 10X dan kemudian pada 40X.

Anda juga dapat melarutkan sebagian koloni dalam air suling, dan dari sana mengambil setetes dan mencampurnya dengan tinta India. Dengan cara ini, sediaan tidak akan terlalu tebal, sehingga memungkinkan untuk mengamati struktur secara terpisah; jika ada orang banyak, itu tidak akan terpantau dengan baik.

Metodologi lainnya adalah sebagai berikut:

- Tempatkan setetes budaya suspensi di salah satu ujung slide.

- Tempatkan setetes nigrosine di ujung yang sama dan aduk.

- Dengan bantuan kaca objek lain, sebarkan sampel seolah-olah membuat apusan hematologis.

- Biarkan mengering dan amati di bawah mikroskop.

Pengamatan mikroskop

Anda harus terlebih dahulu fokus dengan tujuan 10X untuk mendapatkan tampilan lapangan yang luas. Selanjutnya harus diupayakan jika ada ruang yang kosong; jika ada, fokuskan 40X untuk melihat detailnya.

Keuntungan

- Mudah dieksekusi.

- Ini adalah teknik yang tidak mahal.

- Metode ini tidak mengharuskan noda dioleskan ke panas atau dengan bahan kimia; oleh karena itu, mikroorganisme diamati tanpa distorsi.

- Sediaan segar tidak perlu dikeringkan, sehingga dapat diamati langsung, menghasilkan hasil dengan cepat.

Kerugian

Setelah dirakit, persiapan baru harus segera diamati; jika dibiarkan mengering maka tidak dapat diamati lagi dan harus dipasang yang baru.

Pewarnaan jaringan dengan tinta India

Fungsi lain yang dapat dipenuhi tinta India adalah di laboratorium patologi. Ini diterapkan pada sampel jaringan yang diekstraksi dengan pembedahan untuk menandai margin reseksi tumor.

Jaringan yang ditandai disemprot dengan asam asetat. Ini bertindak sebagai mordan dan mencegah tinta bocor saat jaringan menjalani pemrosesan rutin untuk persiapan biopsi.

Prosedurnya terdiri dari mandi jaringan dengan alkohol dan xylene, dan kemudian merendamnya dalam lilin parafin. Penandaan ini memandu ahli patologi saat mengamati jaringan, yang menunjukkan di mana margin reseksi bedah atau tempat menarik lainnya berada.

Referensi

1. «Nigrosina». Wikipedia, ensiklopedia gratis. 11 Jul 2017, 22:46 UTC. 6 Jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Tinta Cina". Wikipedia, ensiklopedia gratis. 1 Okt 2018, 03:08 UTC. 6 Jan 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J dan kolaborator. (2006). Tenaga Kerja dari komunitas otonom Extremadura. Agenda Khusus Volume IV. Editorial MAD. Seville-Spanyol, hlm 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Teknisi laboratorium spesialis, Galician Health Service (SERGAS). Mata kuliah khusus volume 2. Editorial MAD. Seville-Spanyol, hlm 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA