PEWARNAAN KINYOUN: DASAR PEMIKIRAN DAN TEKNIK - BIOLOGI - 2025

The Kinyoun pewarnaan adalah teknik pewarnaan yang digunakan untuk bakteri noda dan parasit alkohol tahan asam. Itu lahir dari modifikasi pewarnaan Ziehl-Neelsen; Kedua teknik diinterpretasikan dengan cara yang sama tetapi berbeda dalam dua elemen: dalam pembuatan reagen utama dan teknik Kinyoun tidak menggunakan panas.

Karena alasan ini juga dikenal sebagai noda dingin Ziehl-Neelsen atau Kinyoun yang dimodifikasi dingin. Diindikasikan untuk pewarnaan Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atipikal mycobacteria, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris dan Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum diwarnai dengan noda Kinyoun. Punlop Anusonpornperm, dari Wikimedia Commons

Perlu dicatat bahwa Nocardias sangat lemah dengan teknik ini karena sebagian tahan asam-alkohol, jadi untuk genus ini ada modifikasi metodologi.

Selanjutnya, teknik Kinyoun dingin telah digabungkan dengan teknik trikrom yang dimodifikasi oleh Didier untuk mendeteksi coccidia (Cryptosporidium parvum dan Isospora belli) dan spora mikrosporidia (Enterocytozoon bieneusi dan Encephalitozoon intestinalis).

Dasar

Reagen pewarnaan utama adalah carbolfuchsin atau carbol fuchsin, yang memiliki sifat mengikat asam karbol yang ada di dalam dinding sel lilin kaya lipid (asam mikolat) dari mikobakteri dan parasit tertentu.

Ikatan ini tidak dilawan oleh pemutih asam; oleh karena itu, mikroorganisme didefinisikan sebagai tahan asam.

Berbeda dengan teknik Ziehl-Neelsen -yang memperbaiki pewarna melalui panas-, dalam teknik Kinyoun langkah ini tidak diperlukan, karena larutan karbol fuchsin yang disiapkan untuk teknik ini mengandung fenol konsentrasi tinggi.

Fenol melarutkan bahan lipid di dinding sel, memungkinkan pewarna karbolfuchsin masuk. Setelah pewarna menembus, itu tetap diperbaiki meskipun pencucian alkohol asam.

Dengan cara ini, mikroorganisme tahan asam memiliki karakteristik warna merah, sedangkan segala sesuatu yang tidak tahan asam berubah warna dan bernoda biru.

Teknik

bahan

- Modifikasi carbol fuchsin.

- Alkohol-asam.

- Metilen biru.

Persiapan karbol fuchsin Kinyoun

- Fuchsin dasar: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Air suling: 100 ml.

Fuchsin dasar harus dilarutkan perlahan dalam alkohol, terus bercampur. Selanjutnya, fenol yang mengkristal dilebur dalam penangas air pada suhu 56 ° C. Setelah larut, 8 ml ditambahkan ke larutan fuchsin yang disiapkan di atas.

Persiapan asam-alkohol

- Asam klorida pekat: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Itu harus diukur, digabungkan dan dicampur.

Persiapan pewarna kontras biru metilen

- Metilen biru: 0,3 g.

- Air suling: 100 ml.

Itu ditimbang dan dilarutkan.

Teknik pewarnaan Kinyoun

1- Siapkan apusan langsung dari sampel, yang dapat berupa sputum, cairan paru-paru, endapan urin, cairan serebrospinal atau feses, antara lain; atau dari suspensi mikroorganisme yang diperoleh dari koloni murni yang dikembangkan di media kultur primer.

2- Perbaiki noda dengan panas.

3- Letakkan apusan pada jembatan pewarnaan dan tutup dengan reagen karbol fuchsin Kinyoun yang telah disiapkan. Biarkan istirahat selama 3 sampai 5 menit.

4- Cuci dengan air suling.

5 - Bleach dengan alkohol asam selama 3 menit dan cuci kembali dengan air suling.

6- Bleach lagi dengan acid alcohol selama 1 atau 2 menit sampai tidak ada lagi pewarna yang terbawa.

7- Cuci dengan air suling dan biarkan mengering, letakkan slide dalam posisi vertikal.

8- Tutupi preparat dengan biru metilen dan biarkan selama 4 menit.

9- Cuci dengan air suling dan biarkan mengering.

10- Periksa pada 40X dan kemudian pada 100X.

Untuk meningkatkan dan mempercepat pewarnaan mikroorganisme tahan asam, tambahkan 1 tetes zat pembasah (seperti Tergitol No. 7) ke dalam 30 atau 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Beberapa laboratorium mengubah pewarna kontras biru metilen menjadi hijau terang atau asam pikrat; yang pertama memberi warna hijau pada latar belakang dan yang kedua menghasilkan warna kuning.

Teknik Kinyoun Khusus untuk Nocardias

Untuk memperbaiki pewarnaan bakteri dari genus Nocardia digunakan modifikasi pewarnaan Kinyoun. Tekniknya adalah sebagai berikut:

1- Tutupi noda dengan Kinyoun carbol fuchsin selama 3 menit.

2- Cuci dengan air suling.

3- Hilang sebentar dengan alkohol asam yang disiapkan 3% sampai tidak ada lagi pewarna yang terbawa.

4- Cuci kembali dengan air suling.

5- Tutupi preparat dengan biru metilen dan biarkan bekerja selama 30 detik.

6- Cuci dengan air suling dan biarkan mengering.

Teknik carbol gabungan fuchsin dan trikrom dimodifikasi oleh Didier

Teknik ini direkomendasikan untuk analisis sampel tinja coccidia dan spora Microsporidium pada waktu yang bersamaan. Prosedur yang harus diikuti adalah sebagai berikut:

1- Tutupi noda dengan Kinyoun carbol fuchsin selama 10 menit.

2- Hapus pewarna dan cuci dengan air suling.

3- Pemutih selama 30 detik dengan alkohol asam klorida.

4- Cuci kembali dengan air suling.

5- Tutupi noda dengan larutan trichrome selama 30 menit pada suhu 37 ° C.

6- Cuci dengan air suling.

7- Pemutih selama 10 detik dengan alkohol asam asetat.

8- Cuci apusan selama 30 detik menggunakan etanol 95%.

QA

Sebagai kontrol positif, apusan dengan strain Mycobacterium tuberculosis disiapkan dan diwarnai dengan reagen yang disiapkan untuk memverifikasi bahwa bakteri memiliki warna yang sesuai (fuchsia merah).

Kontrol negatif juga dapat digunakan dengan menyiapkan noda dengan regangan apa pun selain alkohol asam dengan cepat, sehingga memverifikasi bahwa seluruh sampel memiliki warna yang kontras.

Teknik Kinyoun dibandingkan dengan teknik Ziehl-Neelsen

Teknik Kinyoun lebih sederhana karena menghilangkan langkah pemanasan, tetapi keuntungan utamanya adalah menghindari emisi uap, yang sangat beracun dan menyebabkan kanker dalam jangka panjang. Karenanya, noda Kinyoun lebih aman untuk pewarnaan personel.

Penting untuk diperhatikan bahwa perawatan harus dilakukan agar reagen tidak bersentuhan langsung dengan kulit, karena bersifat korosif dan pemutih mudah terbakar.

Adapun kerugiannya, hapusan negatif tidak selalu menunjukkan bahwa organisme tersebut tidak ada. Selain itu, adanya puing-puing seluler dapat menyebabkan hasil positif palsu, yang menyebabkan kebingungan dalam diagnosis.

Referensi

1. Kimia Klinik Terapan. (2016). BK Kinyoun Kit. Tersedia di: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Pewarnaan Kinyoun dan dua Coccidia pada HIV. Jurnal Kedokteran MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Kontributor Wikipedia. "Noda Kinyoun." Wikipedia, ensiklopedia gratis. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8 Februari 2018. Web. 5 Januari 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Implementasi teknik pewarnaan untuk diagnosis simultan Coccidia dan Microsporidia. Institut Kebersihan Universitas Republik. Montevideo. Uruguay. Tersedia di: hygiene.edu.uy