SAFRANIN: KARAKTERISTIK, PENGGUNAAN, TEKNIK, TOKSISITAS - KIMIA - 2025

The safranin adalah pewarna meriquinoide, nama untuk struktur kimianya memiliki dua cincin benzenoid dan 2 cincin quinoid, yang terakhir menjadi orang-orang yang memberikan warna merah.

Ini juga disebut dimetil safranin atau merah dasar 2 dalam bentuk pendeknya, karena nama ilmiahnya adalah 3,7-diamino-2,8-dimethyl-5-phenyl-phenaziniumchloro dimethyl safranin dan rumus kimianya adalah C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Struktur kimia safranin menunjukkan cincin benzenoid dan kuinoid / Larutan safranin dalam air. Sumber: NEUROtiker diedit oleh MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Ada varian yang disebut trimetil-safranin tetapi tidak ada perbedaan signifikan antara kedua zat tersebut.

Safranin adalah pewarna monokromatik dan, tergantung pada karakteristik rumus kimianya, merupakan zat bermuatan positif. Oleh karena itu, ia memiliki afinitas untuk struktur bermuatan negatif. Struktur ini akan diwarnai merah.

Properti ini memberikan penerapan dalam banyak teknik histologis untuk mewarnai berbagai struktur seluler, baik organisme eukariotik dan prokariotik.

Safranin digunakan sebagai pewarna kontras dalam teknik penting dan terkenal untuk penggunaan rutin dalam bakteriologi. Teknik tersebut antara lain: pewarnaan Gram-Hucker, pewarnaan Schaeffer Fulton untuk spora atau pewarnaan kapsul bakteri, antara lain.

karakteristik

Warna kunyit (bumbu yang didapat dari stigma bunga Crocus sativus) menjadi inspirasi untuk menamai pewarna ini. Dari istilah saffron muncullah nama safranin. Ini karena warna kunyit sangat mirip dan pewarna yang diberikan pewarna ini.

Safranin tersedia dalam bentuk kristal atau bubuk, keduanya dapat larut dalam air. Pewarna safranin tidak berbau. Noda struktur merah. Struktur yang menarik pewarna safranin disebut safranofil.

Safranin secara struktural kompleks, ia memiliki dua cincin benzenoid di ujungnya dan di tengahnya terdapat dua cincin kuinoid tempat ditemukan kation N ⁺ . Bagian tengah struktur adalah sistem yang bertugas memberikan warna. Karena karakteristik ini, pewarna ini diklasifikasikan dalam kategori II.

Menggunakan

Safranin digunakan untuk mewarnai berbagai struktur. Terutama menyoroti sel Kulchitsky yang ada di saluran gastrointestinal, juga disebut sel enterochromaffin.

Ia mampu menodai mikroorganisme milik keluarga Rickettsiaceae. Demikian juga, digunakan dalam berbagai teknik, seperti metode Koster, modifikasi yang digunakan untuk menodai bakteri dari genus Brucella.

Di sisi lain, safranin digunakan dalam teknik pewarnaan spora Schaeffer Fulton dan pewarnaan Gram-Hucker. Dalam kedua teknik tersebut, safranin bekerja sebagai pewarna kontras.

Yang pertama, spora berwarna hijau perunggu dan sisa strukturnya berwarna merah oleh safranin. Kedua, bakteri Gram negatif kehilangan warna kristal violet pada tahap perubahan warna, oleh karena itu safranin yang mewarnai bakteri Gram negatif menjadi merah.

Selain itu, safranin digunakan dalam bakteriologi untuk membuat media Brucella agar dengan pengenceran safranin 1: 5000. Media ini berfungsi untuk membedakan spesies Brucella suis dari spesies lainnya. Brucella melitensis dan Brucella abortus tumbuh pada media ini tetapi B. suis terhambat.

Di bidang agroindustri, safranin telah digunakan sebesar 2,25% dan diencerkan 1:10 untuk pewarnaan sampel batang dari tanaman tebu.

Tanaman ini umumnya terkena bakteri Leifsonia xyli subsp. xyli, yang merusak xilem tanaman. Batang yang diwarnai dievaluasi untuk menentukan fungsi pembuluh xilem.

Teknik di bidang bakteriologi

Pewarnaan Castañeda untuk pewarnaan hujan

Apusan darah atau jaringan ditempatkan dalam larutan buffer (buffer fosfat pH 7.6). Biarkan mengering secara spontan lalu tutup dengan metilen biru selama 3 menit dan lapisi dengan safranin. Rickettsiae diwarnai biru, kontras dengan latar belakang merah.

Pewarnaan Koster dimodifikasi untuk

Sebuah noda dibuat dan dinyalakan di korek api untuk fiksasi. Selanjutnya ditutup dengan campuran 2 bagian safranin encer jenuh dengan 3 bagian larutan 1 mol / L KOH, selama 1 menit. Pencucian dilakukan dengan air suling dan pewarnaan ulang dengan 1% carbolic methylene blue.

Jika sampel mengandung bakteri dari genus Brucella, maka akan tampak oranye dengan latar belakang biru.

Pewarnaan kapsul bakteri

Campuran suspensi bakteri dibuat dengan tinta India dan safranin ditambahkan. Di bawah mikroskop, lingkaran kemerahan akan muncul di sekitar setiap kapsul bakteri dengan latar belakang hitam.

Pewarnaan spora

Penyebaran dibuat dengan suspensi bakteri. Kemudian diperbaiki menjadi panas. Itu ditutupi dengan 5% malachite green, sering menyala sampai keluarnya uap. Proses ini diulangi selama 6-10 menit. Terakhir, dicuci dengan air dan diwarnai dengan safranin 0,5% selama 30 detik. Basilus berwarna merah dan spora berwarna hijau.

Pewarnaan Gram-Hucker

Apusan dibuat dengan suspensi bakteri dan difiksasi dalam panas. Tutupi kaca objek dengan kristal violet selama 1 menit. Kemudian lugol ditempatkan sebagai larutan mordan selama 1 menit. Selanjutnya, diputihkan dengan alkohol aseton dan akhirnya diwarnai dengan safranin selama 30 detik.

Bakteri gram positif berwarna ungu kebiruan dan bakteri gram negatif berwarna merah.

Beberapa laboratorium telah berhenti menggunakan teknik Gram-Hucker untuk mengadopsi teknik Gram-Kopeloff yang dimodifikasi. Yang terakhir, safranin diganti dengan fuchsin dasar. Ini karena safranin dengan lemah menodai spesies dari genera Legionella, Campylobacter dan Brucella.

Teknik di bidang histologi

Pewarnaan sel Kulchitsky (enterochromaffins)

Bagian jaringan dari saluran gastrointestinal diwarnai dengan perak klorida. Ini kemudian dihilangkan warna dengan natrium tiosulfat dan akhirnya diwarnai dengan safranin.

Sel Kulchitsky dibedakan dengan adanya butiran coklat kehitaman.

Pewarnaan osteoartritis

Karena safranin memiliki muatan positif, ia mengikat sangat baik pada gugus karboksil dan sulfat dari glikosaminoglikan. Ini adalah bagian dari proteoglikan yang membentuk tulang rawan artikular. Dalam hal ini, saat pewarnaan dengan safranin O, dimungkinkan untuk mengidentifikasi apakah ada kehilangan tulang rawan atau tidak.

Hilangnya jaringan tulang rawan dapat diukur dengan menggunakan skala Mankin atau disebut juga dengan skala osteoartritis.

Tekniknya dijelaskan di bawah ini: bagian histologis direndam dalam nampan dengan larutan hematoksilin besi Weigert, kemudian dilewatkan melalui alkohol asam dan dicuci dengan air.

Lanjutkan proses pewarnaan dengan merendam lembaran dalam warna hijau cepat, dicuci dengan asam asetat dan sekarang direndam dalam safranin O. Untuk menyelesaikan prosesnya, lembaran didehidrasi menggunakan alkohol pada konsentrasi yang berbeda dalam urutan naik. Langkah terakhir membutuhkan xylene atau xylene agar sampel dapat diklarifikasi.

Slide dikondisikan dengan Canada balsam atau serupa untuk diamati di bawah mikroskop.

Dengan teknik ini, nukleus diwarnai hitam, tulang hijau dan tulang rawan tempat proteoglikan ditemukan berwarna merah.

Pewarnaan untuk identifikasi makroalga

Pérez et al pada tahun 2003 mengusulkan teknik yang sederhana dan murah untuk mewarnai makroalga. Sampel disiapkan dalam bagian histologis parafin. Bagian-bagiannya diperbaiki dengan gliserin 1%, memungkinkannya mengering sepenuhnya. Kemudian ditempatkan dalam xilol untuk menghilangkan parafin.

Bagian tersebut direhidrasi dengan melewatkannya melalui serangkaian baki yang berisi etanol dalam berbagai tingkat konsentrasi (urutan menurun), selama 2 menit di masing-masing baki.

Selanjutnya diwarnai selama 5 menit dengan campuran 3: 1 safranin 1% dengan 1% toluidine blue, keduanya dibuat dengan ethanol 50%. Tiga tetes asam pikrat ditambahkan ke dalam campuran, yang bertindak sebagai mordan.

Kemudian dehidrasi dengan melewati baki alkohol lagi, tapi kali ini dengan cara naik. Terakhir dibilas dengan xylol dan sampel disiapkan dengan Canada balsam untuk diamati.

Toksisitas

Untungnya, safranin merupakan pewarna yang tidak merepresentasikan bahaya bagi yang menanganinya. Ini adalah pewarna yang tidak berbahaya, tidak karsinogenik dan tidak mudah terbakar.

Kontak langsung dengan kulit atau mukosa dapat menyebabkan sedikit kemerahan di area tersebut, tanpa komplikasi besar. Untuk ini, disarankan untuk mencuci area yang terkena dengan banyak air.

Referensi

1. García H. Colorante safranina O. Teknisi di bidang kesehatan, 2012; 1 (2): 83-85. Tersedia di: medigraphic.com
2. Pewarnaan Gil M. Gram: alas bedak, bahan, teknik dan kegunaan. 2019. Tersedia di: lifeder.com
3. Pewarnaan Gil M. Spore: alasan, teknik dan penggunaan. 2019. Tersedia di: lifeder.com
4. Safranina. " Wikipedia, ensiklopedia gratis. 7 Mar 2017, 10:39 UTC. 3 Agustus 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Teknik pewarnaan yang berguna dalam interpretasi anatomi Gracilariopsis tenuifrons dan Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Tersedia di: scielo.org.
6. Gereja Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Hubungan fungsionalitas pembuluh xilem dan keberadaan Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Veg Protection. 2007; 22 (1): 65-65. Tersedia di: scielo.sld