REAKSI XANTHOPROTEIN: ALASAN, PROSEDUR, PENGGUNAAN - KIMIA - 2025

The reaksi xanthoprotein adalah prosedur kimia yang digunakan untuk menentukan ada atau tidak adanya asam amino aromatik, seperti tirosin dan triptofan, yang dapat dalam bentuk bebas atau merupakan protein yang larut, peptida atau polipeptida.

Ini juga telah digunakan untuk mendeteksi zat beracun dalam darah yang mengandung gugus benzena dalam strukturnya. Tes ini juga dikenal sebagai reaksi xanthoprotein Becher.

Reaksi xanthoprotein positif Sumber: Diambil dari video: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Reaksi xanthoprotein menggunakan asam nitrat pekat, panas, dan alkali penetral. Jika larutan berubah dari kuning menjadi jingga setelah reaksi dinetralkan, pengujian dianggap positif. Pewarnaan yang diamati disebabkan oleh pembentukan senyawa nitrogen yang berasal dari nitrifikasi gugus benzena.

Jika jumlah protein total perlu diukur, maka perlu menggunakan metode penentuan protein lain, seperti Biuret.

Reaksi xanthoprotein digunakan terutama ketika zat-zat yang sedang dianalisis komposisi kimianya tidak diketahui. Reaksi ini biasanya merupakan bagian dari serangkaian tes yang akan membantu menentukan komposisi kimia dari zat atau ekstrak tertentu. Itulah mengapa banyak digunakan oleh para peneliti.

Di sisi lain, reaksi xanthoprotein Bekher digunakan untuk mendeteksi zat fenolik dan indol dalam darah, sehingga memungkinkan untuk memprediksi kemunculan nefropati, sebelum parameter lain selanjutnya ditingkatkan.

Dasar

Reaksi tersebut pada dasarnya mendeteksi keberadaan gugus benzen, baik dalam asam amino, maupun dalam protein dan peptida. Asam nitrat bekerja pada cincin benzen dari asam amino yang memilikinya, membentuk senyawa fenolik nitro.

Reaksi membutuhkan panas untuk dilakukan, umumnya terbentuk endapan yang menutupi medium, mengubahnya menjadi seperti susu. Endapan bisa berwarna putih atau kuning. Terakhir, ini membutuhkan langkah alkalisasi yang menonjolkan warna. Untuk ini, basa seperti 40% natrium hidroksida atau amonia digunakan.

Reaksi akan diinterpretasikan sebagai positif jika warna kuning yang kuat diamati selama proses pemanasan atau oranye tua saat reaksi menjadi basa. Asam amino yang dideteksinya sebagian besar adalah tirosin dan triptofan.

Reaksi xanthoprotein. Sumber: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

Dalam kasus fenilalanin, meskipun merupakan asam amino aromatik, inti benzena dari asam amino ini sulit dinitrasi dalam reaksi sederhana, oleh karena itu, ia akan mengeluarkan reaksi positif negatif atau lemah.

Secara umum, tes xanthoprotein dapat dilengkapi dengan tes Hopkins-Cole, yang digunakan untuk mengidentifikasi triptofan secara spesifik. Jika uji xanthoprotein positif dan uji Hopkins-Cole negatif, keberadaan triptofan dalam larutan tersebut dikesampingkan, yang terutama menunjuk pada keberadaan tirosin. Selain itu, dapat juga dilengkapi dengan reaksi Millon untuk mendeteksi tirosin, antara lain.

Reaksi ini juga dapat digunakan pada sampel darah, plasma atau serum desalbuminasi untuk diagnosis uremia atau gagal ginjal. Dalam hal ini yang dicari adalah deteksi zat toksik (fenolik dan indol) yang dihasilkan dari pembusukan usus.

Zat ini memiliki gugus benzen dan karenanya memberikan reaksi xanthoprotein positif, meskipun zat yang bereaksi bukanlah asam amino atau protein.

Proses

- Reaksi xanthoprotein untuk mendeteksi asam amino dengan gugus aromatik

Tempatkan 1 ml sampel uji dalam tabung reaksi kering dan bersih.

-Tambahkan 0,5 ml asam nitrat pekat.

-Tambahkan campuran dalam penangas air pada suhu 70 ° C selama 2 menit. Sebelumnya siapkan penangas air pada suhu yang disebutkan.

-Ketika melepas tabung dari penangas air, dimungkinkan untuk mengamati bahwa larutan telah berubah menjadi seperti susu dan telah mengambil warna putih kekuningan tertentu.

-Solusi didinginkan dengan meneteskan air dingin di dasar tabung.

-Persiapan dibuat basa dengan menambahkan (setetes demi setetes) larutan natrium hidroksida 40% secara perlahan sampai ada perubahan warna.

-Jika tesnya positif, cincin oranye tua akan terbentuk di antarmuka cairan.

-Jika reaksinya negatif, tidak akan ada pembentukan warna.

- Reaksi xanthoprotein untuk mendeteksi zat fenolik dan indol dalam darah

-Dispense 5 cc 20% asam trikloroasetat pada 5 cc darah vena, plasma atau serum, yang terakhir paling diindikasikan. Aduk rata dan saring.

- 2 cc filtrat diambil dan dicampur dengan 0,5 cc asam nitrat. Kemudian dipanaskan sampai mendidih, untuk ini tabung ditempatkan langsung di atas nyala api selama 30 detik. Itu didinginkan dengan air dan 1,5 dari 33% natrium klorida ditambahkan.

Itu diartikan sebagai berikut:

-Hasil negatif: warna kekuningan.

-Hasil kuning lemon positif (+).

- (++) kuning keemasan.

- (+++) kuning tua sampai coklat

Ini juga dapat diinterpretasikan dengan menggunakan skala kolorimetri Autenrieth referensial, yang terdiri dari berbagai konsentrasi kalium dikromat. Ini dibuat dalam 10 dalam 10 pengenceran dari larutan stok 0,03874%. Setiap tabung mewakili persentase.

Skala interpretasi

Ada dua skala penafsiran yang disebut kuno dan modern. Nilai normalnya adalah:

Tabel lama: antara 75 hingga 85%

Meja modern: antara 15 hingga 25%

Jika warna tabung reaksi berada di tengah dua tabung standar, kedua pengukuran tersebut dirata-ratakan.

Larutan standar kalium dikromat dibuat sebagai berikut: 7,9 ml kalium dikromat 10 N diukur dan dibuat hingga 100 ml dalam labu ukur. Pengenceran diikuti seperti yang ditunjukkan pada tabel kolorimetri Autenrieth.

Tabel kolorimetri autenrieth. Sumber: Reaksi Vásquez A. Xanthoprotein. Jurnal klinis Spanyol. 1949; 35 (5): 326-327. Tersedia di: Elsevier

Menggunakan

Penggunaan reaksi xanthoprotein merupakan bagian dari serangkaian uji biokimia yang membantu untuk mengetahui komposisi kimia dari beberapa zat yang tidak diketahui. Tes ini berkontribusi pada analisis kimia untuk mendeteksi protein yang mengandung gugus benzena dalam strukturnya.

Reaksi ini banyak digunakan oleh para peneliti dalam berbagai penelitian tentang zat yang diminati.

Dalam pengertian ini, Vásquez-Jorge dan kolaborator menggunakan reaksi ini dan reaksi lainnya untuk menyelidiki kandungan protein cairan yang diekstraksi dari tiram bakau (Crassostrea rhizophorae).

Demikian juga, Rojas et al. (2009) menggunakan serangkaian tes, termasuk reaksi xanthoprotein, untuk menganalisis glycomacropeptides dalam endapan whey ricotta.

Di sisi lain, reaksi xanthoprotein Bekher telah dimodifikasi oleh Volhard untuk digunakan untuk tujuan lain. Dalam hal ini, untuk mendeteksi zat fenolik dan indol yang dapat meningkat jauh lebih awal (minggu atau bulan) sebelum kadar urea dan sisa nitrogen dalam darah meningkat.

Limbah beracun ini terbentuk dari pembusukan makanan di usus.

Zat-zat ini terakumulasi dalam darah ketika tidak dihilangkan dengan benar, oleh karena itu, tes xanthoprotein positif dapat memprediksi awal awal gagal ginjal atau keadaan uremia.

Bergantung pada intensitas warnanya, Anda dapat menentukan seberapa canggih warnanya. Dalam hal ini pengujiannya adalah kuantitatif.

Pada orang sehat tes ini memberikan warna kuning, sesuai dengan tingkat normal triptofan dan tirosin yang mungkin ada di dalam darah.

Sedangkan pada pasien ginjal, reaksi xanthoprotein sangat positif karena adanya zat berikut: fenol, indol, paracresol, asam oksi aromatik, dan lain-lain.

Tindakan pencegahan

Tes ini harus dilakukan oleh para profesional terlatih. Semua peraturan biosafety harus diperhatikan, karena reagen yang digunakan adalah asam dan basa korosif.

Jika secara tidak sengaja beberapa tetes asam nitrat jatuh ke kulit atau kuku, mereka akan menguning, karena kedua struktur tersebut mengandung protein. Selain itu, pada kulit dan selaput lendir menyebabkan luka bakar yang parah.

Jika terjadi kontak kulit, protokol yang harus diikuti adalah mencuci area segera dengan sabun dan air selama kurang lebih 20 menit.

Jika terciprat ke mata, harus dicuci dengan banyak air bersih, usahakan agar mata tetap terbuka.

Referensi

1. "Reaksi Xanthoprotein" Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2 Sep 2019, 17:49 UTC. 21 Okt 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Karakterisasi fisikokimia dan kandungan protein ekstrak cairan tiram bakau (Crassostrea rhizophorae). Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Tersedia di Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Isolasi dan kinerja GMP dengan pengendapan whey dengan asam trikloroasetat. Cient. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Tersedia di: ve.scielo.
4. Reaksi Vásquez A. Xanthoprotein. Jurnal klinis Spanyol. 1949; 35 (5): 326-327. Tersedia di: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Reaksi Bekher dan Andrewes dalam operasi saluran kemih. Layanan Urologi Rumah Sakit Spanyol. Jurnal urologi Argentina 395-404