EC KALDU: ALAS BEDAK, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The EC kaldu atau kaldu Escherichia coli adalah medium kultur cair selektif. Media ini direkomendasikan oleh Metode Standar untuk menghitung total dan fecal coliforms, dengan teknik angka paling mungkin (MPN) dalam sampel air dan makanan, di mana agen utama yang terlibat adalah Escherichia coli.

Kaldu EC terdiri dari triptein, laktosa, garam empedu, kalium fosfat, monopotasium fosfat, natrium klorida, dan air. Formulanya dirancang secara strategis untuk mendukung pertumbuhan total dan fecal coliforms serta mencegah perkembangan mikroorganisme lain yang menyertainya.

Representasi figuratif dari persiapan kaldu EC. Sumber: Pixabay.com

Bakteri Escherichia coli adalah fecal coliform utama yang hadir sebagai kontaminan dalam air dan sumber makanan, menjadi penyebab gangguan gastrointestinal yang penting.

Perlu dicatat bahwa ada banyak serotipe Escherchia coli; Diantaranya kita bisa menyebutkan enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) dan enteroaggregative (EAEC).

Media ini memiliki kemampuan untuk memungkinkan perkembangan semuanya, tetapi tanpa dapat membedakan satu sama lain. Ini membutuhkan pengujian tambahan.

Kajian mikrobiologi air dan pangan dengan angka kemungkinan paling besar (MPN) untuk mencari total dan fecal coliforms merupakan protokol yang terdiri dari beberapa tahapan; fase dugaan, fase konfirmasi dan fase penyelesaian. Kaldu EC digunakan dalam fase konfirmasi.

Dasar

Kaldu EC

Media EC didasarkan pada penyediaan elemen nutrisi yang diperlukan untuk perkembangan optimal dari total dan fecal coliforms, di mana bakteri Escherichia coli termasuk.

Unsur-unsur nutrisi ini disediakan oleh triptein, menjadi sumber peptida dan asam amino yang sangat baik. Selain itu, juga mengandung laktosa, karbohidrat yang dapat difermentasi yang memberikan energi dan memungkinkan untuk menunjukkan apakah bakteri menghasilkan gas.

Di sisi lain, media mengandung garam empedu yang memberikan sifat selektif, karena menghambat pertumbuhan mikroorganisme Gram positif yang mungkin ada dalam sampel.

Demikian juga, kalium fosfat dan monopotasium fosfat bertindak sebagai sistem penyeimbang pH. Sistem ini diperlukan, karena laktosa yang terkandung dalam kaldu cenderung mengasamkan medium saat difermentasi oleh mikroorganisme, namun hal ini dikompensasikan dengan garam fosfat.

Oleh karena itu, unsur-unsur ini penting, karena keasaman yang tidak terkontrol dapat mempengaruhi perkembangan mikroorganisme yang dicari.

Untuk bagiannya, natrium klorida menstabilkan media secara osmotik, sedangkan air adalah pelarut untuk zat terlarut yang ada dan memberikan konsistensi cairan ke media.

Kaldu EC Modifikasi Novobiocin

Okrend dan Rose menciptakan berbagai macam kaldu EC, yang disebut kaldu EC modifikasi novobiocin. Modifikasi terdiri dari pengurangan konsentrasi garam empedu dan penambahan 20 mg / dl novobiocin.

Modifikasi ini mendukung pemulihan strain Escherichia coli enterohemorrhagic (O157: H7).

Serotipe bakteri ini menyebabkan kolitis hemoragik parah yang dapat menyebabkan sindrom uremik hemolitik (HUS); yang selanjutnya dapat menyebabkan gagal ginjal akut, dengan angka kematian yang tinggi hingga mencapai 50% pada lansia.

Karena morbiditas dan mortalitas yang disebabkan setiap tahun oleh bakteri ini akibat konsumsi makanan yang terkontaminasi, Departemen Pertanian Amerika Serikat (USDA) sangat merekomendasikan penggunaan media ini.

Persiapan

Kaldu EC

Timbang 37,4 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran harus didiamkan selama 5 menit. Selanjutnya dalam sumber panas selesai dilarutkan dengan sering diaduk.

Setelah dilarutkan, itu didistribusikan ke dalam tabung reaksi yang telah dikondisikan dengan tabung Durham di dalamnya. Sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit.

PH medium harus 6,9 ± 0,2. Warna media dehidrasi berwarna krem ​​dan media yang disiapkan berwarna kuning muda.

Kaldu disimpan di lemari es sampai digunakan. Pada saat digunakan, kaldu harus dalam suhu ruangan.

Di sisi lain, kaldu EC juga bisa disiapkan dengan konsentrasi ganda.

Kaldu EC Modifikasi Novobiocin

Timbang 36,7 g medium dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Sisa persiapannya sama seperti yang dijelaskan di atas.

Menggunakan

Analisis total dan fecal coliform

Kaldu EC sangat ideal untuk fase konfirmasi studi koliform dengan metode NMP, baik dalam sampel air, maupun dalam produk farmasi dan makanan.

Kaldu laktosa penghasil gas yang keruh yang diperoleh pada fase dugaan harus dibuang kembali dalam 2% kaldu hijau terang empedu dan kaldu EC.

Untuk total coliform, EC broth diinkubasi secara aerob selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C, dan untuk fecal coliforms diinkubasi secara aerob selama 24 hingga 48 jam pada suhu 44 ° C.

Dalam kedua kasus itu diinterpretasikan sebagai berikut: tabung keruh dengan produksi gas dianggap positif. Jika tidak ada produksi gas dalam 24 jam, inkubasi berlanjut hingga 48 jam.

Kaldu EC positif masuk ke fase konfirmasi penuh, yang terdiri dari reseeding pada media selektif seperti agar Mac Conkey, agar EMB atau agar Endo.

Jika kaldu yang digunakan adalah EC yang dimodifikasi novobiocin, tabung positif direkomendasikan untuk disemai ulang pada agar Mac Conkey dengan sorbitol.

QA

Setiap batch media yang disiapkan harus dikontrol kualitasnya. Pertama, sterilitas media harus dievaluasi. Dalam hal ini, satu atau dua kaldu diinkubasi tanpa inokulasi dalam aerobiosis selama 24 jam pada suhu 37 ° C. Hasil yang diharapkan adalah kaldu transparan, tanpa kekeruhan atau perubahan warna.

Kedua, pertumbuhan strain yang diketahui harus dievaluasi, untuk itu bakteri berikut dapat digunakan: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dalam semua kasus, perkembangan mikroba yang memuaskan diharapkan, mengamati kaldu keruh dengan produksi gas untuk E. coli dan tidak ada gas untuk Salmonella.

Strain lain yang dapat dimasukkan dalam kontrol adalah: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Strain ini harus dihambat secara total.

rekomendasi

-Penempatan tabung Durham sangat penting untuk studi tentang coliform.

-Distribusikan media ke dalam tabung reaksi sebelum mensterilkan, jangan setelahnya.

-Jangan gunakan jika media sudah lebih dari 3 bulan.

-Jangan gunakan jika ada perubahan dalam karakteristik biasa dari media tersebut.

Referensi

1. Laboratorium Britannia. EC Medium. 2015. Tersedia di: britanialab.com
2. E. coli enterohemorrhagic. Pusat Ketahanan Pangan dan Kesehatan Masyarakat. 2010. Tersedia di: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Media EC. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Medium EC yang dimodifikasi Novobiocin. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Deteksi, isolasi dan karakterisasi Escherichia coli yang menghasilkan racun Shiga dari daging giling segar dari tukang daging di Concepción, provinsi dari Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Tersedia di: www.scielo.org.