VOGEL-JOHNSON AGAR: ALASAN, PERSIAPAN, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The agar Vogel-Johnson merupakan media selektif dan diferensial budaya yang solid, diformulasikan khusus untuk isolasi Staphylococcus aureus. Media ini dibuat oleh Vogel dan Johnson pada tahun 1960 dari modifikasi agar glisin telurit yang diformulasikan pada tahun 1955 oleh Zebovitz, Evans dan Niven.

Modifikasi terdiri dari peningkatan konsentrasi manitol yang ada dalam medium dan penggabungan indikator pH. Formula saat ini terdiri dari triptein, ekstrak ragi, manitol, kalium fosfat, litium klorida, glisin, merah fenol, agar, larutan kalium telurit 1%, dan air.

Sumber: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Perlu dicatat bahwa ada media lain yang, seperti agar Vogel-Johnson, selektif untuk isolasi S. aureus, seperti agar manitol asin dan agar Baird Parker. Dalam pengertian ini, dapat dikatakan bahwa alas bedak agar Vogel-Johnson adalah campuran antara agar manitol asin dan agar Baird Parker.

Pertama, koloni S. aureus dibedakan dengan memfermentasi manitol dan mengubah indikator pH menjadi kuning. Di sisi lain, S. aureus yang kedua ditandai dengan mereduksi telurit menjadi telurium dan membentuk koloni abu-abu menjadi hitam. Kedua sifat tersebut diamati pada agar Vogel-Johnson.

Media ini, seperti mitranya, berguna untuk mendeteksi Staphylococcus aureus dalam sampel makanan, kontrol sanitasi produk industri, dan sampel klinis.

Dasar

Pasokan nutrisi

Media Vogel-Johnson mengandung triptein dan ekstrak ragi; Kedua zat tersebut menyediakan asam amino rantai panjang yang berfungsi sebagai sumber karbon dan nitrogen yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Bakteri yang mampu tumbuh di media ini akan mengambil nutrisi dari zat tersebut.

Kekuatan selektif

Agar Vogel-Johnson mampu menghambat pertumbuhan bakteri Gram negatif dan bahkan beberapa bakteri Gram positif, mendukung perkembangan stafilokokus koagulase positif. Zat penghambatnya adalah kalium telurit, litium klorida, dan glisin.

Daya diferensial

Zat yang membuat media diferensial ini adalah manitol dan kalium telurit. Mannitol adalah karbohidrat, dan ketika difermentasi dihasilkan asam yang membuat medium berubah dari merah menjadi kuning, yang terjadi berkat adanya indikator pH fenol merah.

Sedangkan telurit tak berwarna ketika direduksi menjadi telurium logam bebas, berubah warna menjadi abu-abu tua hingga hitam.

Staphylococcus aureus memfermentasi manitol dan mereduksi telurit menjadi telurium. Oleh karena itu, koloni khas S. aureus dalam medium ini berwarna abu-abu atau hitam yang dikelilingi oleh medium kuning.

Bakteri yang tumbuh pada medium ini dan tidak mereduksi telurit atau fermentasi manitol akan membentuk koloni transparan yang dikelilingi oleh medium berwarna merah, bahkan lebih pekat dari warna aslinya, akibat alkalisasi medium tersebut dengan menggunakan pepton.

Sebaliknya, bakteri yang mereduksi telurit tetapi tidak memfermentasi manitol akan tumbuh sebagai koloni abu-abu atau hitam yang dikelilingi oleh media berwarna merah tua.

Jika media dibuat tanpa penambahan potassium tellurite, koloni S. aureus akan berkembang menjadi koloni kuning, dikelilingi media kuning, seperti pada agar manitol asin.

Keseimbangan osmotik dan zat penguat

Dipotasium fosfat menjaga keseimbangan osmotik media dan mengatur pH ke netralitas 7.2. Sedangkan agar-agar memberikan konsistensi padat pada media kultur.

Persiapan

Larutan kalium telurit 1% b / v

Larutan ini tidak termasuk dalam media dehidrasi, karena tidak dapat disterilkan dalam autoklaf. Untuk alasan ini, itu disiapkan secara terpisah dan ditambahkan ke media yang sudah disterilkan.

Beberapa rumah komersial menjual larutan telurit kalium 1% siap pakai. Jika Anda ingin mempersiapkan di laboratorium, lakukan sebagai berikut:

Timbang 1,0 g kalium telurit dan takar 100 ml air suling. Larutkan potassium tellurite dalam bagian air lalu lengkapi jumlah airnya hingga mencapai 100 ml. Sterilkan larutan dengan metode filtrasi.

Media Dasar Agar Vogel-Johnson

Timbang 60 gr medium dehidrasi tersebut, dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran dipanaskan sampai mendidih untuk membantu pelarutan sempurna. Selama proses pelarutan, media sering diaduk.

Sterilkan dalam autoclave pada tekanan 15 pound dan 121 ° C selama 15 menit. Keluarkan dari autoclave dan diamkan hingga medium mencapai suhu kira-kira 45 hingga 50 ° C. Tambahkan 20 ml larutan kalium telurit 1% yang telah disiapkan sebelumnya.

Campur dan tuang ke dalam cawan Petri steril. Biarkan mengeras dan pesan terbalik pada pemegang piring untuk kemudian disimpan di lemari es sampai digunakan.

PH akhir dari media yang disiapkan harus 7,2 ± 0,2.

Sebelum menabur sampel, tunggu piring mencapai suhu kamar.

Warna media yang disiapkan berwarna merah.

Menggunakan

Meskipun dapat digunakan untuk isolasi S. aureus dalam semua jenis sampel, ini terutama digunakan untuk analisis mikrobiologi produk farmasi, kosmetik dan makanan.

Disarankan agar inokulumnya padat. Penyemaian dapat dilakukan dengan mencetak dengan pegangan platina atau dengan permukaan dengan spatula Drigalski.

Pelat diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam aerobiosis.

QA

Strain kontrol berikut dapat digunakan untuk melakukan kontrol kualitas pada media Vogel-Johnson:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 atau Proteus mirabilis ATCC 43071.

Hasil yang diharapkan adalah sebagai berikut: untuk strain S. aureus pertumbuhan memuaskan dengan koloni hitam dikelilingi media kuning. Untuk S. epidermidis tumbuh teratur dengan koloni bening atau hitam dikelilingi media merah.

Demikian juga, penghambatan total diharapkan untuk E. coli, dan penghambatan parsial atau total untuk Proteus mirabilis; jika tumbuh maka tumbuh sedikit dan koloni akan berwarna hitam dikelilingi oleh warna merah.

Referensi

1. Laboratorium BD. VJ (Vogel dan Johnson Agar). 2006. Tersedia di: bd.com
2. Laboratorium Britannia. Vogel- Johnson Agar. 2015. Tersedia di: britanialab.com
3. Laboratorium Britannia. Potasium telurit. 2015. Tersedia di: britania.com
4. Laboratorium Himedia. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Tersedia di: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel- Basis Agar Johnson. Manual Mikrobiologi Merck. Edisi 12, hlm 502-503. Tersedia di: Pengguna / Tim / Unduhan
6. Kontributor Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia a ensiklopedia gratis, tersedia di: wikipedia.org.
7. Perjanjian Standar Venezuela 1292-89. (1989). Makanan. Isolasi dan pencacahan Staphylococcus aureus. Tersedia di: sencamer.gob.ve