THAYER MARTIN AGAR: ALAS BEDAK, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The agar Thayer Martin itu adalah media selektif sangat bergizi dan padat untuk isolasi Neisseria meningitidis dan Neisseria gonorrhoeae; keduanya dikenal sebagai Neisserias patogen atau penting secara klinis.

Salah satu karakteristik khusus terpenting dari Thayer Martin Agar adalah kandungan suplemen nutrisinya yang tinggi. Sifat ini penting, karena Neisserias adalah mikroorganisme yang sangat menuntut dari sudut pandang nutrisi dan oleh karena itu tidak tumbuh di media umum.

Media bisnis Thayer Martin / Agar Thayer Martin. Sumber Gambar 1: Diambil oleh penulis MSc. Marielsa Gil, gambar 2. Pixinio.com bakteriakolonisasi, dimodifikasi, Thayer, Martin, agar.

Di sisi lain, karena mikroorganisme ini biasanya ditemukan di daerah yang tidak steril, maka penambahan inhibitor diperlukan untuk mencegah pertumbuhan flora yang menyertainya, tanpa mempengaruhi perkembangan genus Neisseria.

Agar ini terdiri dari agar basis GC, hemoglobin, suplemen nutrisi tambahan dan kompleks zat penghambat (antibiotik dan antijamur). Rumah komersial menjual setiap suplemen secara terpisah.

Sampel yang akan disemai dalam media ini akan bergantung pada mikroorganisme yang dicari. Untuk Neisseria gonorrhoeae, spesimen yang ideal adalah cairan vagina dan uretra. Sedangkan untuk Neisseria meningitidis sampel yang paling banyak digunakan adalah eksudat CSF, faring dan nasofaring.

Dasar

Neisserias adalah mikroorganisme yang tergolong mengganggu sehingga sulit diisolasi. Oleh karena itu, Thayer Martín adalah media yang kompleks dan setiap komponennya memenuhi fungsi yang dijelaskan di bawah ini:

Agar basis GC

Agar GC mengandung pepton proteosa, tepung maizena, natrium klorida, kalium fosfat, monopotasium fosfat, dan agar-agar. Komponennya memberikan nutrisi dasar untuk perkembangan mikroba, menetralkan asam lemak beracun, membantu menjaga keseimbangan osmotik, menentukan pH dan memberikan konsistensi padat pada medium.

Hemoglobin

Hemoglobin menyediakan faktor V dan X (nicotinamide adenine dinucleotide NAD dan hemin masing-masing). Oleh karena itu, spesies Haemophilus juga tumbuh di media ini. Hemoglobin dapat diperoleh secara komersial dalam bentuk dehidrasi atau darah sapi segar yang didefibrinasi dapat ditambahkan ke medium.

Suplemen pengayaan

Di sisi lain, suplemen pengayaan juga harus ditambahkan ke media Thayer-Martin, karena nutrisi yang terkandung dalam agar dasar tidak mencukupi kebutuhan genus Neisseria.

Suplemen pengayaan yang paling umum digunakan disebut isovitalex. Ini mengandung glutamin, adenin, NAD, cocarboxylase, guanine, ferric nitrate, p-amino benzoic acid, vitamin B12, tiamin, dan glukosa. Semua senyawa ini diperlukan untuk perkembangan Neisseria patogen yang tepat.

Penghambat

Karena ini adalah media bergizi tinggi, inhibitor harus digunakan untuk mencegah pertumbuhan mikroorganisme dari flora biasa di daerah tersebut dan dengan demikian mendukung isolasi genus Neisseria.

Kompleks inhibitor terdiri dari vankomisin, kolistin, dan nistatin. Vankomisin menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif, colistin mencegah pertumbuhan bakteri Gram negatif seperti Pseudomonas dan beberapa neisserias saprofit, dan nistatin bekerja pada ragi seperti Candida albicans.

Namun, Thayer Martin Agar kemudian dimodifikasi; Perubahan tersebut terdiri dari penambahan trimetoprim, penambahan jumlah agar dan penambahan glukosa ekstra. Perubahan ini secara signifikan meningkatkan pemulihan spesies Neisseria gonorrhoeae.

Perlu dicatat bahwa trimetoprim menghambat pertumbuhan genus Proteus dan akibatnya pembentukan kawanan. Dalam pengertian ini, antibiotiklah yang memberikan karakter selektif pada medium Thayer Martin.

Persiapan

Agar Thayer Martin asli

-GC agar

Timbang 8,2 g medium GC dehidrasi dan sisihkan dalam 100 ml. Campur dan rebus selama 1 menit dengan sering diaduk hingga larut sepenuhnya. Sterilkan campuran dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit.

- 2% hemoglobin

Tangguhkan 2 g hemoglobin dehidrasi dalam 2 atau 3 ml air suling panas sampai terbentuk campuran yang seragam. Tambahkan sedikit demi sedikit air untuk menyelesaikan volume 100 ml. Suspensi harus homogen sebelum disterilkan.

Sterilkan dalam autoclave selama 15 menit.

Suplemen pengayaan

Gabungkan kembali botol komersial dengan pengencer yang disediakan oleh perusahaan komersial yang sama. Campur dengan baik. Jumlah pengencer yang digunakan akan ditentukan dalam instruksi kit.

Suplemen penghambat -VCN (vankomisin, colistin, nistatin)

Gabungkan kembali botol dengan pengencer yang disediakan oleh perusahaan komersial. Campur dengan baik. Jumlah pengencer yang digunakan akan ditentukan dalam instruksi kit.

-Siap

Untuk setiap 100 ml agar GC, lakukan sebagai berikut:

Saat GC agar meninggalkan autoklaf, biarkan dingin hingga suhu sekitar 50 ° C dan tambahkan 2 ml larutan hemoglobin yang telah disiapkan, 2 ml suplemen pengayaan (isobitalex atau britalex), dan 2 ml suplemen penghambat. Campur dan sajikan dalam cawan Petri steril.

Biarkan mengeras dan simpan di lemari es sampai digunakan.

Warna media yang disiapkan adalah merah ceri. PH akhir media adalah 7,2 ± 0,2

Agar Thayer Martin yang dimodifikasi

Timbang 8,2 g medium GC dehidrasi dan sisihkan dalam 100 ml. Tambahkan 1 g agar-agar dan tambahkan 0,3 g glukosa. Campur dan rebus selama 1 menit dengan sering diaduk hingga larut sepenuhnya. Sterilkan campuran dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit.

Siapkan hemoglobin dan suplemen pengayaan seperti yang telah dijelaskan sebelumnya.

Suplemen supresi yang digunakan adalah VCNT (vankomisin, kolistin, nistatin, trimetoprim).

-Siap

Lanjutkan seperti yang dijelaskan untuk agar Thayer Martin asli.

Menggunakan

Thayer Martin Agar harus dibiarkan hangat sebelum spesimen digores. Sampel yang umum digunakan adalah usap faring, usap hidung, cairan vagina, uretra, dan / atau rektal, dan CSF.

Gunakan sampel segar dan buat inokulum kuat pada agar-agar. Sampel disemai langsung dengan pembuangan material dan kemudian kelelahan dilemparkan ke permukaan.

Pelat diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam tabung mikroaerofilik (5% CO ₂ ). Pada akhir waktu inkubasi, pelat diperiksa untuk koloni kecil, abu-abu, dan terkadang tampak berlendir.

Lakukan uji Gram dan biokimia konfirmasi pada koloni yang mencurigakan.

QA

Strain mikroba berikut dapat digunakan untuk pengendalian kualitas Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 dan Neisseria meningitidis ATCC 13090; perkembangan yang memuaskan diharapkan pada kedua strain.

Strain berikut juga harus dimasukkan: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 dan Candida albicans ATCC 10231. Pada semuanya, diharapkan terjadi penghambatan total atau parsial dalam media ini.

Batasan

-Kita harus ingat bahwa bakteri yang resisten terhadap inhibitor yang digunakan dapat tumbuh di media.

-Ada strain Neisseria gonorrhoeae yang sensitif terhadap konsentrasi vankomisin yang digunakan. Untuk alasan ini, dianjurkan untuk menggunakan agar coklat yang dilengkapi dengan isovitalex, tetapi tanpa inhibitor.

-Ada strain ragi tahan nistatin yang dapat tumbuh di media ini dan mengganggu isolasi Neisserias patogen, terutama gonococci.

Referensi

1. Laboratorium Diagnostik Valtek. Thayer-Martin Agar. 2016. Tersedia di: com
2. Laboratorium Britannia. Thayer Martin Medium Dimodifikasi. 2010. Tersedia di: britanialab.com
3. Kontributor Wikipedia. Agar Thayer-Martin. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 26 Oktober 2017, 16:33 UTC. Tersedia di: wikipedia.org 4. Diakses 28 Februari 2019.
4. Laboratorium Britannia. Agar GC. 2010. Tersedia di: britanialab.com.
5. Laboratorium Pengayaan Sedang BBL ™ untuk Mikroorganisme Pemarah. 1999. Tersedia di: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.