AGAR DARAH: ALASAN, PENGGUNAAN DAN PERSIAPAN - BIOLOGI - 2025

The agar darah adalah media kultur padat diperkaya diferensial tapi selektif. Ini digunakan untuk pemulihan dan pertumbuhan berbagai macam mikroorganisme dari sampel klinis atau untuk subkultur.

Agar darah klasik harus disertakan untuk penyemaian sebagian besar sampel klinis yang diterima di laboratorium; kecuali untuk sampel tinja yang tidak berguna, kecuali disiapkan dengan modifikasi tertentu.

Piring agar darah

Media kultur ini pada dasarnya terdiri dari agar basa yang diperkaya dan 5% darah. Basa agar dapat bervariasi sesuai dengan kebutuhan, tetapi terutama terdiri dari pepton, asam amino, vitamin, ekstrak daging, natrium klorida, agar, dan lain-lain.

Sedangkan untuk darah, biasanya diperlukan kontak dengan vivarium untuk mendapatkan darah dari hewan, seperti domba, kelinci atau kuda. Namun, hal ini tidak selalu memungkinkan dan darah manusia terkadang digunakan.

Media agar darah dapat disiapkan di laboratorium atau dapat dibeli siap pakai dari perusahaan khusus. Penyiapan media ini adalah salah satu yang paling rumit, setiap kecerobohan dalam penyiapannya akan mengakibatkan bets terkontaminasi.

Itulah mengapa semua tindakan pencegahan yang mungkin harus dilakukan dan pada akhirnya kontrol kualitas harus dilakukan dengan menginkubasi pada 37 ° C 1 piring untuk setiap 100 yang disiapkan.

Dasar

Staphylococcus aureus dikultur pada agar darah. Nathan Reading di Flickr Nathan R. di Twitter, melalui Wikimedia Commons Telah disebutkan bahwa agar darah memiliki karakteristik sebagai media yang diperkaya, berbeda dan tidak selektif. Dasar untuk setiap properti ini dijelaskan di bawah.

Agar darah adalah media yang diperkaya karena mengandung 5-10% darah pada basis agar-agar sebagai bahan tambahan utamanya. Kedua senyawa tersebut mengandung banyak nutrisi dan sifat ini memungkinkan sebagian besar bakteri yang dapat dibudidayakan untuk tumbuh di dalamnya.

Pertumbuhan itu terjadi tanpa batasan; untuk alasan ini tidak selektif. Namun, jika senyawa ditambahkan ke media ini yang mencegah pertumbuhan beberapa mikroorganisme dan mendukung mikroorganisme lain, itu menjadi selektif. Ini adalah kasus jika beberapa jenis antibiotik atau antijamur ditambahkan.

Demikian juga, agar darah adalah media diferensial, karena memungkinkan pembedaan 3 jenis bakteri: beta-hemolitik, alfa-hemolitik dan gamma-hemolitik.

Beta-hemolitik adalah mereka yang memiliki kemampuan untuk melisiskan atau menghancurkan sel darah merah sepenuhnya, membentuk lingkaran cahaya yang jelas di sekitar koloni, oleh karena itu mereka menghasilkan ß atau ß -hemolisis dan mikroorganisme tersebut disebut ß-hemolitik.

Contoh bakteri ß-hemolitik adalah Streptococcus pyogenes dan Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolitik adalah yang melakukan hemolisis parsial, di mana hemoglobin dioksidasi menjadi methemoglobin, menghasilkan warna kehijauan di sekitar koloni. Fenomena ini dikenal sebagai α atau α -hemolisis dan bakteri diklasifikasikan sebagai α - hemolitik.

Contoh bakteri α-hemolitik adalah Streptococcus pneumoniae dan Streptococcus dari kelompok viridans.

Terakhir, ada yang disebut bakteri gamma-hemolitik atau non-hemolitik. Ini tumbuh pada agar tanpa menghasilkan perubahan padanya, efek yang dikenal sebagai γ -hemolisis, dan mikroorganisme adalah γ -hemolitik.

Contoh bakteri γ-hemolitik: beberapa strain Streptococcus grup D (Streptococcus bovis dan Enterococcus faecalis).

Aplikasi

Media kultur agar darah adalah salah satu yang paling umum digunakan di laboratorium mikrobiologi.

Di antara mikroorganisme yang mampu tumbuh dalam media agar darah adalah: bakteri aerobik ketat, fakultatif, mikroaerofilik, anaerobik, Gram positif atau Gram negatif, bakteri yang tumbuh cepat atau tumbuh lambat.

Beberapa bakteri yang menuntut nutrisi atau rewel juga tumbuh, begitu pula jamur dan ragi. Demikian juga, berguna untuk subkultur atau mengaktifkan kembali strain yang secara metabolik sangat lemah.

Namun, pilihan golongan darah dan agar dasar akan bervariasi tergantung pada kemungkinan mikroorganisme yang dicurigai pulih dan penggunaan plat yang akan digunakan (kultur atau antibiotikogram).

Pilihan golongan darah

Darahnya bisa domba, kelinci, kuda, atau manusia.

Yang paling direkomendasikan adalah darah domba, dengan beberapa pengecualian. Misalnya untuk mengisolasi spesies Haemophilus, dimana darah yang dianjurkan adalah darah kuda atau kelinci, karena darah domba mempunyai enzim yang menghambat faktor V.

Yang paling tidak direkomendasikan adalah manusia, namun yang paling banyak digunakan, mungkin karena paling mudah didapat.

Darah harus didefibrinasikan, diperoleh tanpa jenis aditif apa pun dan dari hewan sehat. Untuk penggunaan darah manusia, beberapa faktor harus diperhatikan:

Jika darah berasal dari individu yang pernah mengalami infeksi bakteri, mereka akan memiliki antibodi spesifik. Dalam kondisi seperti ini pertumbuhan beberapa bakteri kemungkinan besar akan terhambat.

Jika diperoleh dari bank darah, itu mengandung sitrat dan bakteri tertentu mungkin tidak tumbuh di hadapannya. Di sisi lain, jika darah berasal dari pasien yang mengonsumsi antibiotik, pertumbuhan bakteri yang rentan dapat terhambat.

Dan jika darah berasal dari penderita diabetes, kelebihan glukosa mengganggu perkembangan pola hemolisis.

Pilihan jenis agar dasar

Agar dasar yang digunakan untuk pembuatan agar darah bisa sangat luas. Diantaranya adalah: nutrient agar, agar infus jantung otak, trypticase soy agar, Müeller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, Brucella agar, Campylobacter agar, dll.

Kegunaan agar darah sesuai dengan media dasar yang digunakan untuk pembuatannya

Agar nutrisi

Basa ini paling sedikit digunakan, karena terutama akan menumbuhkan bakteri non-permintaan, seperti basil enterik, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, dan lain-lain. Tidak disarankan untuk mengisolasi Streptococcus.

Brain Heart Infusion Agar (BHI)

Ini adalah salah satu yang paling banyak digunakan sebagai dasar untuk agar darah, karena mengandung nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan sebagian besar bakteri, termasuk Streptococcus sp dan bakteri lain yang membutuhkan. Meskipun tidak tepat untuk mengamati pola hemolisis.

Darah domba umumnya digunakan dengan basis ini.

Varian agar darah juga dapat dibuat, di mana senyawa lain ditambahkan untuk mengisolasi mikroorganisme tertentu. Misalnya, Agar Infus Jantung Otak yang dilengkapi dengan darah kelinci, sistin, dan glukosa dapat digunakan untuk mengisolasi Francisella tularensis.

Sedangkan dengan cystine tellurite berguna untuk isolasi Corynebacterium diphteriae. Darah manusia atau domba bisa digunakan.

Dengan beta-hemolisis pertama akan terlihat sebagai halo sempit, sedangkan dengan yang kedua halo akan jauh lebih luas.

Demikian juga, basa ini, bersama dengan bacitracin, pati jagung, darah kuda dan suplemen pengayaan lainnya (IsoVitaleX), digunakan untuk mengisolasi genus Haemophilus sp dari sampel pernapasan.

Juga, jika kombinasi antibiotik kloramfenikol - gentamisin atau penisilin - streptomisin dengan darah kuda ditambahkan, ini sangat ideal untuk isolasi jamur patogen yang menuntut, bahkan dengan hasil yang lebih tinggi daripada agar glukosa Sabouraud. Ini sangat berguna dalam isolasi Histoplasma capsulatum.

Agar kedelai triptikase

Basis ini paling direkomendasikan untuk pengamatan yang lebih baik dari pola hemolisis dan untuk melakukan tes diagnostik seperti taksa optoquine dan bacitracin. Ini adalah agar darah klasik yang digunakan secara rutin.

Dengan bahan dasar ini Anda juga dapat menyiapkan agar darah khusus untuk Corynebacterium diphteriae, dengan cystine tellurite dan darah domba .

Begitu pula kombinasi agar-agar ini dengan darah domba ditambah kanamycin-vancomycin sangat ideal untuk pertumbuhan anaerob, khususnya Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Basis ini ditambah dengan darah digunakan untuk melakukan antibiotikogram dari mikroorganisme yang rewel, seperti Streptococcus sp.

Berguna juga untuk isolasi bakteri seperti Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Media ini ideal sebagai bahan dasar agar darah bila diduga genus Neisseria, terutama Neisseria meningitidis, karena N. gonorrhoeae tidak tumbuh pada agar darah.

Ini juga digunakan untuk menguji kerentanan terhadap Neisseria meningitidis.

Columbia agar

Basis ini sangat baik untuk pembibitan spesimen biopsi lambung untuk Helicobacter pylori.

Media dibuat dengan menambahkan 7% darah domba yang didefibrinasi dengan antibiotik (vankomisin, trimetoprim, amfoterisin B dan cefsulodin) untuk membatasi pertumbuhan jenis bakteri lain yang mungkin ada.

Basa yang sama ini ditambah dengan darah manusia atau domba, asam nalidixic dan colistin berguna untuk mengisolasi Gardnerella vaginalis. Ini juga ideal untuk menilai kerentanan antimikroba terhadap antibiotik dari mikroorganisme yang sama.

Selain itu, digunakan untuk pembuatan agar darah untuk budidaya anaerob, menambahkan aminoglikosida dan vankomisin.

Basis ini memungkinkan pengamatan yang tepat dari pola hemolisis.

Brucella agar

Media ini digunakan sebagai bahan dasar agar darah bersama dengan penambahan vitamin K sangat ideal untuk budidaya bakteri anaerob. Dalam hal ini, penggunaan darah domba sangat dianjurkan.

Campylobacter agar

Campylobacter agar yang dilengkapi dengan 5% darah domba dan 5 antibiotik (sefalothin, amfoterisin B, trimetoprim, polimiksin B dan vankomisin), merupakan media yang digunakan untuk mengisolasi Campylobacter jejuni dalam sampel tinja.

Persiapan

Setiap rumah komersial membawa instruksi untuk menyiapkan satu liter media kultur di bagian belakang wadah. Perhitungan yang sesuai dapat dibuat untuk menyiapkan jumlah yang diinginkan, tergantung pada agar dasar yang dipilih.

Timbang dan larutkan

Basa agar didehidrasi (berbentuk bubuk), oleh karena itu harus dilarutkan dalam air suling yang disesuaikan dengan pH 7,3.

Jumlah yang ditunjukkan oleh agar dasar yang dipilih ditimbang dan dilarutkan dalam jumlah yang sesuai dengan air di dalam labu, kemudian dipanaskan dengan api sedang dan dicampur dengan gerakan memutar sampai semua bubuk larut.

Mensterilkan

Setelah larut, sterilkan dalam autoclave dengan suhu 121 ° C selama 20 menit.

Agregat darah

Saat meninggalkan autoklaf, labu dibiarkan dingin hingga suhu berkisar antara 40 hingga 50 ° C; Ini adalah suhu yang didukung kulit manusia dan pada saat yang sama agar-agar belum mengeras.

Untuk melakukan ini, labu disentuh dengan tangan dan jika panasnya dapat ditoleransi, itu adalah suhu yang ideal untuk menambahkan darah yang didefibrinasi dalam jumlah yang sesuai (50 ml untuk setiap liter agar). Aduk perlahan untuk menghomogenkan.

Aliran agregasi darah sangat penting, karena jika dilakukan saat medium sangat panas, sel darah merah akan rusak dan medium tersebut tidak akan digunakan untuk mengamati hemolisis.

Jika ditambahkan terlalu dingin, media akan menggumpal dan permukaan media tidak akan mulus untuk penilaian yang tepat.

Tuang ke dalam cawan petri

Sajikan dalam cawan Petri steril segera setelah darah dihomogenisasi. Kira-kira 20 ml dituang ke setiap cawan petri. Prosedur ini dilakukan di dalam kap aliran laminar atau di dekat burner.

Saat menyajikan agar darah di cawan Petri, tidak ada gelembung udara yang tertinggal di permukaan cawan. Jika ini terjadi, nyala api pembakar Bunsen dilewatkan dengan cepat ke atas piring untuk menghilangkannya.

Pelat dibiarkan mengeras dan disimpan dalam lemari es (2-8 ° C) terbalik sampai digunakan. Sebelum menggunakan plat agar darah, plat tersebut harus di temper (dibiarkan mencapai suhu ruangan) untuk disemai.

Piring yang disiapkan bertahan kurang lebih 1 minggu.

Referensi

1. Bayona M. Kondisi mikrobiologi untuk kultur Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinis praktis. University of Cadiz, edisi ke-2. Layanan Publikasi UCA.
3. "Agar darah." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 10 Des 2018, 14:55 UTC. 27 Des 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
5. Pusat Diagnostik Hewan Laboratorium CEDIVET. Guatemala. Tersedia di: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA