IBU AGAR: ALAS BEDAK, PERSIAPAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The MRS agar adalah budaya medium padat selektif digunakan untuk isolasi dan enumerasi bakteri asam laktat, terutama dari genus Lactobacillus. Agar ini dibuat pada tahun 1960 oleh Man, Rogosa dan Sharpe, dengan nama yang sama, tetapi karena kerumitannya, singkatan MRS sering digunakan.

Ini terdiri dari pepton proteosa, ekstrak daging, ekstrak ragi, glukosa, sorbitan monoleat, kalium fosfat, natrium asetat, amonium sitrat, magnesium sulfat, mangan sulfat, dan agar.

Man Rogosa dan Sharpe Agar (MRS) diunggulkan dengan Lactobacillus sp. Sumber: Foto yang disumbangkan untuk artikel ini oleh penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto diambil selama investigasi berjudul: Evaluasi bakteri asam laktat dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan kotoran bayi .

Komposisi ini memungkinkan perkembangan bakteri asam laktat yang tepat dari sampel klinis, seperti feses, keputihan, sampel oral dan ASI, serta makanan olahan susu dan daging.

Ini tidak digunakan secara rutin di laboratorium klinis, karena bakteri asam laktat jarang terlibat dalam proses penyakit. Namun di bidang mikrobiologi pangan, penggunaan agar MRS lebih sering.

Di sisi lain, media ini digunakan oleh beberapa Pusat Penelitian yang bertujuan untuk mempelajari bakteri asam laktat.

Dasar

Agar Man, Rogosa dan Sharpe memiliki komposisi yang cukup kompleks. Dengan merinci fungsi masing-masing komponennya, maka pondasinya dapat dijelaskan.

Pepton proteosa, ekstrak daging, ekstrak ragi dan glukosa adalah nutrisi yang menyediakan sumber karbon, nitrogen, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Selain itu, glukosa merupakan sumber energi universal yang digunakan di sebagian besar media kultur.

Di sisi lain, untuk mendukung pertumbuhan bakteri asam laktat, diperlukan adanya kofaktor (kation) penting dalam metabolisme Lactobacillus dan bakteri terkait; Senyawa ini adalah garam natrium, magnesium, dan mangan.

Demikian juga, sorbitan monoleat atau polisorbat 80 merupakan sumber asam lemak yang penting karena diserap sebagai nutrisi.

Selanjutnya sorbitan monoleat dan amonium sitrat bekerja dengan menghambat perkembangan flora yang menyertainya, terutama bakteri Gram negatif, memberikan sifat selektif agar-agar ini.

Terakhir, agar-agar adalah yang memberikan konsistensi padat pada medium.

Ada varian lain agar Man Rogosa Sharpe; salah satunya dilengkapi dengan sistein (MRSc), yang sangat berguna untuk isolasi bifidobakteri, di antara mikroorganisme lainnya. Di sisi lain, terdapat media MRS yang dilengkapi dengan neomisin, paromomisin, asam nalidiksat dan litium klorida, khusus untuk penghitungan selektif bifidobakteri dalam produk susu.

Persiapan

Timbang 68,25 gram media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Diamkan selama 5 menit. Agar larut sepenuhnya, beralihlah ke sumber panas, aduk terus, dan didihkan selama 1 hingga 2 menit. Sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit.

Saat meninggalkan autoclave, diamkan beberapa menit dan distribusikan selagi masih panas dalam cawan petri steril.

Biarkan mengeras dan membalikkan pelat, pesan di rak piring dan dinginkan sampai digunakan. Biarkan piring menghangat hingga suhu kamar sebelum digunakan.

PH media harus 6,4 ± 0,2. Beberapa rumah komersial merekomendasikan pH antara 5,5 hingga 5,9.

Media dehidrasi berwarna krem ​​dan disiapkan berwarna kuning tua.

Baik media dehidrasi dan pelat yang disiapkan harus disimpan pada suhu 2-8 ° C.

Aplikasi

Piring agar MRS dapat diunggulkan di permukaan (kelelahan atau spatula Drigalski). Itu juga bisa ditaburkan dengan kedalaman. Pelat harus diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam mikroaerofilisitas (4% O ₂ dan 5-10% CO ₂ ) selama 24 hingga 72 jam.

Cara penaburan dipilih sesuai dengan tujuan yang diupayakan (isolasi atau penghitungan).

Karakteristik koloni

Koloni dugaan Lactobacillus tumbuh berwarna keputihan dan memiliki tampilan berlendir atau krem ​​pada agar-agar ini. Mereka kemudian harus diidentifikasi.

Isolasi bakteri asam laktat

Untuk ini, penyemaian permukaan digunakan. Sampel yang akan disemai membutuhkan prosedur sebelumnya.

Untuk sampel ASI, disarankan untuk melakukan sentrifugasi pada 1 ml sampel pada 14.000 rpm selama 10 menit, untuk menghilangkan lapisan lemak. 900 µl dibuang, dan sisa 100 µl sedimen tersuspensi dan dituang ke permukaan agar MRS kemudian didistribusikan secara merata dengan spatula Drigalski.

Dalam kasus sampel tinja, satu (1) gram tinja ditimbang dan dihomogenisasi dalam 9 mL air pepton steril 0,1%, sesuai dengan pengenceran 1/10. Kemudian dilakukan pengenceran berseri, hingga pengenceran akhir 10 ^{-4 diperoleh} .

Akhirnya, 100 µl pengenceran 10 ^-2 , 10 ^-3 dan 10 ^-4 diambil dan setiap pengenceran disemai pada agar MRS, didistribusikan secara merata dengan spatula Drigalski.

Jumlah bakteri asam laktat

Dalam hal ini penaburan dilakukan dengan kedalaman.

Untuk sampel ASI, diambil 1 mL dan dimasukkan ke dalam tabung plastik berbentuk kerucut yang steril. MRS agar ditambahkan pada suhu kira-kira 40 ° C hingga volume akhir 25 mL, menghasilkan campuran yang homogen. Selanjutnya dituang ke dalam cawan petri steril dengan cara seragam dan didiamkan sampai terjadi polimerisasi.

Untuk sampel feses, dilakukan pengenceran, seperti dijelaskan sebelumnya. Ambil 1 mL tiap pengenceran dan tempatkan dalam tabung plastik kerucut steril. Agar MRS cair ditambahkan dengan volume 25 mL.

Campuran tiap pengenceran dituang secara merata ke dalam cawan petri steril. Akhirnya, dibiarkan diam sampai polimerisasi.

Jumlah koloni agar Man Rogosa and Sharpe (MRS). Sumber: Foto disumbangkan untuk artikel ini. Penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto diambil selama Penelitian berjudul: Evaluasi bakteri asam laktat dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan tinja bayi.

Tingkat penelitian

Setiap hari studi tentang bakteri asam laktat semakin menarik; Para peneliti secara khusus mencari untuk mempelajari tentang strain baru dan potensinya sebagai fermentasi starter untuk standarisasi dalam pembuatan produk susu, di antara kegunaan lainnya.

Dalam pengertian ini, Alvarado et al. (2007) menggunakan agar MRS untuk melakukan penelitian di mana mereka mengisolasi, mengidentifikasi dan mengkarakterisasi bakteri asam laktat yang ada dalam keju Venezuela asap buatan pengrajin Andes.

Di dalam keju mereka menemukan adanya bakteri dari genera Lactococcus dan Lactobacillus, dan menyimpulkan bahwa campuran strain yang diisolasi cocok sebagai strain starter dalam pembuatan keju dari susu pasteurisasi.

Di sisi lain, Sánchez et al. (2017) menggunakan agar MRS untuk menyelidiki keberadaan bakteri asam laktat di saluran pencernaan anak babi, untuk digunakan sebagai probiotik asli yang meningkatkan produktivitas anak babi yang sehat.

Dengan media ini mereka berhasil mengisolasi empat spesies: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae dan Pediococcus pentosaceus.

Demikian juga, Báez et al. (2019) menggunakan agar MRS untuk mengevaluasi bakteri asam laktat (BAL) dan bifidobakteri dengan potensi probiotik dalam ASI dan feses bayi.

Mereka berhasil mengisolasi 11 BAL dan 3 Bifidobacteria sp dalam ASI, serta 8 BAL dan 2 Bifidobacteria sp. dalam tinja. Semua memenuhi parameter tertentu yang membuktikannya sebagai bakteri dengan aktivitas probiotik.

Penulis menyimpulkan bahwa ASI dan kotoran dari bayi yang mendapat ASI eksklusif berfungsi sebagai sumber alami dari bakteri probiotik.

QA

Untuk mengevaluasi kualitas agar MRS, strain kontrol seperti:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli dan Bacillus cerei.

Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan untuk 6 bakteri pertama, sedangkan E. coli dan Bacillus cereus harus dihambat sepenuhnya.

Referensi

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolasi, Identifikasi dan Karakterisasi Bakteri Asam Laktat dari Keju Artisan Andes Asap Venezuela. Penggunaannya sebagai Budaya Pemula. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Tersedia di: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolasi Bakteri Asam Laktat dari Saluran Pencernaan Babi. Pdt. Investigasi dokter hewan. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Tersedia di: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M.Evaluasi bakteri asam laktat dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan tinja bayi di kotamadya Acevedo, Miranda 2017. Pekerjaan sarjana untuk memenuhi syarat gelar Sarjana di Bioanalisis. Universitas Carabobo, Venezuela.
4. Laboratorium Britannia. MRS agar. 2015. Tersedia di: britanialab.com
5. Kontributor Wikipedia. MRS agar. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 10 Januari 2018, 19:44 UTC. Tersedia di: wikipedia.org Diakses 17 Februari 2019.
6. Roy D. Media isolasi dan pencacahan bifidobacteria pada produk susu. Microbiol Makanan Int J, 200128; 69 (3): 167-82.