The agar Endo atau Endo media adalah medium padat, diferensial dan dengan beberapa derajat budaya selektivitas. Formula asli dibuat oleh Endo pada tahun 1904 untuk membedakan fermentasi laktosa dari bakteri non-fermentasi. Awalnya media dirancang untuk isolasi Salmonella typhi, tetapi kemudian tujuan media beralih ke pencarian koliform.
Prinsip Endo Agar tetap ada, tetapi formulasinya telah mengalami banyak perubahan selama bertahun-tahun. Saat ini media terdiri dari pencernaan peptik jaringan hewan, laktosa, kalium hidrogen fosfat, natrium sulfit, fuchsin basa, dan agar.
J: Virgin Endo Agar B: Agar Endo Berbiji, di tengah agar Anda dapat melihat kilau logam dari strain E. coli. Sumber: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Penggunaan utama media telah dikaitkan dengan isolasi dan diferensiasi basil Gram negatif dari famili Enterobacteriaceae dan famili dekat lainnya.
Untuk waktu yang lama digunakan dalam mendeteksi koliform dalam sampel air, susu dan makanan, tetapi saat ini penggunaan media ini telah digantikan oleh orang lain dengan fungsi serupa. Namun, beberapa laboratorium mikrobiologi menggunakan agar ini untuk mengisolasi Enterobacteriaceae dari sampel asal klinis.
Dasar
Endo agar mengandung pepton yang berfungsi sebagai sumber asam amino, nitrogen, karbon, dan energi, yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisme ringan.
Di sisi lain, karakter agar-agar yang sedikit selektif disediakan dengan penambahan natrium sulfit dan fuchsin basa; kedua komponen tersebut secara parsial atau total menghambat pertumbuhan sebagian besar bakteri Gram positif.
Sifat diferensial diberikan oleh adanya karbohidrat yang dapat difermentasi, yang dalam hal ini adalah laktosa dan fuchsin basa, yang juga berfungsi sebagai indikator pH.
Bakteri gram negatif yang tumbuh pada agar ini dan mampu memfermentasi laktosa akan membentuk koloni merah muda yang kuat; menjadi patognomonik dari Escherichia coli pembentukan koloni merah tua dengan kilau logam kehijauan warna-warni. Ini karena produksi asam yang tinggi dari fermentasi karbohidrat.
Perlu diperhatikan bahwa media di sekitar koloni juga berubah menjadi warna merah muda yang kuat. Sedangkan batang Gram negatif yang berfermentasi non laktosa membentuk koloni berwarna merah muda pucat mirip sedang atau tidak berwarna.
Dipotasium hidrogen fosfat menyeimbangkan pH media dan agar-agar adalah komponen yang memberikan konsistensi padat.
Persiapan
Endo agar
Timbang 41,5 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Panaskan campuran dengan sering diaduk sampai mediumnya benar-benar larut. Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C, pada tekanan 15 lb, selama 15 menit.
Saat mengeluarkan dari autoclave, biarkan dingin hingga suhu kira-kira 45-50 ° C, kocok campuran agar homogen sebelum disajikan. Tuang 20 ml ke dalam cawan petri steril.
Biarkan piring mengeras, terbalik dan simpan dalam plaquero atau bungkus dengan kertas gelap sebelum disimpan di lemari es. Sangat penting untuk melindungi media yang disiapkan dari cahaya langsung. Praktik terbaik adalah menyiapkan jumlah persis yang akan Anda butuhkan.
Jika disimpan di lemari es, piring harus dibiarkan hangat sebelum digunakan.
PH media harus antara 7,2 hingga 7,6 dan warna media yang disiapkan adalah merah muda pucat.
Varian agar M-Endo
Ada versi lain dari agar Endo (m-Endo) yang mengikuti rumus McCarthy, Delaney dan Grasso, yang mengandung lebih banyak senyawa dan bervariasi dalam bentuk sediaan.
Varian ini mengandung: laktosa, triptosa, pencernaan enzimatis kasein, pencernaan enzimatik jaringan hewan, natrium klorida, kalium fosfat dibasa, natrium sulfit, ekstrak ragi, kalium fosfat monobasik, fuchsin basa, natrium deoksikolat, lauril sulfat natrium dan agar.
Dalam hal ini, 51 g media dehidrasi ditimbang dan disuspensikan dalam 1 liter air suling yang mengandung 20 ml etanol.
Panaskan sebentar sambil diaduk hingga medium larut sepenuhnya. Seharusnya tidak terlalu panas dan tidak boleh diautoklaf. Setelah campuran menjadi homogen, sajikan dalam cawan petri steril dan biarkan mengeras.
Menggunakan
Di beberapa negara masih digunakan untuk menghitung total dan fecal coliforms pada sampel makanan dan air, terutama keberadaan Escherichia coli sebagai indikator utama kontaminasi feses.
M-Endo Agar direkomendasikan oleh American Public Health Association (APHA) untuk pemantauan dan pengendalian program desinfeksi dan pengolahan air limbah, serta dalam evaluasi kualitas air minum.
Metode yang paling banyak digunakan adalah filtrasi membran, setelah sampel diperkaya dengan kaldu Lauryl sulfate selama 2 sampai 4 jam.
Ini juga dapat digunakan sebagai pengganti agar EMB dalam analisis mikrobiologi makanan dan air dengan teknik angka paling mungkin (MPN), khususnya dalam fase konfirmasi lengkap untuk menguatkan keberadaan E. coli dari kaldu EC yang keruh.
QA
Strain kontrol yang dikenal atau bersertifikat ditaburkan untuk menilai kualitas batch agar Endo yang disiapkan.
Di antara strain yang dapat digunakan untuk tujuan ini adalah: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 117003 dan CC153CC 117003 dan Enter CC153CC 117003 .
Strain diunggulkan dengan kelelahan dan diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.
Hasil yang diharapkan adalah:
- Untuk Escherichia coli: koloni merah kuat, dengan kilau logam.
- Untuk E. cloacae dan K. pneumoniae koloni harus mukoid merah muda.
- Dalam kasus S. typhimurium, S. flexneri dan P. mirabilis, koloni biasanya berwarna merah muda pucat atau tidak berwarna.
- Akhirnya, E. faecalis diharapkan terhambat sebagian, oleh karena itu pertumbuhannya harus buruk dengan koloni merah jambu yang sangat kecil dan kuat.
Batasan
Media -Endo memiliki daya selektif yang rendah, oleh karena itu dimungkinkan beberapa mikroorganisme Gram positif seperti Staphylococcus, Enterococcus bahkan khamir dapat tumbuh.
Bakteri lain yang tidak termasuk famili Enterobacteriaceae dapat berkembang di media ini, seperti Pseudomonas sp dan Aeromonas sp. Ciri-ciri strain ini adalah koloni tak beraturan yang tidak berwarna.
-Media yang disiapkan ini sangat sensitif terhadap cahaya, oleh karena itu, paparan yang lama terhadapnya akan memperburuk sistem indikator, merusak media secara permanen.
-Komponen medium dianggap karsinogenik, oleh karena itu kontak langsung harus dihindari.
-Media dehidrasi sangat higroskopis dan harus disimpan dalam wadah aslinya pada suhu kamar, tertutup rapat dan di lingkungan yang kering.
Referensi
- Laboratorium BD. Endo Agar. 2013. Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Neogen. M Endo Agar. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 7 Sep 2017, 08:27 UTC. 28 Feb 2019, 22:55. Tersedia di: en.wikipedia.
- Laboratorium MercK. Endo agar. 2019. Tersedia di: merckmillipore.com
- Laboratorium Lembar Teknis. M –Lakukan Agar LES. 2015. Tersedia di: liofilchem.net